Hp感染與胃癌患者陰性淋巴結中CK19和CK20表達的相關性研究

魏小果，高 翔，康國蘭，詹 麗

（甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

幽門螺桿菌（Hp）是胃癌啟動因子，促進胃癌發(fā)病及轉移的發(fā)生，為胃癌的預后影響因素，區(qū)域淋巴結（即陰性淋巴結）轉移直接影響患者長期生存[1-2]。目前對陰性淋巴結微小轉移灶已有研究，但尚無對Hp感染與陰性淋巴結微轉移的相關性報道。本研究采用前瞻性對照研究，分析術前Hp感染與胃癌患者陰性淋巴結CK19、CK20表達的相關性，進一步明確Hp感染與胃癌陰性淋巴結微轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 基本資料

收集2011年10月—2012年12月經(jīng)我院胃鏡及病理確診的胃癌患者64例，其中男性35例，女性29例；年齡34～76歲，平均年齡56.7歲；術前未經(jīng)放、化療，術后經(jīng)常規(guī)組織病理證實且排除遠處轉移。本研究獲得甘肅省人民醫(yī)院倫理委員會批準，同時標本采集得到了患者的知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 Hp 檢測 所有患者均于入院后次日行14C-尿素呼氣試驗（14C-UBT）檢測Hp，操作流程嚴格按說明書進行，以14C-UBT≥100dpm/mmolCO2為陽性判斷值。依照結果將患者分為Hp（+）組和Hp（-）組。

1.2.2 CK19、CK20 檢測 兩組患者術后共切除淋巴結846枚，中位數(shù)為12（6～16）枚，所有淋巴結均行常規(guī)病理檢查。將陰性淋巴結經(jīng)常規(guī)制備后連續(xù)切片（厚度3μm），分別用免疫組化法檢測CK19和CK20，操作流程嚴格按照試劑操作說明進行。標本檢測在24小時內(nèi)進行。

陽性判斷：定位于細胞胞漿內(nèi)，如細胞胞漿經(jīng)免疫組化染色后出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性著色，終止反應，顯微鏡下觀察結果。

1.3 結果判斷標準

胃癌淋巴結微轉移表現(xiàn)為單個散在和（或）數(shù)個聚集成小團狀的癌細胞位于淋巴竇內(nèi)，以邊緣竇為主[3]。個別淋巴結巨噬細胞和漿細胞等內(nèi)可見AE1交叉反應，結合細胞形態(tài)特點、部位及AE1染色特征可以明確區(qū)分。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS17.0軟件包統(tǒng)計分析，本研究數(shù)據(jù)為計數(shù)資料，檢驗水準α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者分組情況

胃癌患者Hp感染率為54.7%，其中Hp（+）組胃癌患者35例，共檢出陰性淋巴結348枚；Hp（-）組胃癌患者29例，共檢出陰性淋巴結331枚。兩組比較經(jīng)χ2檢驗，χ2=6.084，P<0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者陰性淋巴結中CK19、CK20的表達

Hp（+）組胃癌患者陰性淋巴結CK19陽性表達率為11.8%（41/348），Hp（-）組CK19的陽性表達率為6.3%（21/331），兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.004，P=0.014）。Hp（+）組胃癌患者陰性淋巴結CK20陽性表達率為9.2%（32/348），Hp（-）組CK20的陽性表達率為4.8%（16/331），兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.912，P=0.027）。具體見表1。

表1 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者陰性淋巴結中CK19、CK20 的表達

3 討論

3.1 胃癌陰性淋巴結微轉移的發(fā)生

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，在甘肅河西走廊地區(qū)尤為高發(fā)[4]，進展期胃癌根治術術后5年存活率約為40%，直徑<2mm的陰性淋巴結癌轉移灶即微轉移是腫瘤根治術后復發(fā)和轉移的重要原因之一[1]，同時微轉移也是臨床的難點[5]。胃癌可通過黏膜下、肌間或漿膜下的淋巴管蔓延、浸潤，因而淋巴轉移發(fā)生早[6]。同時，由于淋巴靜脈通路的存在，腫瘤細胞可以很容易地由淋巴系統(tǒng)進入循環(huán)系統(tǒng)，反之亦然。所以胃癌患者行手術治療時，淋巴轉移率高達50%～70%。因而在常規(guī)病理檢查的基礎上，檢測陰性淋巴結的微轉移對于患者的預后判斷有重要意義。

3.2 CK19、CK20 表達與胃癌微轉移的檢測

CK19、CK20等所屬的細胞角蛋白家族是上皮細胞所特有的一種中間絲，特異性地表達于上皮組織和上皮來源的腫瘤，幾乎不表達于血液、淋巴組織和骨髓組織。因此，淋巴結中細胞角蛋白的表達提示存在癌細胞，即有微轉移的發(fā)生。應用CK19、CK20等同步檢測，有助于提高胃癌陰性淋巴結微轉移的檢出率，使胃癌在臨床上得以重新分期，對于判斷預后和指導治療均有一定意義。

3.3 Hp 感染影響胃癌陰性淋巴結微轉移的機制

Hp能引起長期炎癥刺激，導致胃黏膜萎縮—腸化—異型增生的系列演化，是胃癌的主要病因之一[1]，其與胃癌的不良預后相關[7]。本研究提示，CK19、CK20在Hp（+）和Hp（-）的胃癌患者陰性淋巴結中存在不同表達，其中Hp（+）胃癌患者CK表達增高，部分組織學分化較差、術后分期較高的患者CK表達更高，提示Hp感染可能促進腫瘤微轉移的發(fā)生，從而使微轉移的指標高表達。Hp促進微轉移的發(fā)生是通過促進胃癌細胞之間的分離、增強癌細胞與基質成分的黏附作用、加快細胞外基質的降解及癌細胞的移出等來實現(xiàn)的。分子機制的研究指出，Hp感染直接刺激胃癌細胞釋放巨噬細胞移動抑制因子（MIF），而MIF可能通過上調(diào)基質降解酶（MMP）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達來促進腫瘤的浸潤和轉移[8-9]。

實際上，少量癌細胞進入淋巴結后，在淋巴結內(nèi)的轉歸也不盡相同，包括：（1）增生形成大的轉移瘤；（2）被機體免疫系統(tǒng)清除；（3）暫時進入G0期，環(huán)境適宜時再增生形成大的轉移瘤[10]。因此，即使是免疫組化證實的微轉移，預后也并非一定不良。胃癌患者早期檢測Hp，術后檢測陰性淋巴結微轉移，對改善患者預后有一定意義。研究者也意識到，由于微轉移的影響因素眾多，同時限于樣本量，Hp與陰性淋巴結微轉移的相關性仍需要在后續(xù)工作中繼續(xù)研究、證實。

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