小薊有效部位的提取及其大鼠灌胃液的制備

陳菲++++++盛柳青++++++王建美

[摘要] 目的 提取小薊的有效部位并制備小薊各提取物大鼠灌胃液。 方法 采用系統(tǒng)溶劑法提取小薊的有效部位，并采用吐溫-80增溶、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）助懸和食用油溶解等不同的方式制備小薊各提取物大鼠灌胃液并進(jìn)行穩(wěn)定性觀察。 結(jié)果 小薊乙醇提取物的得率最大，采用色拉油溶解能較好地制備小薊乙醚和乙酸乙酯提取物灌胃液；采用較高溫度下CMC-Na助懸能較好地制備小薊乙醇提取物灌胃液。 結(jié)論 系統(tǒng)溶劑法能較好地提取小薊各有效部位，小薊各提取物大鼠灌胃液制備方法可行，穩(wěn)定性好。

[關(guān)鍵詞] 小薊；系統(tǒng)溶劑法；制備；大鼠灌胃液

[中圖分類號] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）01（c）-0007-03

小薊為菊科植物刺兒菜[Cirsium Setosum（Willd.）MB.]的全草或根，分布于我國大部分地區(qū)，在中歐、俄羅斯東部、日本、朝鮮等地區(qū)亦有分布。小薊入藥始見于《名醫(yī)別錄》，為傳統(tǒng)的中藥，小薊性涼、味甘、苦，歸心、肝經(jīng)，具有涼血止血，祛瘀消腫之功效，用于鼻出血、吐血、尿血、便血、崩漏下血、外傷出血、癰腫瘡毒等?，F(xiàn)代研究證實(shí)，小薊全株含膽堿、兒茶酚胺類、皂苷、生物堿等成分，其提取物有明顯的收縮血管、縮短凝血時間的作用[1-4]。為了利用小薊的藥理活性建立實(shí)驗(yàn)大鼠缺血模型，本實(shí)驗(yàn)采用系統(tǒng)溶劑法提取了不同極性范圍的小薊有效部位，并把各提取物制備成利于大鼠服用的灌胃液，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

恒溫水浴鍋（杭州藍(lán)天化驗(yàn)儀器廠），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海青浦滬西儀器廠）；小薊由金華市藥材供應(yīng)站提供并經(jīng)本院吳遠(yuǎn)文副教授鑒定；石油醚、乙醚、乙酸乙酯、乙醇均為分析純；尼泊金乙酯、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）、吐溫-80為藥用；色拉油為食用。

1.2 方法

1.2.1 系統(tǒng)溶劑法提取小薊藥材

1.2.1.1 石油醚除雜 準(zhǔn)確稱取干燥的小薊藥材400 g，切碎，裝入5000 ml圓底燒瓶中，以1∶8的料液比加入石油醚，浸泡30 min后，置75℃恒溫水浴鍋中回流提取3次，第1次1 h，第2次45 min，第3次30 min，過濾，濾液回收石油醚后棄去。

1.2.1.2 提取乙醚部位 取揮發(fā)除去石油醚的小薊藥材，裝入5000 ml圓底燒瓶中，以1∶8的料液比加入乙醚，浸泡30 min后，置40℃恒溫水浴鍋中回流提取3次，第1次1 h，第2次45 min，第3次30 min，過濾，合并3次提取液，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓回收溶劑。濃縮液揮干溶劑后稱重并計(jì)算得率[5]。

1.2.1.3 提取乙酸乙酯部位 取揮發(fā)除去乙醚的小薊藥材，裝入5000 ml圓底燒瓶中，以1∶8的料液比加入乙酸乙酯，浸泡30 min后，置85℃恒溫水浴鍋中按“1.2.1.2”所述方法提取并計(jì)算得率。

1.2.1.4 提取乙醇部位 取揮發(fā)除去乙酸乙酯的小薊藥材，裝入5000 ml圓底燒瓶中，以1∶8的料液比加入乙醇，浸泡30 min后，置90℃恒溫水浴鍋中按“1.2.1.2”所述方法提取并計(jì)算得率。

1.2.1.5 提取水溶性成分 取揮發(fā)除去乙醇的小薊藥材，置于5000 ml陶瓷罐中，以1∶8的料液比加入蒸餾水，浸泡30 min后，煮沸提取3次，第1次1 h，第2次45 min，第3次30 min，過濾，合并3次提取液，濾液濃縮至150～200 ml備用。

1.2.2 小薊各提取物大鼠灌胃液的制備

1.2.2.1 小薊乙醚提取物灌胃液制備 取工藝篩選用小薊乙醚提取物（含藥材400 g，同“1.2.1”制備），分成3份，分別按3種不同的方法進(jìn)行灌胃液配制，第1種方法是采用2%吐溫-80增溶，第2種方法是采用1%CMC-Na溶液助懸，第3種方法是用適量色拉油溶解乙醚提取物。3種方法配制完成后進(jìn)行穩(wěn)定性觀察，選擇結(jié)果與穩(wěn)定性最好的方法進(jìn)行小薊乙醚提取物灌胃液的制備。

1.2.2.2 小薊乙酸乙酯提取物灌胃液的制備 因乙酸乙酯的極性與乙醚比較接近，因此可參照乙醚提取物配制的方法。

1.2.2.3 小薊乙醇提取物灌胃液的制備 取工藝篩選用小薊乙醇提取物（含藥材400 g，同“1.2.1”制備），分成5份，按5種不同的方法進(jìn)行灌胃液配制，第1種方法是采用2%吐溫-80增溶，第2種方法是直接用水溶解，第3種方法是用色拉油溶解，第4種方法是在常溫下用1%CMC-Na溶液助懸，第5種方法是在較高溫度下用1%CMC-Na溶液助懸。5種方法配制完成后進(jìn)行穩(wěn)定性觀察，選擇結(jié)果與穩(wěn)定性最好的方法進(jìn)行小薊乙醇提取物灌胃液的制備。

1.2.2.4 小薊水提物灌胃液的制備 取“1.2.1.5”項(xiàng)下制備的小薊水提液，在快速攪拌下緩緩加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液適量，用蒸餾水定容至200 ml，制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。

因水提物在水中溶解性好，因此水提物灌胃液的制備不進(jìn)行制備方法篩選和穩(wěn)定性觀察。

2 結(jié)果

2.1 不同溶劑提取物的得率

各提取部位稱重并計(jì)算得率（提取物相對于藥材的百分比）（表1）。

由表1可知，不同溶劑的提取率存在較大的差異，其得率的大小順序?yàn)椋阂掖?gt;乙酸乙酯>乙醚，可以看出，得率隨溶劑極性的增大而增大。另外小薊的水溶性部分由于含有較多的多糖等成分，使?jié)饪s較為困難，因此直接濃縮到灌胃液所需體積，不計(jì)算得率。

2.2 小薊各提取物大鼠灌胃液制備的篩選結(jié)果

2.2.1 小薊乙醚提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

從考察結(jié)果來看，提取物加2%吐溫-80制備的溶液初始呈溶解狀態(tài)，24 h后溶液呈絮凝狀，搖勻即散。用1%CMC-Na溶液制備的溶液在CMC-Na溶解中混懸不均勻，直接用色拉油溶解的溶液呈完全溶解狀態(tài)，穩(wěn)定性好。故選取色拉油溶解的方式進(jìn)行乙醚提取物灌胃液的制備：取小薊乙醚提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。

2.2.2 小薊乙酸乙酯提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

因乙酸乙酯的極性與乙醚比較接近，所以也用色拉油作溶劑溶解提取物：取小薊乙酸乙酯提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。從溶解情況來看，提取物基本溶解，有少量不溶物，在給大鼠灌胃前可先搖勻再灌服。

2.2.3 小薊乙醇提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

從考察結(jié)果來看，乙醇提取物加2%吐溫-80制備的溶液初始呈溶解狀態(tài)，24 h后溶液呈沉淀狀，搖勻即散。采用水和色拉油都只能部分地溶解提取物。采用1%CMC-Na溶液制備的溶液顆粒呈穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，但在加熱的條件下助懸形成的顆粒相對較細(xì)。因此實(shí)驗(yàn)選取在較高溫度下1%CMC-Na溶液助懸的方式進(jìn)行小薊乙醇提取物灌胃液的制備：取小薊乙醇提取物置80℃水浴中加熱，將配制好的適量1% CMC-Na溶液也置80℃水浴中加熱。把提取物在加熱狀態(tài)下加入到CMC-Na溶液中，邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌一段時間，緩慢加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液適量，加1% CMC-Na溶液定容至200 ml。制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。

3 討論

在系統(tǒng)溶劑法提取中，選擇乙醚、乙酸乙酯、乙醇、水作為提取溶劑，主要是考慮到這4個溶劑基本能提取出小薊的不同極性的有效部位，為課題組下一步實(shí)驗(yàn)動物的建模打好基礎(chǔ)[6]。另外石油醚作為非極性有機(jī)溶劑，只能提取一些非極性的無效成分，所以實(shí)驗(yàn)選擇石油醚作為除雜的溶劑。

大鼠作為常用的實(shí)驗(yàn)動物，在選擇灌胃液的溶劑時應(yīng)考慮無毒和對大鼠的實(shí)驗(yàn)觀察影響最小，乙醚、乙酸乙酯、乙醇作為常用的有機(jī)溶劑對實(shí)驗(yàn)動物有一定的毒性，所以其提取物必須選擇其他溶劑作成灌胃液，色拉油和水無毒且對大鼠實(shí)驗(yàn)無影響，而實(shí)驗(yàn)又不涉及高脂模型，所以選擇色拉油和水作為大鼠灌胃液的溶劑[7]。

在配制方法篩選中，實(shí)驗(yàn)選擇了用表面活性劑吐溫-80增溶、高分子溶液如CMC-Na溶液助懸和食用油直接溶解的方式增加各提取物的溶解度，其中考慮到動物實(shí)驗(yàn)的安全性，吐溫-80的濃度控制在2%[8]。在用CMC-Na溶液助懸時，CMC-Na濃度越高，對微粒的懸浮性越好[9]，但濃度升高，黏稠度增大，對灌胃帶來的阻力會增大，因此在預(yù)實(shí)驗(yàn)時，選擇1%作為CMC-Na溶液的濃度。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 馮子明，楊椏楠，姜建雙，等.小薊的化學(xué)成分研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（6）：87-89.

[2] 祁愛蓉，徐彩，蔡芬芳.小薊、小薊炭的主要成份及止血作用研究綜述[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2012，20（10）：104.

[3] 曹琴，陳建濤.小薊的化學(xué)成分研究[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2010，28（4）：35-37.

[4] 李丹，吳蓮波.中藥小薊的藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江中醫(yī)藥，2010，（3）：46-47.

[5] 戴冰，鄒雙華，劉磊，等.新疆軟紫草系統(tǒng)溶劑法提取分離部位的抗生育作用研究[J].中藥材，2007，30（9）：1120-1122.

[6] 李端.中藥化學(xué)技術(shù)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：15-16.

[7] 馬健康，姜艷霞，馬洪波，等.系統(tǒng)溶劑法考察羊蹄根對小鼠血小板減少癥的實(shí)驗(yàn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009， 20（5）：1179-1180.

[8] 郭志鑫，孫會敏，楊銳，等.藥用輔料聚山梨酯80（吐溫-80）質(zhì)量狀況分析[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2012，30（6）：63-65.

[9] 楊桂明.中藥藥劑學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：180-184.

（收稿日期：2013-10-11 本文編輯：郭靜娟）

2.2.2 小薊乙酸乙酯提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

因乙酸乙酯的極性與乙醚比較接近，所以也用色拉油作溶劑溶解提取物：取小薊乙酸乙酯提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。從溶解情況來看，提取物基本溶解，有少量不溶物，在給大鼠灌胃前可先搖勻再灌服。

2.2.3 小薊乙醇提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

從考察結(jié)果來看，乙醇提取物加2%吐溫-80制備的溶液初始呈溶解狀態(tài)，24 h后溶液呈沉淀狀，搖勻即散。采用水和色拉油都只能部分地溶解提取物。采用1%CMC-Na溶液制備的溶液顆粒呈穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，但在加熱的條件下助懸形成的顆粒相對較細(xì)。因此實(shí)驗(yàn)選取在較高溫度下1%CMC-Na溶液助懸的方式進(jìn)行小薊乙醇提取物灌胃液的制備：取小薊乙醇提取物置80℃水浴中加熱，將配制好的適量1% CMC-Na溶液也置80℃水浴中加熱。把提取物在加熱狀態(tài)下加入到CMC-Na溶液中，邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌一段時間，緩慢加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液適量，加1% CMC-Na溶液定容至200 ml。制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。

3 討論

在系統(tǒng)溶劑法提取中，選擇乙醚、乙酸乙酯、乙醇、水作為提取溶劑，主要是考慮到這4個溶劑基本能提取出小薊的不同極性的有效部位，為課題組下一步實(shí)驗(yàn)動物的建模打好基礎(chǔ)[6]。另外石油醚作為非極性有機(jī)溶劑，只能提取一些非極性的無效成分，所以實(shí)驗(yàn)選擇石油醚作為除雜的溶劑。

大鼠作為常用的實(shí)驗(yàn)動物，在選擇灌胃液的溶劑時應(yīng)考慮無毒和對大鼠的實(shí)驗(yàn)觀察影響最小，乙醚、乙酸乙酯、乙醇作為常用的有機(jī)溶劑對實(shí)驗(yàn)動物有一定的毒性，所以其提取物必須選擇其他溶劑作成灌胃液，色拉油和水無毒且對大鼠實(shí)驗(yàn)無影響，而實(shí)驗(yàn)又不涉及高脂模型，所以選擇色拉油和水作為大鼠灌胃液的溶劑[7]。

在配制方法篩選中，實(shí)驗(yàn)選擇了用表面活性劑吐溫-80增溶、高分子溶液如CMC-Na溶液助懸和食用油直接溶解的方式增加各提取物的溶解度，其中考慮到動物實(shí)驗(yàn)的安全性，吐溫-80的濃度控制在2%[8]。在用CMC-Na溶液助懸時，CMC-Na濃度越高，對微粒的懸浮性越好[9]，但濃度升高，黏稠度增大，對灌胃帶來的阻力會增大，因此在預(yù)實(shí)驗(yàn)時，選擇1%作為CMC-Na溶液的濃度。

[參考文獻(xiàn)]

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[5] 戴冰，鄒雙華，劉磊，等.新疆軟紫草系統(tǒng)溶劑法提取分離部位的抗生育作用研究[J].中藥材，2007，30（9）：1120-1122.

[6] 李端.中藥化學(xué)技術(shù)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：15-16.

[7] 馬健康，姜艷霞，馬洪波，等.系統(tǒng)溶劑法考察羊蹄根對小鼠血小板減少癥的實(shí)驗(yàn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009， 20（5）：1179-1180.

[8] 郭志鑫，孫會敏，楊銳，等.藥用輔料聚山梨酯80（吐溫-80）質(zhì)量狀況分析[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2012，30（6）：63-65.

[9] 楊桂明.中藥藥劑學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：180-184.

（收稿日期：2013-10-11 本文編輯：郭靜娟）

2.2.2 小薊乙酸乙酯提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

因乙酸乙酯的極性與乙醚比較接近，所以也用色拉油作溶劑溶解提取物：取小薊乙酸乙酯提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。從溶解情況來看，提取物基本溶解，有少量不溶物，在給大鼠灌胃前可先搖勻再灌服。

2.2.3 小薊乙醇提取物灌胃液制備的篩選結(jié)果

從考察結(jié)果來看，乙醇提取物加2%吐溫-80制備的溶液初始呈溶解狀態(tài)，24 h后溶液呈沉淀狀，搖勻即散。采用水和色拉油都只能部分地溶解提取物。采用1%CMC-Na溶液制備的溶液顆粒呈穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，但在加熱的條件下助懸形成的顆粒相對較細(xì)。因此實(shí)驗(yàn)選取在較高溫度下1%CMC-Na溶液助懸的方式進(jìn)行小薊乙醇提取物灌胃液的制備：取小薊乙醇提取物置80℃水浴中加熱，將配制好的適量1% CMC-Na溶液也置80℃水浴中加熱。把提取物在加熱狀態(tài)下加入到CMC-Na溶液中，邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌一段時間，緩慢加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液適量，加1% CMC-Na溶液定容至200 ml。制成每毫升含生藥量為2 g的灌胃液。

3 討論

在系統(tǒng)溶劑法提取中，選擇乙醚、乙酸乙酯、乙醇、水作為提取溶劑，主要是考慮到這4個溶劑基本能提取出小薊的不同極性的有效部位，為課題組下一步實(shí)驗(yàn)動物的建模打好基礎(chǔ)[6]。另外石油醚作為非極性有機(jī)溶劑，只能提取一些非極性的無效成分，所以實(shí)驗(yàn)選擇石油醚作為除雜的溶劑。

大鼠作為常用的實(shí)驗(yàn)動物，在選擇灌胃液的溶劑時應(yīng)考慮無毒和對大鼠的實(shí)驗(yàn)觀察影響最小，乙醚、乙酸乙酯、乙醇作為常用的有機(jī)溶劑對實(shí)驗(yàn)動物有一定的毒性，所以其提取物必須選擇其他溶劑作成灌胃液，色拉油和水無毒且對大鼠實(shí)驗(yàn)無影響，而實(shí)驗(yàn)又不涉及高脂模型，所以選擇色拉油和水作為大鼠灌胃液的溶劑[7]。

在配制方法篩選中，實(shí)驗(yàn)選擇了用表面活性劑吐溫-80增溶、高分子溶液如CMC-Na溶液助懸和食用油直接溶解的方式增加各提取物的溶解度，其中考慮到動物實(shí)驗(yàn)的安全性，吐溫-80的濃度控制在2%[8]。在用CMC-Na溶液助懸時，CMC-Na濃度越高，對微粒的懸浮性越好[9]，但濃度升高，黏稠度增大，對灌胃帶來的阻力會增大，因此在預(yù)實(shí)驗(yàn)時，選擇1%作為CMC-Na溶液的濃度。

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[2] 祁愛蓉，徐彩，蔡芬芳.小薊、小薊炭的主要成份及止血作用研究綜述[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2012，20（10）：104.

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[4] 李丹，吳蓮波.中藥小薊的藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江中醫(yī)藥，2010，（3）：46-47.

[5] 戴冰，鄒雙華，劉磊，等.新疆軟紫草系統(tǒng)溶劑法提取分離部位的抗生育作用研究[J].中藥材，2007，30（9）：1120-1122.

[6] 李端.中藥化學(xué)技術(shù)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：15-16.

[7] 馬健康，姜艷霞，馬洪波，等.系統(tǒng)溶劑法考察羊蹄根對小鼠血小板減少癥的實(shí)驗(yàn)研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009， 20（5）：1179-1180.

[8] 郭志鑫，孫會敏，楊銳，等.藥用輔料聚山梨酯80（吐溫-80）質(zhì)量狀況分析[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2012，30（6）：63-65.

[9] 楊桂明.中藥藥劑學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：180-184.

（收稿日期：2013-10-11 本文編輯：郭靜娟）