橘葉藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

劉傳夫，石俊英

（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355）

橘葉藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

劉傳夫，石俊英

（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355）

目的建立橘葉藥材的質(zhì)量控制方法。方法對(duì)全國(guó)不同產(chǎn)地10批橘葉藥材進(jìn)行了生藥學(xué)研究；采用高效液相色譜法建立了橘葉藥材中橙皮苷的含量測(cè)定方法；對(duì)10批橘葉藥材進(jìn)行了水分、灰分、浸出物含量測(cè)定。結(jié)果選定的高效液相色譜法分離度好，回歸方程來(lái)Y＝2 857 969X－69 458，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 6；制定了水分、灰分、浸出物含量檢測(cè)限。結(jié)論建立的質(zhì)控方法簡(jiǎn)便易行、重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果真實(shí)可靠，可用于橘葉藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

橘葉；橙皮苷；質(zhì)量控制

橘葉為蕓香科植物橘（Citrus reticulata Blanco）及其栽培變種的干燥葉，全年可采，以12月至次年2月間采者為佳，采后陰干或曬干。橘葉性平、味苦、辛，具有疏肝、行氣、化痰、消腫毒之功效，用于肋痛、乳癰、肺癰、咳嗽、胸膈脾滿、疝氣等癥。橘葉應(yīng)用歷史悠久，《本草綱目》、《本草匯言》、《本草從新》等醫(yī)書(shū)中都有記載?，F(xiàn)代也常被配方使用，許多中成藥中應(yīng)用了橘葉［1］。橘葉主要含有揮發(fā)油、碳水化合物、黃酮類等成分，其質(zhì)量控制相關(guān)研究較少［2～4］。本文對(duì)全國(guó)不同產(chǎn)地的10批橘葉藥材的性狀、顯微、水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物、橙皮苷含量測(cè)定等進(jìn)行了系統(tǒng)的分析，為進(jìn)一步完善和建立橘葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了數(shù)據(jù)支撐。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器 Waters 9962二極管陣列檢測(cè)器，Waters 600泵，Waters 600控制器；色譜柱：迪馬Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；電子顯微鏡等。

1.2 試劑 甲醇為分析純，乙腈為色譜純。對(duì)照品：橙皮苷對(duì)照品（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所供含量測(cè)定用，批號(hào)：110721201014）。橘葉藥材詳見(jiàn)表1，經(jīng)鑒定樣品為蕓香科植物橘（Citrus reticulata Blanco）及其栽培變種的干燥葉。

表1 橘葉藥材樣品收集

續(xù)表1：

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材性狀 葉多蜷縮或破碎，展平后呈菱狀長(zhǎng)橢圓形或橢圓形，長(zhǎng)5～8 cm，寬2～4 cm，先端漸尖，基部楔形，全緣或微波狀。表面黃綠色或灰綠色，光滑，對(duì)光可見(jiàn)眾多的透明小油點(diǎn)。葉柄常缺，偶有者，狹翅也不明顯。質(zhì)脆，易碎裂。氣香，味苦。

2.2 粉末顯微特征 本品粉末黃綠或灰綠色。草酸鈣方晶多見(jiàn)，散在或存在于薄壁細(xì)胞內(nèi)，直徑4～10μm。纖維成束，周圍薄壁細(xì)胞常含草酸鈣方晶，形成晶纖維。導(dǎo)管多見(jiàn)，多為梯紋導(dǎo)管，偶見(jiàn)螺紋導(dǎo)管。氣孔不定式，副衛(wèi)細(xì)胞4～6個(gè)，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 橘葉粉末顯微特征照A.草酸鈣方晶；B.氣孔；C.晶鞘纖維；D.導(dǎo)管

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱Diamonsil C18（4.6mm× 250 mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈－水（25∶75）；檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm，進(jìn)樣量：10μL；理論板數(shù)以橙皮苷峰計(jì)不得少于2 000。柱溫：25℃，流速：1.0 mL· min－1。對(duì)照品及其樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品2.16 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取續(xù)濾液1 mL，置2 mL容量瓶中，加甲醇定容至2 mL，搖勻，即得。

圖2 HPLC色譜圖A.橙皮苷對(duì)照品；B.供試品

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密稱取在五氧化二磷中減壓干燥12 h以上的橙皮苷對(duì)照品7.30 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液2、3、4、7、10mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得到不同濃度對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述不同濃度橙皮苷對(duì)照品溶液10μL，并分別測(cè)定峰面積積分值。以對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝2 857 969X－69 458，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 6。橙皮苷在0.584～2.920μg之間進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積RSD為0.86%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品（樣品編號(hào)6）溶液10μL，注入液相色譜儀，于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣一次，測(cè)定橙皮苷的峰面積積分值，結(jié)果峰面積RSD為0.61%，表明，樣品的穩(wěn)定性良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品（樣品編號(hào)5）按照供試品溶液的制備方法，平行制備6份樣品，結(jié)果峰面積RSD為1.15%，測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)知含量的橘葉樣品（樣品編號(hào)5，按干燥品計(jì)算，樣品橙皮苷含量2.41%）約0.1 g，精密稱定，共取6份，置錐形瓶中，精密加入對(duì)照品溶液（濃度為0.401 mg·mL－1）5 mL，精密加入甲醇15 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)果表明測(cè)定方法的回收率良好。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.9 樣品的測(cè)定 按上述測(cè)定方法和條件，對(duì)所收集到的10批橘葉樣品進(jìn)行了測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 橙皮苷、水分、灰分、浸出物含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

2.4 水分、灰分、浸出物測(cè)定 按照2010年版《中國(guó)藥典》附錄方法對(duì)10批橘葉的水分、灰分、浸出物進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 小結(jié)與討論

3.1 本文所建立的橙皮苷HPLC檢測(cè)條件都進(jìn)行了優(yōu)選，方法簡(jiǎn)便、重復(fù)性好。對(duì)10批橘葉分別進(jìn)行了水分、灰分、水溶性與醇溶性浸出物測(cè)定，制定了橘葉藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)，建議水分不得過(guò)8.0%［《中國(guó)藥典》2010年版（一部）附錄ⅨH第二法］；總灰分不得過(guò)15.0%［《中國(guó)藥典》2010年版（一部）附錄ⅨK］；酸不溶性灰分不得過(guò)1.5%［《中國(guó)藥典》2010年版（一部）附錄ⅨK］；照醇溶性浸出物測(cè)定法（《中國(guó)藥典》2010年版（一部）附錄ⅩA］項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用40%乙醇作溶劑，不得少于25.0%。本品按干燥品計(jì)算，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于0.90%。

3.2 本文建立的橘葉藥材質(zhì)量控制方法操作簡(jiǎn)便，耐用性較好，測(cè)定結(jié)果真實(shí)準(zhǔn)確。該質(zhì)量控制方法有較好的實(shí)用性和可靠性，可用于橘葉藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)，以保證其臨床用藥的有效性和合理性。

［1］中華本草編委會(huì).中華本草（第四冊(cè)）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：3706.

［2］肖培根.新編中藥志［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：349.

［3］郭素萍，李庚寅.HPLC測(cè)定橘葉中橙皮苷的含量［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，8（4）：51－52.

［4］汪金玉，帥歐，林勵(lì)，等.橘葉HPLC指紋圖譜研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22（1）：82－85.

Study on medicinal materials quality control of orange leaf

LIU Chuan-fu，SHI Jun-ying
（College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

ObjectiveTo establish the medicinal materials quality control method of orange leaves.MethodsPharmacognosy study method was used on the research of orange leaves from 10 different regions of the country.HPLC method was used to established the determination method of the content of hesperidin in orange leaves.The 10 batches of orange leaves medicinal materials were determined of moisture，ash，extract content.ResultsThe separation of HPLC method was good，the regression equation was Y＝2 857 969X－69 458，r＝0.999 6.The detection limits of moisture，ash，extract content were formulated.ConclusionThe established method was simple，good repeatability，can be used as quality control for orange leaves medicinal materials.

Orange leaves；Hesperidin；Quality control

R284.1

A

2095－5375（2014）01－0021－003

劉傳夫，男，主管藥師，研究方向：中藥質(zhì)量控制，E－mail：583542694＠qq.com

石俊英，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥質(zhì)量控制，Tel：0531－82613463，E－mail：sjy5012＠126.com