淺談臨床PCR實驗室的建立和管理

楊永蘭 林 云

云南省中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科，云南 昆明 650021

淺談臨床PCR實驗室的建立和管理

楊永蘭 林 云

云南省中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科，云南 昆明 650021

目的為了PCR實驗室順利建立和開展工作，少走彎路，確保PCR實驗結果的準確可靠，得到簡便有序的工作程序，總結出一些實驗室建立和管理的經(jīng)驗，以便提供參考。

臨床PCR實驗；管理

聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）是由美國Kary Mullis于1983年發(fā)明的［1］。它是一種體外核酸擴增技術，該技術主要通過高溫變性，低溫退火以及中溫延生等過程把樣本中靶DNA在體外擴增數(shù)百萬倍，從而獲得極高的檢測敏感性。隨著PCR技術不斷發(fā)展完善，它在醫(yī)學中的應用越來越廣泛，越來越受重視，越來越多的醫(yī)療機構陸續(xù)建立起PCR臨床實驗室，即以臨床檢驗為目的的基因擴增實驗室，并陸續(xù)開展關于PCR檢驗的新業(yè)務。筆者所在醫(yī)院PCR相關業(yè)務也因需在近幾年得到開展，筆者從實驗室的建立到現(xiàn)在日常運行，一直參與其中，對于臨床PCR實驗室的管理和運行積累了一些經(jīng)驗和看法，現(xiàn)就這些經(jīng)驗總結如下，和廣大同行一起淺談一下臨床PCR實驗室的管理。

1 PCR實驗室的建立

一個正規(guī)的PCR實驗室要求是很嚴格的，不管是從實驗室的環(huán)境要求到儀器設備和試劑耗材，還是從人員素質(zhì)要求再到質(zhì)量控制管理，每一個環(huán)節(jié)都是很重要的，國家也對臨床PCR實驗室的建立和運行也有著專門的要求，因此要順利開展起實驗室我們必須要有的放矢，理清思路，循序漸進的，有條不紊的一步一步來。

1.1 PCR實驗室申辦前準備

首先了解實驗室必需具備哪些條件，然后針對每一個條件進行完善，最終完全滿足這些條件的要求。

1.1.1 給出標準的實驗室設計方案 設計上，建立單流向、一體化的臨床定量PCR實驗室是安全準確進行基因擴增檢驗和保障生物安全的重要措施［2］。具體的是合理分區(qū)問題（通常分為試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)三個區(qū)）以及標準風向等環(huán)境條件。

1.1.2 配備專業(yè)技術人員 挑選業(yè)務水平較好的有資質(zhì)的人員［3］，均經(jīng)過衛(wèi)生部臨檢中心或區(qū)臨檢中心理論和操作培訓并通過考試取得合格證［4］。

1.1.3 儀器設備以及試劑材料的準備 根據(jù)開展的項目，調(diào)研已經(jīng)開展良好的實驗室，并認真對比市場各類產(chǎn)品，嚴格的選取所需設備和試劑。

1.1.4 標準操作規(guī)程的制定以及質(zhì)量管理文件等的編寫。

根據(jù)自身實驗室開展的具體項目要求，結合自身使用的設備試劑進行編寫。

1.2 PCR實驗室申辦程序

進行實驗室申辦程序具體如下：首先填寫調(diào)查表，由省臨檢中心審核；然后正式填寫申請表，上報衛(wèi)生部臨檢中心；評審由衛(wèi)生部、省專家參加，并報省衛(wèi)生廳備案；最后合格單位名單由衛(wèi)生行政部門在媒體公示［3］。

1.3 持續(xù)性改進

針對評審專家指出的不足之處及合理性建議，進行持續(xù)性的改進。

2 PCR實驗室日常工作的管理

污染問題是PCR實驗室最常遇見的也是最重要的問題，它與我們檢驗結果的準確性密切相關。而污染可以出現(xiàn)在實驗室的任何一個環(huán)節(jié)，因此日常工作的每一個環(huán)節(jié)都很重要。

2.1 儀器的管理

主要的儀器是擴增儀和離心機，每天日常工作我們都要對其擦拭清潔，仔細認真檢查儀器工作狀態(tài)是否良好，離心力是否合格，擴增儀孔間差是否有問題。

2.2 試劑的管理

試劑管理十分重要，直接影響著檢驗結果，我們盡量選取高質(zhì)量的PCR試劑。排除試劑的選取問題，試劑的分類和儲存也很重要，試劑儲存嚴格按照儲存條件，存放位置也要科學合理善于管理，以防止試劑大規(guī)模污染為原則，以先用效期短的試劑后用效期長的為原則，以不浪費不使用過期試劑為原則，以不同批號試劑不混放為原則，以不同項目試劑區(qū)別存放為原則，以新舊試劑不混放為原則。

2.3 環(huán)境的管理

單向氣流，單向物品傳送，生物安全，從這些環(huán)境要求可以看出實驗室環(huán)境問題對于PCR實驗室的重要性，因此確保環(huán)境參數(shù)也是保證實驗準確的基礎，我們應該每天對工作臺面進行擦拭消毒，工作結束紫外燈進行照射，經(jīng)常檢查換氣扇的工作狀態(tài)是否正常，注意實驗室的通風等。

2.4 人員的管理

人員是核心，他掌控著實驗室的一切，一舉一動都可能影響著不同的環(huán)節(jié)，因此對人員就有相當高的要求，對人員我們不僅要求工作認真仔細，以防止少加漏加等低級錯誤造成結果的錯誤，更要求靈活敏銳，善于發(fā)現(xiàn)問題總結問題，實驗結果出現(xiàn)問題時能最快最好的解決，實驗中要求嚴格按照操作規(guī)程進行。

3 PCR實驗室質(zhì)量控制管理

3.1 室內(nèi)質(zhì)量控制的管理

室內(nèi)質(zhì)量控制是為了控制實驗室內(nèi)某個檢驗項目日常工作中的精密度，保證實驗室工作前后的一致性，進而保證檢驗結果的質(zhì)量，PCR實驗過程很多，包括標本采集，核酸提取等，每個環(huán)節(jié)都需要相應質(zhì)控措施，因此PCR室內(nèi)質(zhì)量控制就需要我們嚴格按照室內(nèi)質(zhì)控要求長期堅持，并認真的做好記錄，便于我們總結問題。

3.2 室間質(zhì)評的管理

室間質(zhì)評是檢驗質(zhì)量體系中重要的環(huán)節(jié)，它確保了我們實驗室檢驗結果的準確性。因此保證得到可靠的結果我們不但要堅持室內(nèi)質(zhì)量控制，更要積極參加室間質(zhì)評，對我們檢查結果做到胸中有數(shù)。對于不滿意的結果及時分析原因進行改進，從而不斷提高我們的檢驗水平。

4 結語

PCR技術的迅猛發(fā)展，PCR技術的迅猛發(fā)展，與其實用性密不可分。在不久的將來，PCR技術將有更高的突破，PCR臨床實驗室在醫(yī)療中也將發(fā)揮更大的作用。因為PCR技術的特殊性，對實驗室各環(huán)節(jié)的高要求，這就要我們必須嚴格按照PCR實驗室的要求進行每一步工作，只要確保對實驗室進行標準的建立、標準的管理，就會獲得可靠的研究結果，為臨床提供最有價值的數(shù)據(jù)。

［1］朱忠勇．實用醫(yī)學檢驗學［M］．2版．北京：人民軍醫(yī)出版社，1997：1041．

［2］江其生，金濟民，李峰生，等．單流向一體化臨床定量PCR實驗室的優(yōu)化設計與設備配置［J］．醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2006，27（9）：34-36．

［3］宋秀軍， 江其生．淺談臨床定量PCR實驗室管理［J］．醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2010，31（2）：84-87．

［4］梁志東．PCR實驗室污染的排除［J］．實用醫(yī)技雜志，2006，13（7）：1141-1142．

R446.1

A

1674-9316（2014）06-0119-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.06.068

方法筆者根據(jù)自身實驗的建立到日常的運行，歸納總結出關于PCR實驗室建立和管理的一些經(jīng)驗和看法。

結論PCR技術迅猛發(fā)展，跟他的實用性分不開，我們可以預見不久的將來，PCR技術將有更高的突破，PCR臨床實驗室在醫(yī)療中也將發(fā)揮更大的作用。我們嚴格按照實驗室的要求做好實驗室的建立和管理工作，我們必將少走彎路，少出錯誤。得到最為準確可靠的結果，從而更好的為臨床服務。