2012年萊西市奶牛布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查和風(fēng)險(xiǎn)因素分析

，，

（1.青島市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東青島 266071；

2.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

2012年萊西市奶牛布魯氏菌病血清學(xué)調(diào)查和風(fēng)險(xiǎn)因素分析

馬清霞1，沈朝建2，劉均華1

（1.青島市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東青島 266071；

2.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

[目的] 估計(jì)萊西市奶牛布魯氏菌病的流行率和地理分布，分析奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)間布魯氏菌病的傳播風(fēng)險(xiǎn)因素。[方法]對(duì)萊西市1803個(gè)養(yǎng)殖戶30119頭應(yīng)檢奶牛，全部采樣，采用虎紅平板凝集和試管凝集垂直試驗(yàn)，同時(shí)開(kāi)展奶牛布魯氏菌病問(wèn)卷調(diào)查。利用GIS、Epi Infor TM 7和SPASS軟件，開(kāi)展橫斷面研究和case-control研究，分析萊西市奶牛布魯氏菌病陽(yáng)性場(chǎng)戶的空間分布、布魯氏菌病流行率和養(yǎng)殖場(chǎng)間的風(fēng)險(xiǎn)因素分析。[結(jié)果]萊西市布魯氏菌病的場(chǎng)戶血清流行率是2.55%，個(gè)體血清流行率為0.38%；單因素分析發(fā)現(xiàn)存欄量、養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖環(huán)境、是否有專用產(chǎn)犢場(chǎng)地、擠奶方式、運(yùn)奶方式、糞污是否分開(kāi)處理、是否使用機(jī)械處理糞便等8個(gè)因素與奶牛布魯氏菌病發(fā)生有一定關(guān)系（p<0.2）；多因素logistic回歸分析表明，存欄量少（10只以下）（OR=4.58，95%CI：1.87-11.23，p=0.001）和散養(yǎng)戶集中村飼養(yǎng)（OR=2.21，95%CI: 1.05-4.63，p=0.036）與該病發(fā)生相關(guān)。

布魯氏菌??；流行率；風(fēng)險(xiǎn)因素

布魯氏菌病（brucellosis以下簡(jiǎn)稱布魯氏菌?。怯刹剪斒暇˙rucella）引起的人畜共患傳染病病。該病主要傳染源是發(fā)病及帶菌的牛羊等家畜，家畜患病后可能發(fā)生胎膜發(fā)炎、不孕、不育、流產(chǎn)、睪丸炎、乳腺炎以及各種組織病變。人通過(guò)接觸病畜的流產(chǎn)物、被布魯氏菌污染的動(dòng)物產(chǎn)品如羊肉、牛奶等感染布魯氏菌病。布魯氏菌可侵害人體多個(gè)系統(tǒng)，嚴(yán)重者可喪失勞動(dòng)能力并影響生育能力，成為危害公共衛(wèi)生的潛在因素。布魯氏菌病在發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)控制得到控制，在工業(yè)化國(guó)家經(jīng)過(guò)日常的篩檢和疫苗免疫也非常少見(jiàn)，但是在中東、亞洲、非洲、南美洲、地中海和加勒比海還很常見(jiàn)[1-3]。中國(guó)在動(dòng)物疫病防治的中長(zhǎng)期規(guī)劃中，將布魯氏菌病列入優(yōu)先防控病種[4-5]。

根據(jù)《青島市重大動(dòng)物疫病中長(zhǎng)期防治規(guī)（2013—2020）》，2014—2015年，青島市奶畜布魯氏菌病的流行率控制在5%以下，到2020年青島市實(shí)現(xiàn)布魯氏菌病凈化標(biāo)準(zhǔn)。青島市已啟動(dòng)奶牛布魯氏菌病凈化措施，每年對(duì)所有奶牛實(shí)行全部實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，撲殺所有檢測(cè)陽(yáng)性奶牛，并對(duì)陽(yáng)性養(yǎng)殖戶間隔3個(gè)月連續(xù)檢測(cè)，直到無(wú)陽(yáng)性個(gè)體檢出。本研究以萊西市奶牛為目標(biāo)群，通過(guò)血清學(xué)普查，獲得萊西市奶牛布魯氏菌病的群流行率和個(gè)體流行率。通過(guò)調(diào)查問(wèn)卷獲得的信息，分析布魯氏菌病在萊西奶牛群間流行的風(fēng)險(xiǎn)因素，并通過(guò)病例對(duì)照研究尋找布魯氏菌病流行的風(fēng)險(xiǎn)因素，為全市布魯氏菌病防控提供技術(shù)支持。

1 材料及方法

1.1 研究群

2012年，青島市奶牛養(yǎng)殖戶2666戶，存欄奶牛61146頭，其中萊西市奶牛養(yǎng)殖戶1803戶、存欄奶牛33475頭，分別占全市的67%和55%。鑒于萊西奶牛養(yǎng)殖在全市的比重和示范作用，以其所有奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)戶和3月齡以上未懷孕奶牛為研究對(duì)象。

1.2 研究設(shè)計(jì)

采用病例對(duì)照研究對(duì)萊西地區(qū)奶牛布病風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行研究，采用普查的方式對(duì)奶牛布魯氏菌病流行情況進(jìn)行調(diào)查。2012年4月10日—20日，對(duì)萊西市1803個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)/戶進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查，對(duì)所有年齡3個(gè)月以上、未孕奶牛采樣血清學(xué)樣品進(jìn)行布魯氏菌病檢測(cè)。問(wèn)卷調(diào)查內(nèi)容包括養(yǎng)殖基礎(chǔ)信息、調(diào)入/調(diào)出信息、繁育方式、牛奶收集方式、糞便處理方式、消毒措施、布魯氏菌病檢測(cè)和飼料來(lái)源等15個(gè)封閉性問(wèn)題。選擇實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性場(chǎng)戶為病例，在同一自然村內(nèi)血清學(xué)檢測(cè)陰性場(chǎng)戶為對(duì)照。

1.3 樣品血清學(xué)檢測(cè)

奶牛采集全血，分離血清，冷凍保存。采用虎紅平板試驗(yàn)進(jìn)行篩檢，篩檢陽(yáng)性者用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行確診。布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)診斷試劑，由青島易邦生物技術(shù)有限公司提供。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[6]，虎紅平板凝集試驗(yàn)（RPBT）的敏感性、特異性分別為95%、 80%，試管凝集（SAT）的敏感性、特異性分別85%、 90%。因此，檢測(cè)過(guò)程的敏感性為80.75%，特異性為98%?；⒓t平板試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)均為陽(yáng)性的奶牛定義為“發(fā)病動(dòng)物”，至少出現(xiàn)一頭陽(yáng)性動(dòng)物的養(yǎng)殖戶為陽(yáng)性場(chǎng)戶。

2 數(shù)據(jù)分析

2.1 流行率計(jì)算

本次共對(duì)萊西市12個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)、1803個(gè)奶牛養(yǎng)殖戶所養(yǎng)奶牛進(jìn)行抽樣，共采集血清樣品30119份，具體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表 1 萊西市各鄉(xiāng)鎮(zhèn)布魯氏菌病流行率

2.2 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

本次調(diào)查共檢出46個(gè)奶牛布病陽(yáng)性場(chǎng)戶，選擇與陽(yáng)性養(yǎng)殖場(chǎng)戶同村的213戶陰性場(chǎng)戶作為對(duì)照，用Epi InformTM 7[7-8]軟件分別進(jìn)行單因素分析和多因素logistic[9]回歸分析。對(duì)15個(gè)單因素，逐個(gè)進(jìn)行單因素分析，查看OR值和P值；選擇P值小于0.2的變量進(jìn)行泊松相關(guān)性分析，將泊松相關(guān)系數(shù)小于0.4的變量進(jìn)行Logistic 多因素回歸分析，用倒退法選擇變量（p<0.05），識(shí)別混雜因素，確定最終模型。

逐個(gè)去除P值最大的因素，觀察似然（likelihood）值的變化和差異顯著值的OR值的變化。去除標(biāo)準(zhǔn)是：如果去除此因素，對(duì)于似然值和差異顯著因素的OR值影響不大，就可以去除此因素。在逐步去除單因素的過(guò)程中，根據(jù)OR值在組別之間的差異，對(duì)某些因素重新進(jìn)行分組或合并。

3 結(jié)果

3.1 萊西市奶牛布魯氏菌病的真實(shí)流行率

根據(jù)表1數(shù)據(jù)，計(jì)算出萊西市奶牛布魯氏菌病的個(gè)體流行率為0.38%，場(chǎng)戶流行率為2.55%。

3.2 布魯氏菌病陽(yáng)性場(chǎng)戶的空間分布

萊西市11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，除南墅鎮(zhèn)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)布魯氏菌病外，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)全部出現(xiàn)布魯氏菌病陽(yáng)性戶，場(chǎng)戶陽(yáng)性率為0.49%～9.09%，主要分布在東北部和東南部幾個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（圖1）。

3.3 奶牛布魯氏菌病風(fēng)險(xiǎn)因素分析結(jié)果

3.3.1 單因素分析結(jié)果

首先對(duì)與養(yǎng)殖和布魯氏菌病傳播有密切關(guān)系的15項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)因素逐個(gè)進(jìn)行單因素分析，結(jié)果見(jiàn)表2。調(diào)查問(wèn)卷中，混群前全部隔離、檢疫；流產(chǎn)物處理方式都是掩埋，數(shù)據(jù)一致，不能進(jìn)行單因素分析。

單因素分析結(jié)果表明，存欄量、養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖環(huán)境、是否有專用產(chǎn)犢場(chǎng)地、擠奶方式、運(yùn)奶方式、糞污是否分開(kāi)處理、是否使用機(jī)械處理糞便等8個(gè)因素與萊西市奶牛布魯氏菌病發(fā)生存在關(guān)聯(lián)（p<0.2）。

3.3.2 多因素logistic回歸分析

按照l(shuí)ogistic 回歸的流程和方法進(jìn)行多因素分析，結(jié)果顯示存欄量、養(yǎng)殖環(huán)境在病例組和對(duì)照組之間差異顯著，是萊西是布魯氏菌病的風(fēng)險(xiǎn)因素（表3）。

模型的回歸方程logistic P=-2.997+1.521*x1+0.793*x2，經(jīng)Hosmer-Lemeshow 檢驗(yàn)，該模型擬合較好（P>0.05），曲線下面積 0.728（95%置信區(qū)間0.657～0.799）。模型的ROC曲線圖2。

圖1 萊西市奶牛布魯氏菌病地理分布

表2 萊西市奶牛布魯氏菌病單因素風(fēng)險(xiǎn)分析結(jié)果

表3 萊西市奶牛布魯氏菌病多因素分析結(jié)果

圖2 奶牛布魯氏菌病風(fēng)險(xiǎn)因素logistic 回歸模型的ROC曲線

4 討論

本研究將布魯氏菌病檢測(cè)和空間地理分析（GIS）技術(shù)相結(jié)合，在估計(jì)本地區(qū)內(nèi)布魯氏菌病場(chǎng)戶流行率的基礎(chǔ)上，分析陽(yáng)性場(chǎng)戶的地理分布情況。結(jié)果顯示，萊西市奶牛布魯氏菌病的個(gè)體流行率和場(chǎng)戶流行率較低，但陽(yáng)性場(chǎng)戶的地理分布非常廣，在12個(gè)有奶牛養(yǎng)殖的鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)出現(xiàn)布魯氏菌病檢測(cè)陽(yáng)性。

在布魯氏菌病檢測(cè)陽(yáng)性的鄉(xiāng)鎮(zhèn)中，場(chǎng)戶陽(yáng)性率差別很大，最高是9.09%，最低是0.49%；而且個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)戶陽(yáng)性率之間分布不一致。沽河鎮(zhèn)和姜山鎮(zhèn)的個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)戶陽(yáng)性率都相對(duì)較低，布魯氏菌病的防控壓力較小；而馬連莊鎮(zhèn)和望城鎮(zhèn)的個(gè)體陽(yáng)性率和場(chǎng)戶陽(yáng)性率都較高，布魯氏菌病防控難度較大。

青島市奶牛布魯氏菌病防控策略是監(jiān)測(cè)撲殺凈化，奶牛不免疫布魯氏菌疫苗，監(jiān)測(cè)出陽(yáng)性后，全部撲殺。從2010年到2014年，萊西市每年撲殺奶牛110頭左右。從撲殺數(shù)據(jù)來(lái)看，萊西市奶牛布魯氏菌病相對(duì)穩(wěn)定，但是并沒(méi)有出現(xiàn)預(yù)期的逐年減少趨勢(shì)，原因可能是沒(méi)有區(qū)分高流行地區(qū)和低流行地區(qū)，而且每年過(guò)度關(guān)注個(gè)體流行率，對(duì)于群陽(yáng)性率以及每年群陽(yáng)性的地理分布則沒(méi)有深入研究，以致造成陽(yáng)性群在地區(qū)內(nèi)擴(kuò)散開(kāi)來(lái)。本研究通過(guò)地理信息和流行率相結(jié)合，明確區(qū)分高流行地區(qū)和陽(yáng)性場(chǎng)戶的分布，布魯氏菌病凈化可以從低流行區(qū)域開(kāi)始，逐步凈化，嚴(yán)防不同區(qū)域間的奶牛流動(dòng)，對(duì)今后奶牛布魯氏菌病的防控有科學(xué)的指導(dǎo)意義。

本研究把布魯氏菌病監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)因素分析相結(jié)合，利用流行病學(xué)中病例-對(duì)照研究方法，識(shí)別奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)間布魯氏菌病流行的風(fēng)險(xiǎn)因素。本研究建立了該市布魯氏菌病發(fā)生的Logistic回歸模型，識(shí)別出存欄量在1～10只，在奶牛集中村中養(yǎng)殖為主要的風(fēng)險(xiǎn)因素，該模型可以解釋0.728（95%置信區(qū)間 0.657～0.799）的場(chǎng)群。根據(jù)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道[3，10-11]，布魯氏菌病的傳播風(fēng)險(xiǎn)因素有：從經(jīng)紀(jì)人那里購(gòu)買(mǎi)種畜、最近12個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)流產(chǎn)、沒(méi)有專用的產(chǎn)犢場(chǎng)地、存欄量在120頭以上的，這些均是風(fēng)險(xiǎn)因素。而本研究是存欄量在1～10頭以下和奶牛養(yǎng)殖集中村是風(fēng)險(xiǎn)因素，這與本研究地區(qū)的實(shí)際養(yǎng)殖模式相符合。萊西市奶牛養(yǎng)殖3種主要模式，相對(duì)獨(dú)立的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)、奶牛養(yǎng)殖集中村和奶牛養(yǎng)殖小區(qū)。不同的養(yǎng)殖環(huán)境和存欄量與奶牛養(yǎng)殖的生物安全密切相關(guān)[12-13]。這是3種截然不同的養(yǎng)殖模式，通過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖小區(qū)[9，14-15]是多家奶牛養(yǎng)殖戶把許多奶牛集中到一個(gè)場(chǎng)點(diǎn)進(jìn)行飼養(yǎng)，人員流動(dòng)大、車(chē)輛進(jìn)出頻繁，因此養(yǎng)殖小區(qū)是3種模式中生物安全水平最低的一種方式。正是由于奶牛小區(qū)的管理相對(duì)于規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖管理比較差，進(jìn)小區(qū)的奶牛未經(jīng)檢疫，而且養(yǎng)殖密度大，集中擠奶、交叉感染的機(jī)率高，是布魯氏菌病的高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)，因此需要特別注意對(duì)養(yǎng)殖小區(qū)的規(guī)范性要求和監(jiān)督管理。

本研究中的局限：在這次問(wèn)卷調(diào)查中，與奶牛疫病密切相關(guān)的因素如：布魯氏菌病檢疫、奶牛產(chǎn)犢場(chǎng)地、流產(chǎn)物處理、牛奶運(yùn)送方式、糞便處理方式，由于萊西奶牛養(yǎng)殖的產(chǎn)業(yè)化形式非常高，養(yǎng)殖方法、牛奶運(yùn)送、糞便處理等都有專業(yè)人員統(tǒng)一處理，方式方法相同，這可能是分析中差異不顯著的原因。

在尋找布魯氏菌病流行風(fēng)險(xiǎn)因素時(shí)，單因素分析過(guò)程中，有8項(xiàng)因素是差異極顯著的，但在進(jìn)一步多因素分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)因素之間的相關(guān)性很強(qiáng)，這與問(wèn)卷設(shè)計(jì)時(shí)，某些因素本身之間相互聯(lián)系和影響有關(guān)。

萊西市奶牛養(yǎng)殖量占全市56%，養(yǎng)殖模式也是全市奶牛養(yǎng)殖的集合，做好萊西市奶牛布魯氏菌病的防控對(duì)整個(gè)青島市的奶牛布魯氏菌病具有重要意義。本研究是以萊西市為示范，探索全市布魯氏菌病的防控模式。建議今后將對(duì)青島市所轄各區(qū)市采取布魯氏菌病監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)因素和地理空間分布相結(jié)合，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，估計(jì)出各地的布魯氏菌病流行率、陽(yáng)性場(chǎng)戶的分布，識(shí)別各個(gè)地區(qū)的風(fēng)險(xiǎn)因素，有目的、有重點(diǎn)地實(shí)施布魯氏菌病防控措施。

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Serological Investigation and Risk analysis of Dairy Cow Brucellosisin Laixi of Qingdao

Ma Qingxia1，Shen Chaojian2，Liu Junhua1

（1.Qingdao Animal Disease Prevention & Control Center；Fuzhou Road No.28，Qingdao，Shandong 266071；2.China Animal health and Epidemiology center，Nanjing Road No. 369，Qingdao，Shandong 266032）

[Objective] To evaluate the brucellosis prevalence in dairy cows，to describe brucellosis distribution and to identify risk factors of brucellosis transmission between dairy farms in Laixi of Qingdao. [Method] All the un-pregnant cows over the age of 3 months in 1803 dairy farms were sampled. Bengal rose plate test and tube agglutination test were used to examine the serum samples. GIS，Epi Inform TM 7 and SPASS software were used to describe the distribution of brucellosis and identify the risk factors. [Result] The individual prevalence of brucellosis was 0.38% and the herd prevalence was 2.55%. Single factor analysis revealed that there were eight factors associated with brucellosis case（p<0.2） including the herd size，farming pattern，feeding environment，special birth shed，way of milking，way of milk transportation，separation of feces and sewage and mechanical handling of feces. The logistic multi-factor regression analysis showed that the herd size less than 10 cows （OR = 2.21 [1.05-4.63]） and free ranging farming （OR = 4.67 [1.86-11.22]） were associated with brucellosis transmission between herds in Laixi.

brucellosis；prevalence；risk factor

S852.23

：B

：1005-944X（2014）11-0055-05

馬清霞