不同濃度七氟醚對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2黏附能力以及CD133表達(dá)的影響

[摘要] 目的 觀察不同濃度七氟醚對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2黏附能力、CD133表達(dá)的影響。 方法 分為四組：對照組（Control組）、1.7%七氟醚組（Treat1組）、3.4%七氟醚組（Treat2組）和5.1%七氟醚組（Treat3組）。Treat1組、Treat2組和Treat3組人鼻咽癌CNE2細(xì)胞，經(jīng)1.7%、3.4%、5.1%七氟醚作用2 h、4 h、6 h。檢測細(xì)胞黏附率；采用qRT-PCR法檢測CD133的mRNA表達(dá)。 結(jié)果 與處理前比較，Treat1組、Treat2組和Treat3組處理2 h、4 h和6 h時細(xì)胞黏附率降低，CD133的mRNA及其蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.05）。 結(jié)論 七氟醚可降低人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的黏附能力，且呈濃度和時間依賴性，其機(jī)制可能與下調(diào)CD133的表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 麻醉藥，吸入；細(xì)胞黏附；CD133

[中圖分類號] R614 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）27-0001-02

七氟醚于1968年由Regan合成，1986年完成1期臨床試驗(yàn)，1990年首先由日本的藥監(jiān)部門批準(zhǔn)臨床使用。近年來，被許多著名麻醉學(xué)專家譽(yù)為吸入麻醉的里程碑式藥物。研究表明，七氟醚可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞和喉癌細(xì)胞的生長以及肺癌細(xì)胞的黏附[1，2]，但七氟醚對人鼻咽癌細(xì)胞株黏附能力的影響尚不明確。CD133能在多種腫瘤細(xì)胞系中被檢測到，并被證實(shí)表達(dá)CD133表型的腫瘤細(xì)胞是人類腦腫瘤、胃癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、黑色素瘤、胰腺癌等實(shí)體腫瘤中的干細(xì)胞，參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[3-5]。本研究擬評價七氟醚對人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2黏附能力、CD133表達(dá)的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2（南華大學(xué)研究所），RPMI 1640培養(yǎng)基、10%胎牛血清（Hyclone公司，美國），麻醉氣體監(jiān)測儀（Datex AS/3公司，芬蘭），AestivaR/5型麻醉機(jī)（Datex Ohmeda公司，芬蘭）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

CNE2細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基于37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

取對數(shù)生長期的人鼻咽癌CNE2細(xì)胞，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其隨機(jī)分為四組：對照組（Control組）、1.7%七氟醚組（Treat1組）、3.4%七氟醚組（Treat2組）和5.1%七氟醚組（Treat3組）。

1.4 細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)

分別處理好細(xì)胞將100 μL細(xì)胞懸液加入96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)1 h。每孔加入200 μL PBS，振搖5 min，洗2遍。棄PBS后加入MTT，于波長490 nm處，用酶標(biāo)儀測定吸光度值，并計算黏附率=[（各實(shí)驗(yàn)孔黏附細(xì)胞吸光度值/對照孔黏附細(xì)胞吸光度值-1）×100%]。

1.5 CD133 mRNA表達(dá)的測定

采用qRT-PCR法測定CD133 mRNA的表達(dá)，qRT-PCR反應(yīng)：反應(yīng)體系為20 μL，包括稀釋后的RT產(chǎn)物2 μL、2×qRT-PCR緩沖液10 μL、5 μmol/L miR-155特異性PCR引物0.4 μL、5 U/μL耐熱DNA聚合酶0.2 μL、滅菌雙蒸水7.4 μL。反應(yīng)條件：先95℃ 3 min活化Taq酶，然后95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40個循環(huán)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)比較采用重復(fù)測量設(shè)計的方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2細(xì)胞黏附率的比較

見表1，與處理前比較，Treat1組、Treat2組和Treat3組處理2 h、4 h和6 h細(xì)胞黏附率降低（P<0.05）；與處理2 h比較，Treat2組和Treat3組處理4和6 h細(xì)胞黏附率降低（P<0.05）；與處理4 h比較，Treat2組和Treat3組處理6 h細(xì)胞黏附率降低（P<0.05）；與Control組比較，Treat1組、Treat2組和Treat3組處理2 h、4 h和6 h細(xì)胞黏附率降低（P<0.05）；與Treat1組比，Treat2組和Treat3組處理2、4和6 h細(xì)胞黏附率降低（P<0.05）；與Treat2組比，Treat3組處理2 h、4 h和6 h細(xì)胞黏附率降低（P<0.05）。

2.2 四組人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2細(xì)胞CD133 mRNA表達(dá)改變

見表2，與處理前比較，Treat1組、Treat2組和Treat3組處理2 h、4 h和6 h細(xì)胞CD133的mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；與處理2 h比較，Treat2組和Treat3組處理4 h和6 h細(xì)胞CD133的mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；與處理4 h比較，Treat2組和Treat3組處理6 h細(xì)胞CD133的mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；與Control組比較，Treat1組、Treat2組和Treat3組處理2、4和6 h細(xì)胞CD133的mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；與Treat1組比，Treat2組和Treat3組處理2 h、4 h和6 h細(xì)胞CD133的mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；與Treat2組比，Treat3組處理2 h、4 h和6 h細(xì)胞CD133的mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）。

3 討論

鼻咽癌發(fā)病常見于南方數(shù)省，以廣東省為高發(fā)區(qū)，在東南亞，鼻咽癌也是一種常見的腫瘤，此外，高發(fā)區(qū)還包括了阿拉斯加的愛斯基摩人和格陵蘭土著人。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，世界上80%的鼻咽癌發(fā)生在中國，居頭面部惡性腫瘤首位。像其他許多上皮來源的惡性腫瘤一樣，它是一種多步驟、多基因參與的遺傳性腫瘤。到目前為止，研究已證實(shí)鼻咽癌在發(fā)生、發(fā)展過程中存在著許多遺傳分子的異常改變，如癌基因過表達(dá)或活性過高以及抑癌基因低表達(dá)或功能缺失[5-8]。

本研究結(jié)果表明，與對照組比較，經(jīng)不同濃度的七氟醚處理后細(xì)胞黏附率依次降低，與處理前比較，處理2 h、4 h和6 h，不同濃度七氟醚組細(xì)胞黏附率依次降低，提示七氟醚可降低人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的黏附能力，且呈濃度和時間依賴性。CD133抗原是一種分子量為117 kDa，具有5個跨膜域的糖蛋白，C末端結(jié)構(gòu)域形成2個小環(huán)結(jié)構(gòu)，N端結(jié)構(gòu)域形成2個大環(huán)結(jié)構(gòu)，編碼865個氨基酸[9]。CD133常表達(dá)于人未成熟的造血干細(xì)胞、胚胎上皮細(xì)胞、神經(jīng)前體細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞中，在成熟的血細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞里基本沒有表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)表達(dá)CD133表型的腫瘤細(xì)胞是人類腦腫瘤、胃癌、黑色素瘤、胰腺癌等實(shí)體腫瘤中的干細(xì)胞。本研究結(jié)果表明，與處理前比較，處理2 h、4 h和6 h時，不同濃度七氟醚組CD133表達(dá)依次下調(diào)；與對照組比較，經(jīng)1.7%、3.4%和5.1%的七氟醚處理后CD133表達(dá)依次下調(diào)，提示七氟醚降低人鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的黏附能力可能與其抑制CD133的表達(dá)有關(guān)。

綜上所述，七氟醚可降低人鼻咽癌CNE2的黏附能力，且呈濃度和時間依賴性，其機(jī)制可能與下調(diào)CD133的表達(dá)有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Kvolik S，Dobrosevic B，Marczi S，et al. Different apoptosis ratios and gene expressions in two human cell lines after sevoflurane anaesthesia[J].Acta Anaesthesiol Scand，2009，53（9）：1192-1199.

[2] 黃翔，楊承祥，梁樺. 不同濃度七氟醚對人肺腺癌細(xì)胞株A549黏附能力、CD24和CD44v6表達(dá)的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志，2012，63（1）：60-63.

[3] Wen L，Chen XZ，Yang K，et al. Prognostic value of cancer stem cell marker CD133 expression in gastric cancer：A systematic review[J]. PLoS One，2013，8（3）：e59154.

[4] Arndt K，Grinenko T，Mende N，et al. CD133 is a modifier of hematopoietic progenitor frequencies but is dispensable for the maintenance of mouse hematopoietic stem cells[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2013，110（14）：5582-5587.

[5] O'Brien CA，Pollett A，Gallinger S，et al. A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice[J]. Nature，2007，445（7123）：106-110.

[6] Acikalin MF，Etiz D，Gurbuz MK，et al. Prognostic significance of galectin-3 and cyclin D1 expression in undifferentiated nasopharyngeal carcinoma[J]. Med Oncol，2012，29（2）：742-749.

[7] Peng G，Wang T，Yang KY，et al. A prospective，randomized study comparing outcomes and toxicities of intensity-modulated radiotherapy vs. conventional two-dimensional radiotherapy for the treatment of nasopharyngeal carcinoma[J]. Radiother Oncol，2012，104（3）：286-293.

[8] Luo WR，Wu AB，F(xiàn)ang WY，et al. Nuclear expression of N-cadherin correlates with poor prognosis of nasopharyngeal carcinoma[J]. Histop-athology，2012，61（2）：237-246.

[9] Yin S，Li J，Hu C，et al. CD133 positive hepatocellular carcinoma cells possess high capacity for tumorigenicity[J]. Int J Cancer，2007， 120（7）：1444-1450.

（收稿日期：2013-07-17）