蟲草功效成分檢測技術研究進展

何建麗，彭 濤*，朱愛玲，陳冬東，邵 雨，范春林，陳 穎，李 存*

（1.天津農(nóng)學院動物科學與動物醫(yī)學學院，天津 300384；2.中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100123；3.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100083）

蟲草功效成分檢測技術研究進展

何建麗1,2，彭 濤2,*，朱愛玲3，陳冬東2，邵 雨2，范春林2，陳 穎2，李 存1,*

（1.天津農(nóng)學院動物科學與動物醫(yī)學學院，天津 300384；2.中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100123；3.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100083）

蟲草是一類傳統(tǒng)的滋補中藥材，具有調節(jié)免疫系統(tǒng)功能、抗腫瘤、抗疲勞等多種功效，深受東方消費者喜愛。近年來研究表明，蟲草的主要功效成分包括蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、甾醇、超氧化物歧化酶等生理活性物質，且已經(jīng)建立了一系列配套的功效成分檢測方法。本文通過對蟲草主要功效成分及其檢測技術的總結和綜述，旨在為蟲草的質量監(jiān)控和開發(fā)研究提供參考。

蟲草；功效成分；檢測技術；調節(jié)免疫系統(tǒng)；抗腫瘤；抗疲勞

蟲草是一類重要的藥用真菌，隸屬于麥角菌科、蟲草屬，在我國主要分布在四川、青海、西藏、甘肅、云南等省。到目前為止，國內(nèi)正式報道的蟲草菌共百余種[1]，其具藥用價值的蟲草類別主要包括冬蟲夏草、蛹蟲草、蠶蟲草、新疆蟲草、九州蟲草等。現(xiàn)代研究表明，蟲草中含有多種生理活性物質。迄今為止，已檢測到或分離到的活性物質主要有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、麥角甾醇和超氧化物歧化酶等。這些物質具有抗菌、抗癌、抗血小板凝結、抗輻射、改善和提高記憶力、調節(jié)機體免疫能力以及鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等顯著的保健作用[2]。

蟲草的功效作用引發(fā)了人們對其質量的關注，關于蟲草的種屬辨別、產(chǎn)地溯源、真?zhèn)舞b定，已成為目前研究的熱點，而蟲草功效成分的檢測技術是所有研究的技術基礎。目前，已經(jīng)報道的蟲草功效成分的檢測技術主要有分光光度法、薄層色譜法（thin layer chromatography，TLC）、毛細管電泳法（capillary electrophoresis，CE）、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）、氣相色譜法（gas chromatography，GC）、液相色譜-質譜聯(lián)用法（liquid chromatography-mass spectrometer，LC-MS）、氣相色譜-質譜法（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS）和離子色譜（ion chromatography，IC）等。本文旨在通過對蟲草功效成分及其檢測技術研究進展的綜述，為蟲草質量監(jiān)控和開發(fā)研究提供參考。

1 蟲草素檢測技術

蟲草素，即3’-脫氧腺嘌呤核苷，屬于一種核苷類抗生素。蟲草素具有抗癌、抗菌、消炎、抗病毒，調節(jié)人體內(nèi)分泌和增強人體免疫功能，具有良好的臨床應用前景[2-3]。目前，蟲草中蟲草素的檢測技術主要包括HPLC[3-15]、LC-MS[16-20]、分光光度法[20,24-25]、CE[21-24]和TLC[26-29]等。

1.1 HPLC

HPLC方法靈敏度高且受樣品基質影響小，已用人工培養(yǎng)蛹蟲草[3-13]和冬蟲夏草[14-15]中蟲草素含量的測定。主要采用反相HPLC法，以十八烷基鍵合硅膠（C18）為固定相，甲醇-水、甲醇-磷酸鹽緩沖液或乙腈-水為流動相，常用的檢測器有紫外檢測器（ultraviolet detector，UVD）和二極管陣列檢測器（diode array detector，DAD/ photo-diode array，PDA）。劉小芳等[3]建立了反相HPLC-UVD測定蛹蟲草中蟲草素的方法。用超純水超聲提取蟲草素，以檸檬酸、醋酸、三乙胺的混合溶液-乙腈（98∶2，V/V）為流動相，在Capcellpak C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱上分離，UVD于260 nm波長處檢測。蟲草素檢測限（limit of detection，LOD）為0.2 μg/mL，回收率為92.03%～97.35%，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為0.104%。各類蟲草中蟲草素的HPLC檢測方法見表1。

1.2 LC-MS

LC-MS選擇性好、定性能力強，已用于冬蟲夏草[16-19]、蠶蟲草[17]、蛹蟲草[13,18]、九州蟲草[19]中蟲草素的測定。主要采用反相HPLC，以C18為固定相，甲醇-水、甲醇-水-甲酸或乙腈-水為流動相，用電噴霧（elaectrospray ionization，ESI）三重四極桿（MS-MS）或單四極桿質譜（MS）測定。張虹等[16]建立了LC-ESI/MS測定冬蟲夏草中蟲草素的方法。用純水超聲提取蟲草素，以甲醇-10 mmol/L醋酸氨水溶液為流動相，在Xterra C18（2.1 mm×150 mm，3.5 μm）色譜柱上分離，ESI電離，選擇離子監(jiān)測（selected-ion monitoring，SIM）模式測定。蟲草素LOD為65.0 ng/mL，回收率為90%～110%。各類蟲草中蟲草素的LC-MS檢測方法見表2。

1.3 CE

CE操作模式多、開發(fā)分析方法容易，與傳統(tǒng)分離方法相比具有高效、快速和用量少等特點，已用于亞香棒蟲草[20-21]、冬蟲夏草[21-23]、蛹蟲草[22]和九州蟲草[23]中蟲草素含量的測定。主要以硼砂、硼酸或硼砂-氫氧化鈉為緩沖液，在石英毛細管上分離，采用DAD/PDA或UVD測定。劉玉軍等[22]建立了毛細管區(qū)帶電泳法測定冬蟲夏草及人工蛹蟲草子實體中蟲草素的方法。用水超聲提取蟲草素，以0.05 mol/L硼砂-硼酸（8∶2，V/V）為緩沖液，在未涂層熔硅彈性石英毛細管（75 μm×60.5 cm，有效長度50 cm）上分離，PDA于258 nm處測定，蟲草素質量濃度在1.0～205.5 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，相關系數(shù)（r）為0.999 5～0.999 9，回收率為95.3%～106.5%。

1.4 分光光度法

分光光度法測定速度快，操作簡便，是最早用于測定蟲草中蟲草素的檢測方法，已用于測定蛹蟲草[19,23-24]中蟲草素。孫軍德等[20]建立了測定蛹蟲草中蟲草素的方法。蟲草素對照品用超純水溶解，稀釋定容制成母溶液后將母液稀釋一定倍數(shù)，紫外分光光度計于200～400 nm波長測定得到吸光度Y，以吸光度Y對蟲草素質量濃度（X，mg/mL）做標準曲線。用乙醇提取蟲草素后，分光光度計于260 nm波長處測定。蟲草素質量在0.005～0.04 mg/mL范圍內(nèi)線性良好，回收率為100.1%，RSD為2.3%。

表1 各類蟲草中蟲草素的HPLC檢測方法Table 1 H Cordyycceeppss

表2 各類蟲草中蟲草素的LC-MS檢測方法Table 2 LC Cordyycceeppss

1.5 TLC

TLC法具有展開時間短、顯色方便等特點，目前已有測定蛹蟲草[25-28]、蠶蛹蟲草[27]和冬蟲夏草[27-28]中蟲草素的報道。翁梁等[28]建立了TLC法檢測冬蟲夏草和蛹蟲草中蟲草素的方法。用無水乙醇提取蟲草素，以氯仿-醋酸乙酯-異丙醇-水-濃氨水（8.0∶2.0∶6.0∶0.3∶0.2，V/V）作為展開劑，在20 cm×10 cm GF254硅膠預制板上分離，TLC-2400薄層色譜掃描儀于λ=254 nm處掃描積分，蟲草素質量在0.111～0.666 μg范圍內(nèi)線性良好，LOD為50 ng，回收率為99.10%～106.62%。

2 蟲草酸檢測技術

蟲草酸，即D-甘露醇，具有利尿脫水，提高血漿滲透壓，鎮(zhèn)喘祛痰，抗自由基等藥理作用。目前蟲草酸的檢測技術主要包括HPLC[29-32]、分光光度法[34-40]、TLC[41]和GC-MS[42]等。

2.1 HPLC法

HPLC可以對蟲草中所含的蟲草酸進行準確的定量分析，目前已用于冬蟲夏草[29-31]和蛹蟲草[32]中蟲草酸的分離測定。主要采用乙腈-水、乙二胺四乙酸和四乙基碘化銨溶液等為流動相，C18或離子交換柱分離，應用示差折光檢測器（refractive index detector，RID）或蒸發(fā)光散射（evaporative light scattering detector，ELSD）測定。顧振宇等[31]建立了HPLC測定冬蟲夏草中蟲草酸含量的方法。用甲醇和水超聲提取蟲草酸，對比提取效率（水提效果優(yōu)于醇提），以乙腈-水（80∶20，V/V）為流動相，在C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱上分離，RID于260.4 nm處檢測。蟲草酸LOD為1.5 μg/mL，回收率為 90%～101%，RSD≤7.2%。各類蟲草中蟲草酸的HPLC檢測方法見表3。

2.2 分光光度法

分光光度法的應用廣泛，可以快速、準確地測定蛹蟲草[33]、巴西蟲草菌[34]、廣東蟲草[35]、蒙山九州蟲草[36]和冬蟲夏草[36-40]中蟲草酸的含量。程秀芳等[40]采取紫外分光光度法測定人工冬蟲夏草（菌絲體）中蟲草酸。用水回流提取蟲草酸后，加高碘酸鈉反應生成黃色的3,5-二乙酰-1,4-脫氫二甲基吡啶，UV-2000于412 nm處測定。蟲草酸質量濃度在10～50 mg/L范圍內(nèi)線性良好，r值為0.999 7，回收率為99.0%，測得蟲草酸的相對含量是3.60%。各類蟲草中蟲草酸的分光光度檢測方法見表4。

2.3 TLC

TLC已用于冬蟲夏草[41]中蟲草酸的測定。汪寶琪等[41]采用TLC檢測西藏產(chǎn)冬蟲夏草中蟲草酸的含量。用95%乙醇回流提取蟲草酸后，用二氧六環(huán)-乙酸異戊醋-異丙醇-水（5∶15∶5∶2，V/V）溶液與異丙醇-乙酸乙醋-水（54∶7∶8，V/V）溶液及冰醋酸為展開劑，在硅膠G薄板上分離，高碘酸鉀-聯(lián)苯胺顯色后，在λS=295 nm，λR=370 nm，狹縫為0.4 mm×0.4 mm條件下進行雙波長反射法鋸齒形掃描，蟲草酸質量在1～9 μg范圍內(nèi)線性良好，r值為0.998 6，回收率為98.0%～101.6%，RSD為0.6%，含量為8.4 mg/g。

表3 各類蟲草中的蟲草酸HPLC檢測方法Table 3 HPLC m Cordyycceeppss

表4 各類蟲草中的蟲草酸分光光度檢測方法Table 4 Spectrophotometric m Cordyycceeppss

2.4 GC-MS

GC-MS效能高且應用范圍廣泛，但用于蟲草酸分析的報道很少，目前僅用于蛹蟲草[42]中蟲草酸的測定。王波等[42]采取GC-MS測定蛹蟲草中蟲草酸的含量。蛹蟲草粉碎后加無水吡啶、醋酐后加熱離心，吸取上清液進樣。在HP-5MS 5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷毛細管柱上分離，氮氣為載氣，四極桿質譜電子電離源檢測。蟲草酸LOD為0.173 μg/mL，回收率為101.45%，RSD為2.62%。

3 蟲草多糖檢測技術

蟲草多糖主要是由腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、海藻糖等組成的多聚糖。蟲草多糖具有抗氧化，增強機體免疫能力，抗腫瘤和防止血糖過低[43]等作用。目前蟲草中蟲草多糖的測定方法主要有分光光度法[44-49]、HPLC[50-51]、GC-MS[52]和IC[54]。

3.1 分光光度法

分光光度法操作簡單，且無需多糖純品和高級儀器，因而被廣泛采用。目前已見苯酚-硫酸法、硫酸-蒽酮法用于蟲草多糖含量測定的報道，但該方法測定結果的靈敏度有限。

3.1.1 苯酚-硫酸法

多糖在硫酸的作用下先水解成單糖后迅速脫水與苯酚生成橙黃色化合物，再以分光光度法測定。苯酚-硫酸法對多糖純度要求不高，已用于測定冬蟲夏草[44]、廣東蟲草[45]和蛹蟲草子座[46]中蟲草多糖含量。鄭必勝等[45]采用苯酚-硫酸法測定廣東蟲草菌絲體中總糖的含量。石油醚、無水乙醇回流脫脂后超聲波水提蟲草多糖，采用Sevag試劑（氯仿-正丁醇（5∶1，V/V））去除蛋白，UV-2102在488 nm處測定。蟲草多糖質量濃度在8.12～73.08 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，r值為0.999 5，回收率為95%～105%，RSD為1.39%，含量為10.52%。

3.1.2 硫酸-蒽酮法

糖類在較高溫度下與濃硫酸作用脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后，與蒽酮脫水縮合，形成藍綠色的衍生物。該物質在620 nm處有最大吸收且其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。該方法可測定的糖類范圍廣泛，已用于測定蛹蟲草[33-47]和亞香棒蟲草[48]中蟲草多糖含量。白云娥等[48]采用硫酸-蒽酮法測定青島產(chǎn)冬蟲夏草與山西產(chǎn)亞香棒蟲草中多糖的含量。用乙醚索氏提取多糖后，UV-260于623～652 nm范圍內(nèi)測定。蟲草多糖r值為0.999 8，冬蟲夏草多糖回收率為99.2%，RSD為2.3%，含量為3.5%；亞香棒蟲草多糖回收率為101.3%，RSD為1.7%，含量為0.7%。3.2 HPLC法

HPLC法測定蟲草多糖需要多糖純品，要求較高，已用于測定蠶蛹蟲草[49]、天然和人工冬蟲夏草[50]中蟲草多糖的含量。以水-鹽類緩沖液為流動相，選用糖柱來分離蟲草多糖，RID進行檢測。李紹平等[50]建立了HPLC方法分析天然和人工冬蟲夏草的多糖組分。用石油醚提取后，以含0.1 mol/L硫酸鈉的10 mmol/L磷酸鹽緩沖液為流動相，在TSK-Gel G 3000SWxl分析柱（7.8 mm×300 mm，5 μm）上分離，RID測定。結果發(fā)現(xiàn)，天然蟲草多糖各組分構成比相似，均以大分子質量（＞115×105）組分為主（＞50%）；人工蟲草多糖各組分構成則差異明顯，其中華東產(chǎn)人工蟲草多糖與天然蟲草多糖構成最為相似。

3.3 GC-MS

GC-MS可用于測定天然冬蟲夏草和人工蛹蟲草[51]中多糖。GC-MS測定多糖具有選擇性好、分辨率強，分析速度快等優(yōu)點[52]。Guan Jia等[52]采用逐步加壓液體萃取提取和GC-MS測定天然和人工蟲草的13 個樣品中10 種單糖即鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖和山梨糖。酸水解樣品后進行衍生化，以肌醇六乙酸酯為內(nèi)標，進行定性和定量分析。結果表明，天然冬蟲夏草含有超過7.99%的甘露醇和少量的葡萄糖，多糖是由甘露糖，葡萄糖和半乳糖以1.00∶16.61～3.82∶1.60～1.28的物質的量比例組成。人工培養(yǎng)蛹蟲草甘露醇均小于5.83%，且只有少數(shù)樣品中檢測到葡萄糖，多糖主要由甘露糖，葡萄糖和半乳糖以1.00∶3.01～1.09∶3.30～1.05和1.00∶2.86～1.28∶1.07～0.78的物質的量比例組成。鑒別天然和人工蟲草可以采用對比其碳水化合物含量的方法。

3.4 脈沖安培離子色譜法

脈沖安培離子色譜法是近年發(fā)展起來的儀器分析方法，使用該方法，樣品不需要衍生便可直接分離測定單糖，且具有極高的靈敏度[54]，已用于測定蛹蟲草中海藻糖含量。周帥等[53]建立了高效陰離子色譜-脈沖安培檢測法分析食用菌中海藻糖、甘露醇和阿糖醇。樣品用蒸餾水沸水水浴提取后，以480 mmol/L NaOH為流動相，在CarboPac MAl陰離子交換柱（4 mm ×250 mm）上分離，電化學檢測器檢測。所測食用菌中蛹蟲草海藻糖含量較高，為12.94%；冬蟲夏草中甘露醇含量較高，為7.84%。

4 麥角甾醇檢測技術

麥角甾醇有增強人體抗病和預防感冒之功效，經(jīng)常食用可預防、治療血鈣代謝障礙而導致的傴僂病，還可防止機體各種黏膜炎及皮膚炎。麥角甾醇是真菌的特征醇，通常作為質量控制指標之一。目前蟲草中麥角甾醇的測定方法主要有HPLC[14,55-57]和LC-MS[58]。

表5 各類蟲草中的麥角甾醇的HPLC檢測方法Table 5 H Cordyycceeppss

4.1 HPLC

HPLC方法具有良好的重現(xiàn)性和較高的精密度，已用于測定冬蟲夏草[14,55-56]和人工蟲草[55,57]中麥角甾醇的含量。蟲草經(jīng)甲醇或乙醇提取后，在C18色譜柱上分離，采用DAD[55-56]或UVD[14,57]測定。陳婷等[14]用乙醇加熱回流提取后，以甲醇-水為流動相，在Diamosil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱上分離，UVD于260 nm處檢測。麥角甾醇質量在0.084 3～2.107 5 μg范圍內(nèi)線性良好，r為0.999 6，回收率為99.55%，RSD為2.02%。各類蟲草中麥角甾醇的HPLC檢測方法見表5。

4.2 LC-MS

LC-MS分析結果精確，但應用LC-MS測定蟲草中麥角甾醇的報道較少。陳林琤等[58]建立了LC-MS分析冬蟲夏草子實體中麥角固醇含量的方法。用超純水提取麥角甾醇，以甲醇-水（9∶1，V/V）為流動相，Thermo C18Gold（4.6 mm×250 mm，5 mm）色譜柱分離，ESI電離，離子阱質譜儀檢測。結果發(fā)現(xiàn)，冬蟲夏草子實體子座的麥角固醇比菌核高約3 倍，含量約為0.92 g/L，且子座含2 種麥角固醇衍生物，但冬蟲夏草子實體菌核和蛹蟲草中均不含有。

5 脂肪酸檢測技術

蟲草中的脂肪酸主要包括5 種飽和脂肪酸和3 種不飽和脂肪酸，飽和脂肪酸以棕櫚酸、硬脂酸為主，占脂肪酸總質量15.22%；不飽和脂肪酸以油酸、亞油酸、亞麻酸為主，占脂肪酸總質量84.78%[59]。不飽和脂肪酸不僅能預防心血管疾病，還能減少患膽結石的危險。關于脂肪酸已有很多成熟的檢測方法，主要是前處理方法的不同，目前應用于蟲草中脂肪酸的含量的檢測方法主要有GC[60]和GC-MS[61]。

5.1 GC

GC分離效率高，已應用于冬蟲夏草[60]中脂肪酸的測定。先通過酸將蟲草中脂肪酸甲酯化，然后進GC分析。吳迪等[60]采用GC分析冬蟲夏草中的脂肪酸。樣品用10%硫酸-甲醇衍生化，二氯甲烷萃取，以高純氦氣為流動相，在HP-INNOWAX柱型彈性石英毛細管色譜柱（30 m×250 μm，0.25 μm）上分離，火焰離子化檢測器檢測。脂肪酸的回收率為95.83%～99.38%，RSD小于5%。

5.2 GC-MS

相較于GC，采用GC-MS測定蟲草中的脂肪酸可以更好的對脂肪酸分子結構進行確證，結果更為精確。崔紅燕等[61]建立了廣東蟲草脂肪酸的GC-MS分析方法。用氯仿-甲醇（1∶1，V/V）混合溶劑提取脂肪酸，以高純氦氣為流動相，在DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）上分離，質譜于19～500 amu質量范圍內(nèi)掃描測定。結果發(fā)現(xiàn)，亞油酸在子廣東蟲草的實體和液體發(fā)酵菌液中含量最高，分別為61.83%和65.96%，而液體發(fā)酵菌絲體中硬脂酸含量最高為40.47%。

6 氨基酸檢測技術

蟲草內(nèi)含有天冬氨酸、蘇氨酸、色氨酸等18 種氨基酸。天然冬蟲夏草以谷氨酸、色氨酸及酪氨酸為主要成分，野生冬蟲夏草和液體發(fā)酵培養(yǎng)的冬蟲夏草的菌絲體中的組氨酸含量較高，約占氨基酸總量含量的18%[62]。氨基酸能提高機體的免疫能力，加強營養(yǎng)的吸收能力。目前蟲草中氨基酸含量的檢測方法主要有氨基酸分析儀[63-65]和HPLC[66-67]。

6.1 氨基酸分析儀

氨基酸分析儀的靈敏度低于HPLC，已用于蛹蟲草菌絲體[63-64]、冬蟲夏草[63-65]和新疆蟲草[64]中氨基酸含量的測定。郭亞東[65]等建立了冬蟲夏草中氨基酸的含量測定。樣品粉末加HCl水解后蒸干，加NaOH和HCl中和后用0.02 mol/L HCl稀釋到一定濃度上機分析，茚三酮柱后衍生法測定，檢測波長為440 nm和570 nm。測定結果顯示，天然蟲草和人工培養(yǎng)菌絲體在所測16 種氨基酸中，其總含量前者為27.358%，后者為25.203%，天然蟲草的含量較高（色氨酸和胱氨酸在水解過程中被破壞，未能測定）。

6.2 HPLC

HPLC靈敏度高，檢測限低，已用于測定蛹蟲草子實體[66]和冬蟲夏草[67]的氨基酸含量。選用反相C18色譜柱，以乙腈-水、乙腈-甲醇-水為流動相，采用熒光檢測器（fluorescence detector，F(xiàn)LD）或RID和DAD進行檢測。王麗等[67]采用HPLC同時測定了不同產(chǎn)地冬蟲夏草中氨基酸的含量。采用柱前鄰苯二甲醛和氯甲酸芴甲酯聯(lián)合在線自動衍生，以40 mmol/L NaH2PO4?H2O（pH 7.8）和乙腈-甲醇-水（4.5∶4.5∶1，V/V）為流動相進行梯度洗脫，反相Zorbax Eclipse AAA C18柱（4.6 mm×75 mm，3.5 μm）上分離，DAD和FLD于390 nm和340 nm處測定。使用FLD檢測時雜質干擾小，基線平穩(wěn)，檢測靈敏度比DAD高10 倍以上，但是胱氨酸無響應而賴氨酸響應值小，需要使用DAD來補充。18 種氨基酸質量在4.5～1 000 μmol/L范圍內(nèi)線性良好，r值為0.991 4～0.999 7，回收率為95.10%～103.29%，RSD為2.03%～5.12%（n = 5）。

7 超氧化物歧化酶檢測技術

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一種非常重要的抗氧化素，是預防各種疾病及抗衰老防御的關鍵酶，具有幫助清除新陳代謝中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基的能力，在維護機體活性氧代謝的平衡中起重要作用。SOD含量可通過測定SOD的酶活力來體現(xiàn)，測定SOD酶活性的方法包括比色法和化學發(fā)光法，都是基于同一原理——根據(jù)SOD抑制體系中O2－·的額外電子還原電子受體的作用，從而抑制電子受體接受電子而產(chǎn)生發(fā)光或吸收光譜的變化，相較于比色法化學發(fā)光測定結果更為精確[68]，但目前主要采用比色法來測定蟲草中SOD酶活力。

鄰苯三酚自氧化法是比色法的一種，該方法所用的試劑便宜，且用量小，重復性好。目前已有測定蛹蟲草菌絲體、子座[69-70]中SOD含量的報道。王奇等[70]采用改良的鄰苯三酚自氧化法，比較了野生蛹蟲草和培植蛹蟲草菌絲體、子座之間的SOD酶活力。用水提取SOD后，分別用硫酸銨和丙酮進行分離，加0.1 mol/L Tris-HCl緩沖溶液和3 ?mol/L鄰苯三酚溶液，分光光度計于325 nm處測定。結果發(fā)現(xiàn)，野生蛹蟲草的SOD酶活力高于培植蛹蟲草，而蟲草菌絲體的SOD酶活力（64.3 U/mL）顯著高于子座的SOD酶活力（47.1 U/mL）。

8 結 語

目前，蟲草中蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、麥角甾醇和超氧化物歧化酶等主要功效成分已經(jīng)建立起較為成熟的檢測方法。早期的技術主要以分光光度法、TLC等為主，由于缺乏克服雜質干擾的能力，不能準確定性和定量；隨著現(xiàn)代儀器分析技術的發(fā)展，GC、HPLC、CE等色譜技術應用增多，HPLC、GC已成為蟲草功效成分分析中使用最普遍的技術；而近年來，色質聯(lián)用技術的成熟，使LC-MS和GC-MS成為蟲草功效成分的主要確證和鑒定技術。對于蟲草中蟲草素、蟲草酸和麥角甾醇等蟲草特征性功效成分，CE、HPLC、LC-MS、GC-MS等方法可用于檢驗機構作為標準檢測方法，而分光光度法和TLC等方法由于其快速、簡便可作為企業(yè)內(nèi)部的質量監(jiān)督方法?，F(xiàn)在，蟲草功效成分的檢測技術已經(jīng)朝向快速化和精確定量化的方向發(fā)展，逐步趨于完善和準確，并將為蟲草的質量監(jiān)控和開發(fā)研究提供堅實的技術支撐。

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Progress in Detection Techniques for Functional Components in Cordyceps

HE Jian-li1,2, PENG Tao2,*, ZHU Ai-ling3, CHEN Dong-dong2, SHAO Yu2, FAN Chun-lin2, CHEN Ying2, LI Cun1,*
(1. College of Animal Science and Animal Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2. Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100123, China; 3. College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100083, China)

Cordyceps is a famous traditional Chinese herbal tonic, which has immune-regulating, anti-tumor, and fatigueresisting functions. The physiological active materials including cordycepin, cordyceptic acid, cordyceptic polysaccharides, sterols, and superoxide dismutase enzymes have been confirmed as the major functional components in Cordyceps. Recently, a series of methods for the determination of these components in different species of Cordyceps have been reported. This paper reviews some recent techniques for the detection of the major functional components of Cordyceps, aiming to provide valuable references for the quality control of Cordyceps.

Cordyceps; functional components; detection techniques; immune-regulating; anti-tumor; fatigue-resisting

R282

A

1002-6630（2014）13-0303-07

10.7506/spkx1002-6630-201413059

2013-10-31

“十二五”國家科技支撐計劃項目 （2012BAD33B02；2012BAK08B01）

何建麗（1989—），女，碩士研究生，研究方向為新獸藥。E-mail：hejianli0330@163.com

*通信作者：彭濤（1976—），男，副研究員，博士，研究方向為食品安全。E-mail：caiq_pengtao@126.com

李存（1971—），男，教授，博士，研究方向為獸醫(yī)藥理學與動物毒理學。E-mail：teacherlicun@163.com