馬蘭中的五個(gè)酚性化合物

季 鵬，王國凱*，劉勁松，羅爭輝，劉吉開，王 剛

1安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，現(xiàn)代中藥安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230031;2 中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650204

馬蘭為菊科馬蘭屬植物馬蘭Kalimeris indica(L.)Sch-Bip 的帶根全草，別名馬菜、馬蘭頭、泥鰍串、雞兒腸、田邊菊等。廣泛分布于我國江蘇、浙江、江西、福建、湖南、湖北、廣東、海南、廣西、四川、貴州等地，常見于田埂、草叢、林緣、溪邊等潮濕處，具有非常豐富的研究資源［1］。馬蘭是多年生草本植物，其莖嫩葉肥、口味清香爽口、營養(yǎng)豐富，常作為野菜食用［2］。馬蘭常以全草或根入藥，具清熱解毒，散瘀止血，溫肺止咳，散寒止痛，消積之功效。主治感冒發(fā)熱，咳嗽，急性咽炎，扁桃體炎，流行性腮腺炎，傳染性肝炎，胃、十二指腸潰瘍等［3］。采用馬蘭治療乙肝病的臨床研究多有報(bào)道［4，5］，療效顯著。本研究組已經(jīng)發(fā)表了一系列馬蘭的化學(xué)成分研究報(bào)道［6-9］，從馬蘭的乙醇提取物中分離到22 個(gè)化合物(包括三萜類、脂肪酸類、甾體類、蒽醌類等)，為了更加深入的探索馬蘭抗病毒活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究改進(jìn)提取分離方法，采用熱回流提取后，大孔樹脂富集中小極性化合物，不同濃度乙醇洗脫分段后，再分別通過硅膠柱及凝膠柱等色譜分離，以期尋找到活性先導(dǎo)母體化合物，結(jié)果從馬蘭全草80 %乙醇提取物中分離鑒定了5 個(gè)酚性化合物，分別是漢黃芩素(1)、千層紙素A(2)、4-羥基苯乙酮(3)、7，4'-二羥基異黃酮(4)、芹菜素(5)，所有化合物均為首次從該屬植物中分得。

1 儀器和材料

熔點(diǎn)由XRC-1 型顯微熔點(diǎn)儀測定，四川大學(xué)科儀廠生產(chǎn);EI-MS 由VG AutoSpec-3000 質(zhì)譜儀測定;ESI-MS 由API Qstar Pulser 質(zhì)譜儀測定;核磁共振由Bruker AVANCE Ⅲ-600、DRX-500、AV-400 核磁共振波譜儀(TMS 為內(nèi)標(biāo));分析型和制備型HPLC 為Agilent 1100 HPLC，色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18和YMC 柱;柱層析硅膠(80～100 目和200～300目)以及GF254薄層硅膠板均為青島海洋化工廠生產(chǎn);Sephadex LH-20 為瑞典Amersham Biosciences 公司產(chǎn)品;AB-8 型大孔樹脂為南開大學(xué)化工廠生產(chǎn);顯色方法為紫外燈下波長254 和365 nm 處觀察熒光，10% 硫酸乙醇溶液和硫酸香草醛處理后加熱顯色及碘蒸氣顯色。

馬蘭藥材2012 年4 月采自安徽合肥大蜀山，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為菊科馬蘭屬植物馬蘭Kalimeris indica (L.)Sch-Bip 的帶根全草，憑證標(biāo)本保存于安徽中醫(yī)藥大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室。

2 提取與分離

馬蘭干燥帶根全草20 kg，80 %乙醇回流提取2次(300 L×2)，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓回收溶劑，濃縮至無醇味后稀釋至80 L(即每mL 提取液相當(dāng)于原藥材0.31 g)，通過AB-8 大孔樹脂(干重30 kg)吸附，即樹脂與藥材重量比=1.2∶1，然后，分別用水、40 %、60 %、80 %乙醇依次洗脫，流速8 mL/min，每個(gè)部分各洗脫4 個(gè)柱體積(直徑:柱高=20∶120 cm)，濃縮至浸膏后，得到4 個(gè)部分，80 %乙醇部分(120 g)上硅膠柱，石油醚-丙酮(100 ∶0 →0∶100)梯度洗脫得6 個(gè)組分(A、B、C、D、E、F、)。組分C(石油醚∶丙酮-50∶1)經(jīng)硅膠柱，石油醚-丙酮(20∶1→0∶1)梯度洗脫得10 個(gè)亞組分，其中C2經(jīng)sephadex LH-20 柱甲醇洗脫得到化合物1(22 mg)，組分D(石油醚∶丙酮-30∶1)經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮(20∶1→0∶1)梯度洗脫得13 個(gè)亞組分，其中D3經(jīng)sephadex LH-20 柱甲醇洗脫，得到化合物2(6 mg)。60%乙醇部分(200 g)上硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脫得8 個(gè)組分(G、H、I、J、K、L、M、N)。組分I(二氯甲烷∶甲醇-50∶1)，上硅膠柱，氯仿-甲醇(50∶1→0∶1)梯度洗脫，得15 個(gè)亞組分，其中I3經(jīng)sephadex LH-20 柱以三氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫，得到化合物3(7 mg)，I5經(jīng)sephadex LH-20 柱，甲醇洗脫，再重結(jié)晶得到化合物4(10 mg)。I8經(jīng)硅膠柱色譜以三氯甲烷-甲醇(30∶1)洗脫得到化合物5(12 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色針晶，mp.203～205 ℃，易溶于丙酮，鹽酸鎂粉反應(yīng)陽性;ESI-MS m/z ［M-H］-為283，分子式為C16H12O5;1H NMR(CDCl3，600 MHz)δ:12.49(1H，s，5-OH)，7.52～7.56(3H，m，H-3'，4'，5')，7.89～7.90(2H，m，H-2'，6')，6.68(1H，s，H-3)，6.43(1H，s，H-6)，4.02(s，OCH3);13C NMR(CDCl3，150 MHz)δ:182.7(s，C-4)，163.7(s，C-2)，157.9(s，C-7)，155.5(s，C-5)，149.1(s，C-9)，132.2(d，C-4')，131.4 (s，C-1')，129.5 (d，C-3'，5')，127.0(s，C-8)，126.4(d，C-2'，6')，106.1(d，C-3)，105.5(s，C-10)，99.0(d，C-6)，62.3(q，OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，確定該化合物為漢黃芩素(wogonin)。

化合物2 淡黃色針狀結(jié)晶，mp.202～204 ℃，易溶于丙酮，鹽酸鎂粉反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陰性;ESI-MS m/z［M-H］-為283，分子式為C16H12O5;1H NMR(acetone-d6，600 MHz)δ:12.59(1H，s，5-OH)，9.51(1H，s，7-OH)，8.11(2H，m，H-2'，6')，7.73～7.56(3H，m，H-3'，4'，5')，6.83(1H，s，H-3)，6.33(1H，s，H-8)，3.96(3H，s，OCH3);13C NMR(acetone-d6，150 MHz)δ:183.3(s，C-4)，164.4(s，C-2)，158.2(s，C-7)，153.9(s，C-5)，153.7(s，C-9)，132.8(d，C-4'，6)，132.3(s，C-1')，130.1(d，C-3'，5')，127.2(d，C-2'，6')，106.1(d，C-3)，105.4(s，C-10)，95.8(d，C-8)，61.9(q，OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，確定該化合物為千層紙素A(oroxylin A)。

化合物3 白色針晶，mp.108～111 ℃，ESI-MS m/z ［M+H］+137，［M+Na］+159，分 子 式C8H802;1H NMR(acetone-d6，600 MHz)δ:7.89(2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6)，6.91(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)，2.48(3H，s，CH3);13C NMR(acetone-d6，150 MHz)δ:199.2(s，C-7)，162.7(s，C-4)，131.5(d，C-2，6)，130.4(s，C-1)，116.0(d，C-3，5)，26.3(q，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，確定該化合物為4-羥基苯乙酮(4-hydroxyacetophenone)。

化合物4 白色粉末，mp.309～311 ℃，ESI-MS m/z［M+H］+為255，分子式C15H10O4;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:8.12(1H，s，H-2)，7.88(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，6.94(1H，d，J=8.5 Hz，H-6)，6.91(1H，s，H-8)，7.36(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.84(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，5');13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:178.3(s，C-4)，164.7(s，C-7)，158.8(s，C-4')，158.2(s，C-9)，154.8(d，C-2)，131.5(d，C-2'，6')，128.6(d，C-5)，126.0(s，C-1')，124.4(s，C-3)，118.2(s，C-10)，116.5(d，C-6)，116.3(d，C-3'，5')，103.3(d，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道基本一致，確定該化合物為7，4'-二羥基異黃酮(7，4'-dihydroxyisoflavone)。

化合物5 淡黃色無定形粉末，mp.210～212℃，ESI-MS m/z［M-H］-為269，分子式C15H10O5;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:7.37(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，6')，6.91(2H，d，J=8.6 Hz，H-3'，5')，6.58(1H，s，H-3)，6.42(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2.2 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:183.9(s，C-4)，166.9(s，C-2)，166.3(s，C-7)，163.3(s，C-9)，162.9(s，C-4')，159.6(s，C-5)，129.6(d，C-2'，6')，123.3(s，C-1')，117.1(d，C-3'，5')，105.2(s，C-10)，103.8(d，C-3)，100.4(d，C-6)，95.3(d，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，確定該化合物為芹菜素(apigenin)。

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