隱球菌的免疫檢驗(yàn)分析

于 洋

黑龍江省第四醫(yī)院道外分院，黑龍江 哈爾濱 150050

為隱球菌病中某些種或其變種所致的深部真菌病，其中以新生隱球菌感染所致急性、亞急性或深部真菌病為最多，可引起急性或慢性腦膜炎、腦膜腦炎、也可致肝、心、肺、骨、皮膚、眼、淋巴結(jié)感染。在免疫功能低下時(shí)，微白隱球菌、勞倫特隱球菌也可致病［1］。

1 微生物檢驗(yàn)

1.1 直接鏡檢

用病人腦脊液作墨汁負(fù)染色檢查，涂片中可見圓型、厚壁、出芽或不出芽的厚壁孢子，外圍有一圈透光的莢膜，其厚度可與菌體相等。厚莢膜有診斷意義，也是鑒別致病與不致病的依據(jù)之一。在黑色背景下可鏡檢到透亮菌體和寬厚莢膜。非致病性隱球菌無(wú)莢膜。

1.2 乳膠凝集試驗(yàn)

為一種凝集試驗(yàn)，系顆粒性抗原（細(xì)菌、真菌、紅細(xì)胞、膠乳等）或吸附于表面的抗原（或抗體）與相應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊（凝集反應(yīng)）。而乳膠凝集反應(yīng)是利用聚苯乙烯膠乳顆粒具有吸附蛋白質(zhì)—類生物高分子的性能，以它作為載體直接吸附抗體（或抗原）形成致敏膠乳顆粒，與相應(yīng)抗原（或抗體）產(chǎn)生反應(yīng)使膠乳凝集為肉眼可見的白色沉淀即為乳膠凝集反應(yīng)。待檢標(biāo)本有腦脊液、血清、尿或皮膚組織浸出液，先56℃ 30 min滅活其中可能存在的其它病原（包括HIV），標(biāo)本如混濁者先取120 μl離心沉淀，再加入 pronase 20 μl，以消化非特異蛋白以增加標(biāo)本的敏感性，再加入酶中止液，如為尿液，應(yīng)以緩沖液稀釋一倍。取40 μl待檢液滴加于特制的乳膠板第一孔內(nèi)（也可以潔凈載玻片）；第二孔內(nèi)加入兔抗正常球蛋白抗體（LN）致敏乳膠液40 μl（陰性對(duì)照）；第三孔內(nèi)加入抗隱球菌抗原乳膠液40 μd；于上述各孔內(nèi)各加抗隱球菌抗體致敏乳膠液10μl；充分混合各孔內(nèi)的液體（以小玻棒）并置于160 rpm振蕩器10 min或前后緩緩擺動(dòng)玻板，判定結(jié)果。

1.3 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（EIA）

為標(biāo)記免疫測(cè)定方法之一，系將抗原、抗體等成分以各類標(biāo)記物標(biāo)記之，使抗原抗體反應(yīng)更為敏感而成為肉眼可檢測(cè)的方法。例如以酶標(biāo)記后，定量測(cè)定標(biāo)記于抗原或抗體上的酶活性以間接測(cè)定抗原抗體的存在及其相應(yīng)含量，由于酶反應(yīng)可沿催化反應(yīng)而放大，抗原及抗體的酶標(biāo)記物甚穩(wěn)定，致本方法具高度敏感及特異。具體測(cè)定方法有間接法、雙抗體夾心法及標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)法，雙擾體夾心法尚可用以測(cè)抗原。以酶聯(lián)免疫法測(cè)定隱球菌莢膜多糖抗原系列系用抗體具有結(jié)合固相載體（聚氯乙烯塑料板）表面而不影響其免疫活性的特點(diǎn)，將已知抗體吸附于聚氯乙烯板孔內(nèi)，加入待檢的相應(yīng)抗原的標(biāo)本與之結(jié)合后，再加入標(biāo)以酶的相應(yīng)抗體，如能結(jié)合，最后加入適當(dāng)基質(zhì)使酶分解，從酶分解后出現(xiàn)的顏色反應(yīng)可計(jì)算出待檢標(biāo)本的抗原含量［2］。此雙抗體中，第一抗體針對(duì)標(biāo)本中的抗原，第二個(gè)標(biāo)有酶的抗體是針對(duì)復(fù)合物的抗體（這些可購(gòu)自生物制品所或按上法制備）。

1.4 熒光免疫測(cè)定法（FA）

以已知特異抗體來(lái)測(cè)定抗原。本法多用于免疫病理中，即測(cè)定福爾馬林固定的組織切片或新鮮冰凍切片中測(cè)定新生隱球菌及其多糖產(chǎn)物等抗原，本方法如以念珠菌的某些種（如克柔氏念珠菌）抗體吸收后，可提高其特異性。

2 隱球菌病常見疾病

隱球菌病是新型隱球菌感染所致的全身感染性疾病，中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌感染臨床最常見，其中腦膜炎型以腦膜刺激癥狀為主要臨床表現(xiàn)；腦膜腦炎型，除腦膜病變外，還有腦實(shí)質(zhì)的損害，可出現(xiàn)相應(yīng)部位的臨床癥狀和體征；肉芽腫型，可因顱內(nèi)腫塊的壓迫造成相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征。肺隱球菌病，患者可表現(xiàn)為低熱、胸痛、咳嗽和乏力等癥狀。

3 臨床意義

當(dāng)機(jī)體免疫力降低時(shí)，新生隱球菌經(jīng)呼吸道吸入而感染，引起肺部輕度炎癥，并可播散至全身其他部位，包括皮膚、骨、心臟等組織，最易侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起隱球菌性腦膜炎。臨床表現(xiàn)類似結(jié)核性腦膜炎，預(yù)后不良。由于臨床上抗生素、激素和免疫抑制劑的廣泛使用.近年來(lái)新生隱球菌感染的病例有增多的趨勢(shì)。

［1］ 秦啟賢，翁心華，朱利萍.臨床真菌學(xué)［M］.上海：復(fù)旦大學(xué)出版社，2001（5）：346-363.

［2］ 許金國(guó)，丁海峰.隱球菌病的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志，2005，21（4）：288-291.