綿羊巴氏桿菌病和鏈球菌病混合感染的診斷和防治初探

施進(jìn)文，蔡葵蒸

（1.寧夏同心縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，同心 751300；2.西北民族大學(xué)）

疾病防控

綿羊巴氏桿菌病和鏈球菌病混合感染的診斷和防治初探

施進(jìn)文1，蔡葵蒸2

（1.寧夏同心縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，同心 751300；2.西北民族大學(xué)）

近年來在我國新疆、河北、遼寧、山東、吉林、甘肅等?。ㄗ灾螀^(qū)）不斷有綿羊巴氏桿菌病發(fā)生［1－6］，而鏈球菌與巴氏桿菌混合感染的較為少見。2011年入冬以來，寧夏回族自治區(qū)同心縣肉羊育肥區(qū)域羊群中相繼發(fā)生了一種以咳嗽、呼吸困難、流粘濃性鼻液、跛行為主要特征的疫病，疫情延續(xù)近半年之久，給廣大養(yǎng)殖戶造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，應(yīng)該引起動(dòng)物防疫部門的重視。

1 發(fā)病情況

2011 年入冬，同心縣肉羊育肥區(qū)域興隆村養(yǎng)殖育肥戶王某200只羊群發(fā)生咳嗽、呼吸困難、流粘濃性鼻液，發(fā)病羊以育肥羔羊和體弱羊?yàn)橹?發(fā)病175只，經(jīng)過多方搶救治療，頻死期宰殺和死亡共計(jì)42只，發(fā)病率87.5%，致死率24%。隨后同心肉羊育肥區(qū)域楊家河灣村養(yǎng)殖育肥戶李某400只羊群發(fā)病特征同上，并有咽喉腫脹、跛行等癥狀，發(fā)病237只，發(fā)病率59.25%，致死率26.16%。該病很快波及其他養(yǎng)殖區(qū)，經(jīng)過筆者調(diào)查統(tǒng)計(jì)，至2012年6月，養(yǎng)殖區(qū)共飼養(yǎng)育肥羊60 545只，發(fā)病羊23 289只，死亡羊5 579只，發(fā)病率38.46%，死亡率9.21%,致死率23.95%。

2 臨床癥狀

最急性型：突然發(fā)病，寒顫，虛弱無力，呼吸困難，可在數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。急性型：體溫達(dá)4l～42℃，精神沉郁，食欲廢絕，呼吸急促，咳嗽，鼻孔常流血，結(jié)膜潮紅有黏性分泌物；病初便秘，后期腹瀉，有時(shí)排血水。頸部和胸下部發(fā)生水腫，有角膜炎；觸診肺區(qū)有疼痛感，聽診有支氣管呼吸音和水泡音。病程長者漸進(jìn)性消瘦，頻死期臥地不起，四肢劃動(dòng)，抽搐死亡。慢性者跛行。

3 剖檢變化

可視粘膜充血或出血，皮下組織有淡黃色液體浸潤，有水腫、充血和出血。肺臟有灰白色的病灶，有水腫，出血，質(zhì)地變硬，切面呈大理石樣變，有的病例呈纖維素性胸膜肺炎，可見急性壞死性肺炎，胸腔內(nèi)有大量纖維素性滲出物；氣管內(nèi)有大量泡沫樣液體，粘膜點(diǎn)狀出血；部分心包積液、心外膜出血，部分心腔內(nèi)儲(chǔ)滿血塊。肝臟呈土黃色，有壞死灶，膽囊充盈，也有膽囊破裂者。腸系膜淋巴結(jié)充血、水腫，間有點(diǎn)狀出血；瘤胃空虛，真胃、腸道粘膜及腎外膜有出血點(diǎn)，有些真胃粘膜脫落；腹腔有數(shù)量不等的積液，脾未見腫大。

4 診斷

4.1 病料接種培養(yǎng)、致病性試驗(yàn)和PCR擴(kuò)增

4.1.1 接種支原體培養(yǎng)基（KM2） 取肺臟組織，首先在滅菌的pH值7.2磷酸緩沖液中洗滌2次，然后剪碎加入KM2培養(yǎng)基研磨，4℃5 000 r/min離心10 min，取上清液。上清液一部分用0.45 mm濾器過濾后接種KM2培養(yǎng)基，另一部分直接接種KM2培養(yǎng)基，置37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基顏色變化，病料過濾接種培養(yǎng)基每隔3天盲傳一次，結(jié)果培養(yǎng)基顏色未發(fā)生變化，即無支原體生長。

4.1.2 接種鏈球菌培養(yǎng)基 取病料肝臟和肺臟深部組織，各接種THB和THA培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取THB和THA培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢。結(jié)果肝臟接種培養(yǎng)物中觀察到一種G+鏈狀球菌（圖1）。

圖1 革蘭氏染色觀察到的鏈狀球菌

4.1.3 接種巴氏桿菌分離用培養(yǎng)基和PCR擴(kuò)增 取病料肝臟和肺臟深部組織，各接種馬丁肉湯和馬丁肉湯瓊脂，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色，鏡

檢。結(jié)果在肺臟接種培養(yǎng)物中觀察到一種G-短桿菌（圖2）。此菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上不生長，在鮮血瓊脂上生長良好、不溶血。取該菌馬丁肉湯培養(yǎng)物，注射體重18 g左右小白鼠，皮下0.2 mL，小鼠在36 h出現(xiàn)死亡。取死亡小鼠心血、肝和脾觸片，瑞特氏染色鏡檢，結(jié)果觀察到兩級(jí)濃染的小桿菌。該菌用巴氏桿菌特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果擴(kuò)增出了與預(yù)期大小相符的457 bp片段（圖3）。

圖2 革蘭氏染色觀察到的兩極著色傾向的桿菌

圖3 巴氏桿菌特異性引物擴(kuò)增分離菌的結(jié)果

4.2 診斷結(jié)果

根據(jù)細(xì)菌分離培養(yǎng)、培養(yǎng)特性觀察、細(xì)菌染色形態(tài)觀察，分離出兩種菌：一種為鏈球菌，另一種為多殺性巴氏桿菌（分子生物學(xué)方法鑒定亦確定為巴氏桿菌）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分離的多殺性巴氏桿菌具有很強(qiáng)的致病性。因此，本次疫情可認(rèn)為是多殺性巴氏桿菌和鏈球菌混合感染所致，其中多殺性巴氏桿菌是造成死亡的主要原因。

5 防治措施

5.1 發(fā)病過程中嘗試的治療措施

處方一：發(fā)病羊群上午全部注射。30%安乃近注射液10 mL+板藍(lán)根注射液10 mL+魚腥草注射液10 mL+160萬IU青霉素1支+100萬IU鏈霉素1支，混合搖勻注射成年大羊2只或育肥羔羊3～4只。重癥羊下午注射20%氟奇喘無敵（氟苯尼考注射液）10 mL，成年羊注射5 mL，羔羊注射2.5 mL。

處方二：注射用頭孢噻呋鈉（混分）5 g+注射用滅菌水10 mL混合，注射2只成羊或3～4只育肥羔羊，并注射大退燒（30%安乃近注射液）每只羊10 mL。

處方三：百草傳奇（氟苯尼考注射液）+克林新（鹽酸林可霉素注射液）各10 mL，注射2只大羊或4只育肥羔羊。

處方四：用中成藥清肺止咳散（泰鑫藥業(yè)生產(chǎn)）拌料使用，每只羊10 g，連用5 d，療效顯著。

處方五：維生素C注射液10 mL+10%葡萄糖溶液250 mL+激能（能量合劑）10 mL+0.9%生理鹽水250 mL+注射用頭孢噻呋鈉（混粉）4 g+地塞米松磷酸鈉注射液5 mg，一次靜脈注射1只大羊或2只羔羊。

5.2 疫情診斷后所采取的措施

該病確診后及時(shí)隔離病羊，對(duì)癥治療；圈舍消毒，徹底清潔病羊圈舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)所及周圍環(huán)境，對(duì)其活動(dòng)場(chǎng)所、用具用克毒靈消毒粉溶液（二氯異氰脲酸鈉，按1∶800稀釋消毒）等進(jìn)行徹底消毒；病死羊及被污染的飼草料和糞便尿等污染物集中深埋，做無害化處理；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善衛(wèi)生條件，消除各種致病因素；同時(shí)，禁止販運(yùn)病羊和無秩序屠宰，最后使疫情得到了控制。

6 小結(jié)與討論

1）根據(jù)細(xì)菌分離培養(yǎng)、培養(yǎng)特性觀察、細(xì)菌染色形態(tài)觀察、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及分子生物學(xué)方法診斷，本次疫情可認(rèn)為是以多殺性巴氏桿菌為主要致病性并伴發(fā)鏈球菌混合感染的較為復(fù)雜的疫病。造成羊只大批死亡的原因是養(yǎng)殖戶缺乏科技意識(shí)，發(fā)病后延誤病情，無法應(yīng)對(duì)。筆者經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查，病理剖檢變化診斷后，列出5個(gè)處方，其中處方一藥物配伍合理，成本低，療效好，能夠及時(shí)控制疫情發(fā)生，結(jié)合處方二至五，對(duì)控制和撲滅疫情發(fā)揮了顯著的作用。建議養(yǎng)殖戶使用處方一和處方四。疫情診斷后，采取綜合性防治措施，及時(shí)治療病羊，減少新發(fā)病羊只，對(duì)重癥羊采取打針輸液，中西醫(yī)結(jié)合治療，羊群飲電解多維或葡萄糖口服液，使羊只很快得到康復(fù)。

2）對(duì)于該病的預(yù)防，應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善衛(wèi)生條件，平時(shí)應(yīng)注意避免羊只擁擠和受潮，消除可能降低抗病力的一切因素，圈舍要定期消毒；在春乏季節(jié)并遇著天氣劇烈變化時(shí)，飼料中添加羊只保健藥品，如微量元素、維生素、氨基酸等，提高羊群的整體抗病能力。另外，對(duì)于該種疾病常發(fā)地區(qū)，可考慮注射羊巴氏桿菌和鏈球菌的菌苗來預(yù)防。

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S858.26

A

2095-3887（2014）01-0038-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.01.011

2013-10-08

施進(jìn)文，男，高級(jí)畜牧師。