尾葉香茶菜水溶性部位化學成分研究

湯 建，馬瑞麗，劉洪川，歐陽臻，陳海生*

1江蘇大學藥學院，鎮(zhèn)江 212013;2 第二軍醫(yī)大學藥學院，上海 200433

尾葉香茶菜Rabdosia excisa (Maxim.)Hara，又名龜葉草、狗日草、野蘇子，為唇形科香茶菜屬植物，主產于東北等各地山區(qū)。性涼味甘，民間用于治療胃炎，膀胱脹痛，癌癥，感冒發(fā)熱，關節(jié)痛，蛇蟲咬傷等［1，2］。尾葉香茶菜中含有二萜、三萜、黃酮、揮發(fā)油等化學成分，前期主要研究藥材中的貝殼杉烷型二萜化合物，共分離鑒定了30 多種二萜類化合物，但未對大極性部位的非二萜類化學成分進行系統(tǒng)研究［3，4］。為了深入開發(fā)和利用這一野生藥用資源，本文對尾葉香茶菜甲醇提取物的水溶性部位進行化學成分研究，從中分離得到了9 個化合物，分別是山柰酚-3-O-蕓香糖苷(1)、蘆丁(2)、異槲皮苷(3)、槲皮素-7-O-鼠李糖苷(4)、金櫻子皂苷A (5)、β-胡蘿卜苷(6)、咖啡酸(7)、槲皮素(8)、和熊果酸(9)，中化合物1，4，5，7，8 為首次從尾葉香茶菜中分離得到。

1 實驗部分

1.1 儀器與材料

Bruker AVANCEII400 NMR 核磁共振儀(Bruker);R-21 旋轉蒸發(fā)儀(BUCHI);WFH-203 紫外分析儀(上海精科實業(yè)有限公司);XAD16N 大孔吸附樹脂(上海陶氏化學);TOYOPEARL LW-40C 凝膠(日本TOSOH 公司);柱色譜薄層色譜為青島海洋化工廠生產;樹脂柱洗脫用去離子水和90%乙醇;其余試劑為國產分析純。

藥材于2009 年9 月采自吉林長白山區(qū)，經(jīng)江蘇大學藥學院歐陽臻教授鑒定為尾葉香茶菜(Rabdosia excisa (Maxim.)Hara)。

1.2 提取與分離

尾葉香茶菜藥材3.0 kg，干燥粉碎至10～20目，用75%甲醇回流提取3 次，每次2 h，合并提取液后減壓濃縮，得6 L 左右混懸液，調pH 至8～9，用乙酸乙酯(6 L ×3)萃取，剩余水溶性部位調至中性后進一步濃縮至4 L，同時蒸除殘余乙酸乙酯，趁熱過濾后上XAD16N 大孔吸附樹脂柱(80 mm ×800 mm)，吸附過夜后用3 BV 水和3 BV 10%乙醇依次洗脫，再用95%乙醇洗脫。收集95%乙醇洗脫部位，蒸除溶劑得棕黃色固體35.0 g。取其中12.0 g 固體上粗短型硅膠柱(100～200 目)，分別用二氯甲烷/甲醇混合液(10∶1—5∶1—1∶1)梯度洗脫，得到F1(2.5 g)，F(xiàn)2(5.5 g)，F(xiàn)3(1.0 g)。F3流分經(jīng)反復HW-40C 和硅膠柱層析，得化合物1 (9 mg)，2(21 mg)。3.0 g F2流分經(jīng)反復HW-40C 和硅膠柱層析，得化合物3 (25 mg)，4 (6 mg)，5 (11 mg)和6 (10 mg)。F1流分經(jīng)反復硅膠柱層析，得化合物7(7 mg)，8 (18 mg)和9 (9 mg)。

2 結構鑒定

化合物1 淡黃色粉末，HCl-Mg 反應和Molish反應均呈陽性。1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.57 (1H，s，5-OH)，10.88 (1H，s，3-OH)，10.15(H，s，4'-OH)，6.42 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，7.99 (2H，d，J=8.8 Hz，H-2'，6')，6.88 (2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5')，5.31(1H，d，J=7.6 Hz，H-1'')，4.38 (1H，s，H-1''')，4.43-5.36 (6H，HO-sugar)，3.04-3.70 (11H，H-sugar)，0.98 (3H，d，J=6.0 Hz，6'''-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻［5］報道的山柰酚-3-O-蕓香糖苷一致，故該化合物推斷為山柰酚-3-O-蕓香糖苷。

化合物2 淡黃色粉末，HCl-Mg 反應和Molish反應均呈陽性，TLC Rf值和蘆丁標準品一致。1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.60 (1H，s，5-OH)，10.82 (1H，s，OH)，9.20-9.60 (2H，br s，2 ×OH)，6.39 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，7.55 (1H，s，H-2')，7.54 (1H，d，J=9.6 Hz，H-6')，6.84 (1H，d，J=8.8 Hz，H-5')，5.35(1H，d，J=7.6 Hz，H-1'')，4.38 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1''')，4.30-5.30 (6H，HO-sugar)，3.05-3.72(11H，H-sugar)，1.00 (3H，d，J=6.4 Hz，6'''-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻［5，6］報道的蘆丁一致，故該化合物推斷為蘆丁。

化合物3 黃色粉末，HCl-Mg 反應和Molish 反應均呈陽性。1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.65 (1H，s，5-OH)，10.82 (1H，s，OH)，9.25～9.77 (2H，br s，2 ×OH)，6.41 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，7.57～7.60(2H，m，H-2'，6')，6.85 (1H，dd，J=6.4，2.8 Hz，H-5')，5.47 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1'')，4.27～5.30(4H，HO-sugar)，3.09～3.60 (6H，H-sugar)。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］報道的異槲皮苷一致，故該化合物推斷為異槲皮苷。

化合物4 黃色粉末，HCl-Mg 反應和Molish 反應均呈陽性。1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.63 (1H，s，5-OH)，10.86 (1H，s，OH)，9.25～9.96 (2H，br s，2 ×OH)，6.78 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.41 (1H，s，H-6)，7.70 (1H，br s，H-2')，7.54(1H，d，J=8.8 Hz，H-6')，6.90 (1H，d，J=8.8 Hz，H-5')，5.41 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1'')，4.25～5.25(3H，HO-sugar)，3.30～3.90 (4H，H-sugar)，1.08(3H，6''-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］報道的槲皮素-7-O-鼠李糖苷一致，故該化合物推斷為槲皮素-7-O-鼠李糖苷。

化合物5 白色粉末，Molish 反應呈陽性，噴5%硫酸/乙醇后加熱顯紫紅色。1H NMR (DMSOd6，400 MHz)δ:5.14～5.19 (2H，m，H-12，1')，4.42(1H，m，H-2β)，4.16 (1H，m，H-23a)，4.22 (1H，d，J=4.4 Hz，H-23b)，3.85 (1H，m，H-3)，1.29 (3H，br s，29-CH3)，1.10 (3H，br s，27-CH3)，0.92 (3H，br s，25-CH3)，0.85 (3H，d，J=6.4 Hz，30-CH3)，0.68 (3H，br s，24-CH3)，0.54 (3H，br s，26-CH3)。13C NMR (DMSO-d6，100 MHz)δ:176.1 (C-28)，138.7 (C-13)，127.6 (C-12)，76.1 (C-3)，72.2 (C-19)，67.9 (C-2)，64.4 (C-23)，53.7 (C-18)，47.8 (C-1)，47.4 (C-17)，47.2 (C-5)，46.5(C-9)，43.0 (C-4)，41.7 (C-14，20)，41.5 (C-8)，37.8 (C-10)，37.1 (C-22)，32.6 (C-7)，28.5 (C-15)，26.9 (C-29)，26.3 (C-16)，25.6 (C-21)，24.4(C-27)，23.8 (C-11)，18.0 (C-6)，17.3 (C-30)，17.0 (C-26)，16.9 (C-25)，14.2 (C-24)，94.6 (C-1')，78.1 (C-5')，77.2 (C-3')，72.8 (C-2')，70.0(C-4')，61.1 (C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］報道的金櫻子皂苷A (2α，3β，19α，23-四羥基烏蘇-12-烯-28-O-葡萄糖苷，即2α，19α，23-三羥基熊果酸-28-O-葡萄糖苷)一致。

化合物6 白色粉末，噴5%硫酸/乙醇后加熱顯紫色，與β-胡蘿卜苷標準品對照，Rf值一致，鑒定為β-胡蘿卜苷。

化合物7 淡黃色粉末，TLC 254 nm 下顯蘭色，NH3熏過后吸收更強烈。1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.12 (1H，COOH)，9.53 (1H，3-OH)，9.44 (1H，4-OH)，7.40 (1H，d，J=12 Hz，H-3')，6.15 (1H，d，J=12.0 Hz，H-2')，7.02 (1H，m，H-2)，6.97 (1H，d，J=7.6 Hz，H-6)，6.76 (1H，d，J=7.6 Hz，H-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道的咖啡酸一致，故推斷該化合物為咖啡酸。

化合物8 黃色粉末，TLC 365 nm 下顯亮黃色，HCl-Mg 反應陽性。1H NMR (DMSO-d6，400 MHz)δ:12.60 (1H，s，5-OH)，10.86 (1H，s，OH)，9.25～9.65 (2H，br s，2 ×OH)，6.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，7.68 (1H，d，J=1.2 Hz，H-2')，7.54 (1H，dd，J=8.4，1.2 Hz，H-6')，6.88 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］報道的槲皮素一致。

化合物9 白色粉末，噴5%硫酸/乙醇后加熱顯紫紅色。1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:5.21 (1H，m，H-12)，3.20 (1H，m，H-3)，2.28 (1H，d，J=10.0 Hz，H-18)，1.09 (3H，br s，CH3)，0.98 (3H，br s，CH3)，0.96 (3H，d，J=11.2 Hz，CH3)，0.91 (3H，br s，CH3)，0.87 (3H，d，J=6.4 Hz，CH3)，0.77 (3H，br s，CH3)，0.76 (3H，br s，CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道的熊果酸一致，故推斷該化合物為熊果酸。

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