HPLC法測(cè)定異福膠囊的有關(guān)物質(zhì)

張立光

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇蘇州215009）

HPLC法測(cè)定異福膠囊的有關(guān)物質(zhì)

張立光

（蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇蘇州215009）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定異福膠囊中有關(guān)物質(zhì)的方法。方法色譜柱為Kromasil C18，柱溫為40℃，流動(dòng)相為甲醇－pH 7.0的磷酸鹽緩沖液（0.01 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液，用0.1 mol·L－1氫氧化鈉調(diào)pH）（60∶40），檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，流速為1.0 mL·min－1，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果有關(guān)物質(zhì)與主藥色譜達(dá)到有效分離，1009011批樣品中雜質(zhì)I、醌式利福平、各雜質(zhì)和分別為0、0.68%、3.2%。結(jié)論本方法準(zhǔn)確、靈敏度更高，可用于該制劑的有關(guān)物質(zhì)檢查。

高效液相色譜法；異福膠囊；有關(guān)物質(zhì)

世界衛(wèi)生組織為遏制全球結(jié)核病的威脅，主張使用抗結(jié)核藥物的固定劑量復(fù)合劑（FDCs）代替抗結(jié)核單藥制劑治療結(jié)核病。異福膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為中華人民共和國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)，沒(méi)有對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制，但FDCs的有關(guān)物質(zhì)至關(guān)重要。筆者參考國(guó)際藥典建立了高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定異福膠囊的有關(guān)物質(zhì)的方法。結(jié)果表明，本方法能準(zhǔn)確地對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性分析。

1 儀器與試藥

日立HPLC儀，包括L－2400紫外檢測(cè)器，L－2130泵，T－2000L型色譜工作站。賽多利斯BS21S分析天平，BP121S分析天平；利福平對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：130496－200702，含量：98.0%）；異煙肼對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100578－200401，含量：100.0%）；醌式利福平對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：130413－200303）；異福膠囊（自制，批號(hào)：1009011，1009021，1009031）；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果［1，2］

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18（4.6 mm× 250 mm，5μm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相：甲醇－pH 7.0的磷酸鹽緩沖液（0.01 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液，用0.1 mol·L－1氫氧化鈉調(diào)pH至7.0）（6∶4）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。進(jìn)樣量：20μL。取空白輔料溶液、對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，主峰與雜質(zhì)峰能夠達(dá)到有效分離，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 空白溶液 精密稱(chēng)取不含利福平的空白樣

品適量，同法制成空白溶液。

圖1 利福平異煙肼對(duì)照品溶液

2.2.2 對(duì)照品溶液 取醌式利福平4mg，置25mL量瓶中，加異煙肼與利福平在酸中作用產(chǎn)物溶液（取利福平對(duì)照品4 mg和異煙肼對(duì)照品2 mg，加1 mol·L－1乙酸溶液25 mL使溶解，在室溫下放置30 min），加醌式利福平4 mg，溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液與自身對(duì)照溶液 稱(chēng)取本品20粒，去膠囊殼，研細(xì)，稱(chēng)取相當(dāng)于利福平40 mg的粉末迅速置于200 mL中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸鹽緩沖液（4∶6）］稀釋至刻度，振搖，濾過(guò)，即得供試品溶液。再取供試品溶液5mL置于100 mL容量瓶中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸鹽緩沖液（4∶6）］稀釋至刻度，得每mL含利福平10μg的溶液，即自身對(duì)照溶液。

2.2.4 雜質(zhì)限度標(biāo)準(zhǔn)的制定 供試品溶液的色譜圖中如檢出與雜質(zhì)Ⅰ峰和醌式利福平峰保留時(shí)間一致的色譜峰，其峰面積分別不得大于對(duì)照溶液中利福平主峰面積的1倍（5.0%）和0.8倍（4.0%），其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液中利福平主峰面積的0.3倍（1.5%），除主峰外的其他峰面積和不得大于供試液中主峰面積的2倍（10%），小于供試液中主峰面積0.02倍（0.1%）的峰和相對(duì)于利福平保留時(shí)間小于0.23倍的峰忽略不計(jì)。

2.3 最低檢測(cè)限試驗(yàn) 醌式利福平：取醌式利福平對(duì)照品0.003 0 g至100mL量瓶中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸鹽緩沖液（4∶6）］定容至刻度得到0.03 mg·mL－1的溶液，將此溶液逐級(jí)稀釋后進(jìn)行測(cè)定，按3∶1信噪比作檢測(cè)限。結(jié)果表明，最低檢測(cè)濃度為0.000 15 mg·mL－1。

2.4 破壞性試驗(yàn) 酸破壞溶液的制備：取膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉0.060 2 g至50 mL錐形瓶中，加入0.1 mol·L－1鹽酸溶液2 mL，25℃恒溫放置80 min后，加入0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液2 mL中和，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

堿破壞溶液的制備：取細(xì)粉0.060 3 g至50 mL錐形瓶中，加入0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液2 mL，于烘箱中60℃恒溫放置60 min后，加入0.1 mol·L－1鹽酸溶液2 mL中和，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

高溫破壞溶液的制備：取細(xì)粉0.060 3 g，于烘箱100℃恒溫放置12 h后，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

氧化破壞溶液的制備：取細(xì)粉0.060 2 g至50 mL錐形瓶中，加入30%過(guò)氧化氫溶液1 mL，25℃恒溫放置30 min后，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

強(qiáng)光破壞溶液的制備：取細(xì)粉0.060 2 g至表面皿中，于光照試驗(yàn)箱中4 500 Lx光照條件下，25℃恒溫放置10 d后，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶，用混合溶劑定容至刻度，超聲10 min，冷卻至室溫，搖勻。

取上述各破壞樣品溶液，按擬定的有關(guān)物質(zhì)檢查方法檢查，記錄色譜圖并計(jì)算。

結(jié)果表明各種破壞條件下各雜質(zhì)峰與主峰能夠很好地分離。

2.5 樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 取3批樣品，按擬定的有關(guān)物質(zhì)檢查方法檢查，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3批樣品的有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將樣品在40℃相對(duì)濕度（RH）75%的條件下放置6個(gè)月，于1、2、3、6個(gè)月時(shí)分別取樣，測(cè)定其有關(guān)物質(zhì)，并與0個(gè)月時(shí)進(jìn)行比較。結(jié)果表明，樣品在40℃、RH＝75%條件下放置6個(gè)月穩(wěn)定。

3 討論

2010 年版《中國(guó)藥典》收載的異福膠囊沒(méi)有對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制［1］，筆者建立了HPLC法測(cè)定異福膠囊中有關(guān)物質(zhì)。本方法操作簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，靈敏度高。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：298－299.

［2］畢秀玲，錢(qián)小平，趙迎春，等.高效液相色譜法測(cè)定異福片中利福平含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2013，22（2）：17－18.

Determination of related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules by HPLC

ZHANG Li-guang
（Suzhou Health College of Technology，Suzhou 215009，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules.MethodsThe determination was performed with a Kromasil C18column with the column temperature maintained at40℃，and the mobile phase was methanol－pH 7.0 buffer solution（0.01 mol·L－1Potassium dihydrogen phosphate，adjust pH with 0.1 mol·L－1Sodium hydroxide）（60∶40）with flow rate of 1.0 mL·min－1.The UV detection wavelength was set at254 nm and the sample size was 20μL.ResultsThe relevant substances of I were well separated from the chief agent，and the related substances in the sample 1009011 were 0，0.68%，3.2%，respectively.ConclusionThe proposed method was accurate and sensitive.It was applicable for the determination of the related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules.

HPLC；Rifampicin and Isoniazid Capsules；Related substances

R927.11

A

2095－5375（2014）01－0014－002

張立光，女，研究方向：藥物合成和藥物分析，E－mail：ivy0714＠126.com