北京地區(qū)育齡期婦女TORCH篩查結(jié)果調(diào)查分析

龍 彥，趙曉濤，孫媛媛，劉 暢，王 輝

TORCH是一組具有新生兒致畸作用的病原體的縮寫，最先由Nahmias等[1]于1971年提出，包括弓形蟲(toxoplasma，TOX)、風(fēng)疹病毒(rubellavirus，RV)、巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus，CMV)及單純皰疹病毒Ⅰ/Ⅱ(herpes simple virusⅠ/Ⅱ，HSVⅠ/Ⅱ)。育齡期婦女由于自身免疫功能的改變，易發(fā)生TORCH感染。孕婦發(fā)生TORCH感染，病原體可以通過胎盤或產(chǎn)道感染胎兒或新生兒，引起早產(chǎn)、死胎、先天性畸形、新生兒中樞神經(jīng)損害等諸多不良后果，因此進(jìn)行TORCH感染的早期檢測(cè)具有重要意義。anti-TORCH IgM和IgG檢測(cè)是目前臨床診斷TORCH感染的重要依據(jù)[2]，目前國(guó)內(nèi)主要采用ELISA法進(jìn)行定性或半定量檢測(cè)，但該方法需手工操作、耗時(shí)，且結(jié)果判讀受主觀影響較大，靈敏度較低。本研究采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)檢測(cè)anti-TORCH，從而對(duì)北京地區(qū)育齡婦女的TORCH感染情況進(jìn)行調(diào)查，為指導(dǎo)育齡期婦女優(yōu)生優(yōu)育、預(yù)防新生兒TORCH感染提供有力數(shù)據(jù)資料，以提高人口素質(zhì)。

1 對(duì)象與方法

1.1 調(diào)查對(duì)象 收集北京大學(xué)人民醫(yī)院2012年11月—2013年11月進(jìn)行孕前篩查和孕期普查的婦女分別為377例、6 601例共計(jì)6 978例。年齡20～48歲，中位年齡為31歲。將孕婦按年齡分為低齡孕婦組(<35歲)3 730例和高齡孕婦組(≥35歲)2 871例，兩年齡組間例數(shù)差異未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=22.73，P<0.05)。對(duì)受試者使用分離膠真空采血管抽取靜脈血3 ml，離心半徑10 cm，3 000 r/min離心3 min，分離血清樣本，4 ℃保存于48 h內(nèi)完成檢測(cè)，48 h內(nèi)未完成檢測(cè)者置-20 ℃保存待檢。

1.2 主要儀器及試劑 Liaison全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為意大利Diasorin公司儀器，配套試劑包括包被有相應(yīng)病毒抗原的磁性微粒、結(jié)合了異魯米諾衍生物的鼠抗人IgM單抗或鼠抗人IgG單抗、高值和低值定標(biāo)液、激發(fā)液和緩沖液。

1.3 檢測(cè)方法 測(cè)定原理是病原體抗原包被磁性微粒作為固相載體，鼠抗人單克隆抗體鏈接異魯米諾衍生物作為抗體結(jié)合物。第一次孵育期間，定標(biāo)物、標(biāo)本或質(zhì)控品中的病原體抗體結(jié)合固相載體(磁微粒)，第二次孵育過程中，抗體結(jié)合物與固相載體上的病原體抗體反應(yīng)。每次孵育后，通過洗滌除去未結(jié)合的物質(zhì)，隨后加入激發(fā)試劑并激發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，通過光電倍增管測(cè)量相關(guān)光單位(RLU)，并顯示定標(biāo)物、標(biāo)本或質(zhì)控品中抗體的量。測(cè)量IgM抗體時(shí)緩沖液中含有羊抗人IgG的抗體，可除去標(biāo)本中可能存在的病毒IgG抗體以及類風(fēng)濕因子等的干擾。該方法檢測(cè)anti-TORCH IgM和IgG的靈敏度和特異度均在95%以上，且不受輕中溶血(血紅蛋白<1 000 mg/dl)、嚴(yán)重乳糜(三酰甘油<3 000 mg/dl)、膽紅素血(膽紅素<20 mg/dl)、含有顆粒物質(zhì)或明顯被微生物污染等因素的影響。每批標(biāo)本測(cè)定前均進(jìn)行光路校正和質(zhì)控。

1.4 結(jié)果判讀 CLIA測(cè)定弓形蟲抗體(anti-TOX) IgM濃度>6 AU/ml、anti-TOX IgG >7.2 U/ml者為陽性；風(fēng)疹病毒抗體(anti-RV)IgM濃度>25 AU/ml、anti-RV IgG>10 U/ml者為陽性；巨細(xì)胞病毒抗體(anti-CMV)IgM濃度>15 AU/ml、anti-CMV IgG>0.4 U/ml者為陽性；單純皰疹病毒Ⅰ/Ⅱ抗體(anti-HSVⅠ/Ⅱ)IgM濃度>1.1 Index、anti-HSVⅠ/ⅡIgG測(cè)定值>1.1 Index者為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel 2003和 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，組間陽性檢出率比較采用χ2檢驗(yàn)，組間多重比較采用χ2分割法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 anti-TORCH IgM檢測(cè)結(jié)果分析 在調(diào)查人群中，共檢測(cè)anti-TOX IgM 6 601例、anti-RV IgM 6 691例、anti-CMV IgM 6 564例、anti-HSVⅠ/Ⅱ IgM 6 962例。與其他3種病原體比較，anti-HSVⅠ/Ⅱ IgM陽性檢出率最高，為11.19%(P<0.007)，其次為anti-RV IgM和anti-CMV IgM，陽性檢出率分別為2.63%、2.54%，二者陽性檢出率之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.755)，anti-TOX IgM的陽性檢出率較其他3組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.007，見表1)。

2.2 不同季節(jié)anti-TORCH IgM的陽性檢出率分析 按季節(jié)分析，anti-CMV IgM以秋季為高發(fā)期(陽性檢出率為3.66%)，與其他三季比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.007)；anti-HSVⅠ/Ⅱ IgM 以春、秋兩季為高發(fā)期(陽性檢出率分別為12.47%和12.41%)，二者與冬、夏兩季比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.007)，但春、秋兩季比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；anti-TOX IgM、anti-RV IgM在不同季節(jié)的陽性檢出率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.007，見表2)。圖1為各個(gè)TORCH特異性IgM抗體在不同月份的陽性檢出率。從圖中可以看出anti-TOX IgM在2月份的陽性檢出率最高，anti-RV IgM在6月份的陽性檢出率最高。

表1 anti-TORCH-IgM陽性檢出率比較

Table1 Comparison of seropositive rate of anti-TOX IgM, anti-RV IgM, anti-CMV IgM and anti-HSV IgM

檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)例數(shù)陽性例數(shù)陽性檢出率(%)anti-TOXIgM6601490.74anti-RVIgM66911762.63anti-CMVIgM65641672.54anti-HSVⅠ/ⅡIgM696277911.19χ2值958.31P值0.00

注：anti-TOX=弓形蟲抗體；anti-RV=風(fēng)疹病毒抗體；anti-CMV=巨細(xì)胞病毒抗體；anti-HSVⅠ/Ⅱ=單純皰疹病毒Ⅰ/Ⅱ抗體

注：anti-TOX=弓形蟲抗體；anti-RV =風(fēng)疹病毒抗體；anti-CMV=巨細(xì)胞病毒抗體；anti-HSVⅠ/Ⅱ=單純皰疹病毒Ⅰ/Ⅱ抗體

圖1 不同月份anti-TORCH IgM陽性檢出率比較

Figure1 The seropositive rate of anti-TORCH IgM of different month

2.3 不同年齡組孕婦anti-TORCH IgM抗體檢測(cè)結(jié)果分析 低齡孕婦組anti-HSVⅠ/ⅡIgM的陽性檢出率高于高齡孕婦組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高齡孕婦組anti-TOX IgM、anti-CMV IgM的陽性檢出率高于低齡孕婦組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；anti-RV IgM的檢出率在兩年齡組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見表3)。

表2 不同季節(jié)TORCH IgM抗體陽性檢出率比較〔%(n/N)〕

Table2 Comparsion of seropostitive rate of anti-TORCH IgM of different seasons

組別anti-TOXIgManti-RVIgManti-CMVIgManti-HSVⅠ/ⅡIgM春季0.80(17/2135)2.75(59/2143)2.03(43/2111)12.48(280/2244)夏季0.46(9/1965)2.75(55/2000)2.48(49/1962)9.78(203/2075)△秋季0.46(10/1473)2.18(33/1514)3.66(54/1475)*△▲12.41(195/1571)*▲冬季1.26(13/1028)2.80(29/1034)2.06(21/1016)9.42(101/1072)△χ2值6.1261.56110.56113.613P值0.1060.6680.0140.004

注：與夏季比較，*P<0.05;與春季比較，△P<0.05;與冬季比較，▲P<0.05;春季3月～5月；夏季6月～8月；秋季9月～11月；冬季12月～2月

表3 不同年齡組anti-TORCH IgM陽性檢出率比較〔n(%)〕

2.4 anti-TORCH IgG抗體檢測(cè)結(jié)果分析 在調(diào)查人群中，共檢測(cè)anti-TOX IgG 2 216例、anti-RV IgG 2 991例、anti-CMV IgG 2 910例、anti-HSVⅠ/ⅡIgG 2 473例，anti-TORCH IgG的總陽性檢出率為55.2%，其中IgG類抗體中anti-CMV IgG的陽性檢出率最高，達(dá)84.36%(P<0.007)；anti-TOX IgG陽性檢出率最低，僅為1.22%(P<0.05,見表4)。

表4 anti-TORCH IgG抗體檢測(cè)結(jié)果(%)

Table4 Prevalence of anti-TOX IgG, anti-RV IgG, anti-CMV IgG and anti-HSV IgG

檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)例數(shù)陽性例數(shù)陽性檢出率(%)anti-TOXIgG2216271.22anti-RVIgG2991170356.94anti-CMVIgG2910245584.36△▲anti-HSVⅠ/ⅡIgG2473166267.21*△▲χ2值3760.084P值0.000

注：與anti-CMV IgG比較，*P<0.007；與anti-TOX IgG比較，△P<0.007；與anti-RV IgG比較，▲P<0.007

3 討論

孕婦由于內(nèi)分泌的改變和免疫力下降，尤其是T淋巴細(xì)胞免疫功能減弱而易發(fā)TORCH原發(fā)感染或使?jié)撛诘牟《净罨饛?fù)發(fā)感染，其感染呈世界性分布[3-6]。TORCH感染對(duì)孕婦身體影響較小，常為隱性感染，但各種病原體均可在孕期通過胎盤垂直傳播胎兒，或通過孕婦生殖道逆行擴(kuò)散，引起胎兒感染以及胎兒分娩時(shí)圍生期感染，感染TORCH可導(dǎo)致胎兒畸形、早產(chǎn)或胎兒死亡、黃疸、肝脾腫大、永久性智力低下等疾病，甚至部分可導(dǎo)致血小板減少性紫癜[7]。因此，TORCH感染的潛伏性、危害性，加上診斷及治療手段尚欠缺的現(xiàn)狀，應(yīng)重視對(duì)育齡期婦女進(jìn)行TORCH的篩查。傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)由于耗時(shí)、條件要求高，不適用于臨床篩查；對(duì)孕婦進(jìn)行血清學(xué)IgM、IgG檢測(cè)，簡(jiǎn)便、快速，可輔助判斷是否存在相應(yīng)病原體感染及機(jī)體的免疫狀態(tài)，國(guó)內(nèi)以ELISA法應(yīng)用最為廣泛[2-3]，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于TORCH感染陽性檢出率的報(bào)道多數(shù)采用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，但ELISA法需手工操作，受試劑反應(yīng)溫度、溫育時(shí)間、實(shí)驗(yàn)條件等諸多因素影響，且只能進(jìn)行定性或半定量檢測(cè)。為適應(yīng)臨床快速、準(zhǔn)確診斷的要求，本研究采用CLIA對(duì)TORCH進(jìn)行檢測(cè)，該法測(cè)定的靈敏度高、特異度好，且具有抗干擾能力，適用于常規(guī)臨床工作。對(duì)于血清學(xué)抗體篩查陽性的高危人群，可以進(jìn)一步進(jìn)行羊水、臍帶血病毒核酸的檢測(cè)等手段明確是否存在宮內(nèi)感染。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于TORCH感染的陽性檢出率報(bào)道不一[4-6,8]，本研究顯示anti-TOX、anti-RV、anti-CMV、anti-HSVⅠ/Ⅱ IgM的陽性檢出率分別為0.62%、2.63%、2.54%、11.19%，其中anti-CMV IgM與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致，而anti-TOX IgM、anti-RV IgM陽性檢出率均低于Tamer等[9]針對(duì)Turkey地區(qū)的報(bào)道(2.0%、4.3%)，此可能與TORCH感染分布存在地域經(jīng)濟(jì)發(fā)展?fàn)顩r、氣候、人群體質(zhì)及種族差異等有關(guān)。此外，北京地區(qū)衛(wèi)生條件較好亦可能是陽性檢出率低于Turkey地區(qū)的原因之一；西方國(guó)家接觸寵物、不全熟肉類加工的飲食習(xí)慣可能是anti-TOX IgM陽性檢出率較高的重要原因。本研究中anti-TORCH IgG的總陽性檢出率為55.2%，低于Tamer等[9]報(bào)道孕婦TORCH-IgG陽性檢出率90%，各病原體的陽性檢出率分別為1.22%、56.94%、84.36%、67.21%，均低于國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道[5,9]。但高于國(guó)內(nèi)楊樹法等[10]報(bào)道北京地區(qū)孕婦TORCH感染率的ELISA結(jié)果，可能與CLIA方法的靈敏度提高有關(guān)。

本文結(jié)果還顯示：與其他三季比較，anti-CMV IgM以秋季為高發(fā)期(陽性檢出率為3.66%)；anti-HSVⅠ/Ⅱ IgM 以春、秋兩季為高發(fā)期(陽性檢出率分別為12.48%和12.41%)；anti-TOX IgM、anti-RV IgM在不同季節(jié)的陽性檢出率無差異。anti-TOX IgM在2月份的陽性檢出率最高，anti-RV IgM在6月份的陽性檢出率最高。提示在各病原體感染相對(duì)高發(fā)季節(jié)及月份，應(yīng)引起相應(yīng)的重視，加強(qiáng)對(duì)該種病原體的檢查，增加篩查數(shù)量及頻率。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)低齡孕婦組anti-HSVⅠ/ⅡIgM的陽性檢出率高于高齡孕婦組，高齡孕婦組anti-TOX IgM、anti-CMV IgM的陽性檢出率高于低齡孕婦組，anti-RV IgM兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，此與國(guó)內(nèi)匡紅等[4]及國(guó)外Hao[11]的報(bào)道一致，可能與人群感染CMV后潛伏感染率高，而高孕齡人群體內(nèi)免疫系統(tǒng)孕后改變較低齡孕婦組更為明顯，CMV潛在感染更易激活有關(guān)，而TOX和RV感染人體的方式明顯不同；此外，低齡孕婦組anti-HSVⅠ/Ⅱ IgM陽性檢出率高于高齡孕婦組可能與HSVⅠ/Ⅱ主要以性接觸為主要傳播途徑有關(guān)。

對(duì)TORCH感染提倡以預(yù)防為主，在人群中尤其是育齡期婦女普及對(duì)TORCH宮內(nèi)感染的宣傳力度，提高其對(duì)TORCH感染危害性的認(rèn)識(shí)，自覺進(jìn)行TORCH篩查，尤其是在TORCH相對(duì)高發(fā)季節(jié)，必要時(shí)對(duì)IgM陽性者進(jìn)行治療，以達(dá)到優(yōu)生目的，對(duì)IgG陰性者及時(shí)接種疫苗以獲得免疫力。本次調(diào)查結(jié)果顯示anti-TORCH IgM陽性檢出率較高，且孕婦TORCH感染后傳染胎兒或新生兒的概率高達(dá)30%～45%[12]，從優(yōu)生優(yōu)育的角度考慮，對(duì)孕前婦女進(jìn)行TORCH特異性抗體檢查及對(duì)IgM抗體陽性婦女進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，尤其是國(guó)內(nèi)人口基數(shù)大，應(yīng)用簡(jiǎn)便、快速的TORCH篩查方法，確定TORCH感染高危人群，必要時(shí)完善其他檢測(cè)，進(jìn)行跟蹤隨診，是十分有必要的。同時(shí)也需要對(duì)anti-TORCH IgM陽性者謹(jǐn)慎分析，必要時(shí)進(jìn)行核酸分析及羊水檢查和B超等相關(guān)的產(chǎn)前診斷，以避免誤診和不必要的終止妊娠。

1 Nahmias AJ,Walls KW,Stewart JA,et al.The TORCH complex-perinatal infections associated with toxoplasma and rubella,cytomegol-and herpes simplex viruses[J].Pediatric Research,1971,5(8):405-406.

2 林貴高,李金明.臨床實(shí)驗(yàn)室建立 TORCH 檢驗(yàn)程序的重要性[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(7):737-741.

3 易旺云，袁明生，曾彩霞.中山小欖地區(qū)孕早期孕婦TORCH-IgM 陽性率調(diào)查研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2013，16(10):3467-3469.

4 匡紅,府偉靈,曹利.重慶地區(qū) 2067 例育齡婦女 TORCH 感染的調(diào)查研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2006,16(11):1254-1256.

5 Cowan FM,French RS,Mayaud P,et al.Seroepidemiological study of herpes simplex virus types 1 and 2 in Brazil,Estonia,India,Morocco,and Sri Lanka[J].Sex Transm Infect,2003,79(4):286-290.

6 Neirukh T,Qaisi A,Saleh N,et al.Seroprevalence of Cytomegalovirus among pregnant women and hospitalized children in Palestine[J].BMC Infect Dis,2013,13:528.

7 Sheng Yu Z,Tang LF,Zou CC,et al.Cytomegalovirus-associated idiopathic thrombocytopenic purpura in Chinese children[J].Scand J Infect Dis,2008,40(11/12):922-927.

8 付愛華.孕前及孕早期TORCH感染檢測(cè)臨床分析[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2009,23(4):307-308.

9 Tamer GS,Dundar D,Caliskan E.Seroprevalence of Toxoplasma gondii,rubella and cytomegalovirus among pregnant women in western region of Turkey[J].Clin Invest Med,2009,32(1):E43-47.

10 楊樹法,李洋遠(yuǎn),曾甲子，等.孕前以及妊娠婦女TORCH感染狀況分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8(4):385-386.

11 Hao YF.Difference of Toxoplasma gondii infection status between urban and rural childbearing age women visiting to hospitals in southwest region of Shandong Province[J]. Zhongguo Xue Xi Chong Bing Fang Zhi Za Zhi,2013,25(1):113-114.

12 Eveline PJ,Ann CT MV,Frans JW,et al.How to use.neonatal TORCH testing.[J].Arch Dis Child Educ Pract Ed,2013,98(3):93-98.