李 楊,羅廷順,代欣桃,錢金栿*
(1.大理學院,云南大理 671003;2.大理州食品藥品檢驗所,云南大理 671000)
天南星提取物的抑菌作用研究
李 楊1,羅廷順2,代欣桃2,錢金栿1*
(1.大理學院,云南大理 671003;2.大理州食品藥品檢驗所,云南大理 671000)
目的:研究天南星提取物的抑菌作用。方法:采用常量稀釋法測定天南星生藥和飲片的水提取物、醇提取物和乙酸乙酯提取物分別對金黃色葡萄球菌等11種供試菌的抑菌作用。結(jié)果:天南星生藥和飲片的各提取物對11種供試菌均有抑菌作用,其中乙酸乙酯部位抑菌活性最強。結(jié)論:天南星生藥和飲片的各提取物具有較好的抑菌作用,為其進一步開發(fā)利用奠定基礎。
天南星提取物;抑菌作用;最低抑菌濃度
天南星為天南星科天南星屬植物,以云南資源最為豐富。作為常用中藥天南星具有燥濕化痰、祛風止痛、散結(jié)消腫等功效,用于咳嗽、眩暈、驚風等;外用治癰腫、蛇蟲咬傷〔1〕。天南星具有抗腫瘤、抗心律失常、抗氧化、抗驚厥等多種藥理活性〔2-7〕。中草藥抗菌成分具有不易產(chǎn)生耐藥性、廣譜抗菌、毒副作用小等優(yōu)點成為研究的熱點。本文研究了天南星生藥和飲片的水提取物、醇提取物和乙酸乙酯提取物對11種供試菌的體外抗菌作用,為從中草藥中尋找抗菌藥物及天南星的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。
1.1藥材天南星采自云南大理蒼山,經(jīng)大理學院藥學與化學學院夏從龍副教授鑒定為天南星科天南星屬植物天南星(Arisaema erubescens(Wall.)Schott)。天南星飲片購自大理集盛大藥房,經(jīng)鑒定為天南星礬制品。
1.2供試菌株金黃色葡萄球菌(S.aureas),白色葡萄球菌(S.albus),大腸埃希菌(E.coli),痢疾志賀菌(S.dysenteriae),綠膿桿菌(P.aeruginosa),枯草芽胞桿菌(B.subtilis),傷寒桿菌(S.typhi),甲型副傷寒桿菌(S.paratyphiA),乙型副傷寒桿菌(S.paratyphiB),金黃色葡萄球菌ATCC25923,大腸埃希菌ATCC25922由大理學院基礎醫(yī)學院病原微生物教研室提供。實驗中應用金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸埃希菌ATCC25922作為質(zhì)控菌株。
1.3實驗試劑及儀器MH瓊脂(批號:090817)和MH肉湯(批號:090526)購自杭州天和微生物試劑有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(R-210,瑞士步祺);冷凍干燥機(FD-1C-80,北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司);立式壓力蒸汽滅菌器(YXQ-LS-50SII,上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);雙人單面凈化工作臺(SW-CJ-2FD,蘇州凈化設備有限公司);隔水式恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司);電子天平(AL204-1C)。
2.1提取物的制備取天南星塊莖經(jīng)干燥、粉碎,經(jīng)蒸餾水回流提取,過濾,減壓濃縮得天南星水提取物。天南星塊莖粉末經(jīng)95%乙醇回流提取,再經(jīng)70%乙醇回流提取,過濾,減壓濃縮得醇提取物。醇提取物加水溶解后用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物。將上述提取物分別冷凍干燥后備用;天南星飲片處理方法同上〔8〕。
2.2細菌懸液的制備將供試菌株分別接種于MH瓊脂平板上,置37℃恒溫培養(yǎng)箱活化24 h。挑取瓊脂平板上形態(tài)相同的菌落,用滅菌生理鹽水調(diào)濃度至0.5麥氏單位,再用MH肉湯稀釋至含菌量約107CFU∕mL。稀釋后的菌液在15 min內(nèi)接種〔9-10〕。
2.3各提取物最低抑菌濃度的測定取滅菌小試管15支進行編號。其中每組第13、14、15管分別標上“肉湯對照”、“菌液對照”、“溶劑對照”。每支試管分別加入MH肉湯2 mL。配制天南星各提取物濃度為50 mg∕mL。用吸管吸取藥液2 mL放入第1管內(nèi),混勻后吸取2 mL放入第2管,同樣混勻后吸出2 mL放入第3管,依此法逐管進行稀釋至第12管。各管藥物濃度分別為25、12.5、6.25、3.125、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10、0.05、0.025、0.0125 mg∕mL,除“肉湯對照”管外其余各管均加入菌液0.1 mL,放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,取出,觀察生長情況。在對照管符合要求的情況下,以肉眼未見細菌生長的最低藥物濃度為天南星對細菌的最低抑菌濃度(Mini?mal inhibitory concentration,MIC)〔9-11〕。
天南星生藥及飲片的醇提取物部分、乙酸乙酯提取物部分、水提取物部分均有抑菌活性,抑菌活性為乙酸乙酯提取物>醇提取物≥水提取物。天南星飲片提取物較天南星生藥提取物MIC有所降低,提示天南星飲片抑菌活性較強。見表1。
表1 天南星生藥及飲片的各提取物對11種供試菌的MIC
本研究表明,天南星生藥和飲片的各提取物具有較好的抑菌作用,天南星飲片較天南星生藥抑菌作用強,其原因可能是飲片為礬制品,明礬〔12〕入藥后有解毒殺蟲、燥濕止癢、止血止瀉、清熱消痰的功效。明礬是否與天南星生藥中含有的抑菌成分產(chǎn)生協(xié)同作用有待進一步研究。
中國是抗生素濫用嚴重的國家之一,隨著抗生素的濫用,細菌的耐藥性越來越強。植物以及中藥抗菌藥以其不易產(chǎn)生耐藥性、廣譜抗菌、毒副作用小等優(yōu)點成為研究開發(fā)的熱點〔13-14〕。本實驗研究了天南星提取物的抑菌活性,為其抑菌成分的進一步分離及新藥的開發(fā)奠定基礎。
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*通信作者:錢金栿,教授.
(責任編輯 李 楊)
Antibacterial Activity of the Extracts from Arisaema erubescens(Wall.)Schott
LI Yang1,LUO Tingshun2,DAI Xintao2,QIAN Jinfu1*
(1.Dali University,Dali,Yunnan 671003,China;2.Dali Institute for Food and Drug Control,Dali,Yunnan 671000,China)
Objective:To explore the antibacterial activity of the extracts from Arisaema erubescens(Wall.).Methods:Solution dilution method was applied to measure the antibacterial effects of aqueous extract,ethanol extract and ethyl acetate extract from Arisaema erubescens(Wall.)against 11 experimental bacteria include Staphylococcus aureus.Results:All extracts showed antibacterial activity on 11 experimental bacteria.Ethyl acetate extract exhibited best antibacterial activity in 3 extracts.Conclusion:All the extracts of Arisaema erubescens(Wall.)exhibited good antibacterial effect.The research provided a scientific basis for the developing and utilizingof Arisaemaerubescens(Wall.).
extracts in Arisaema erubescens;antibacterial activity;minimal inhibitory concentration(MIC)
R285
A
1672-2345(2014)02-0009-03
10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.004
云南省教育廳研究生基金資助項目(2011J057)
2013-12-04
2013-12-17
李楊,助理編輯,主要從事藥物分析及活性研究.