肺癌患者T細(xì)胞亞群和D—二聚體與臨床分期相關(guān)性分析

[摘要] 目的 研究肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、D-二聚體與臨床分期、臨床病理分級之間的關(guān)系。 方法 運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)和免疫比濁法分別測定80例肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群比例和D-二聚體含量。 結(jié)果 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期（晚期）外周血中CD4+（%）比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低（P < 0.01）、Ⅲ～Ⅳ期（晚期）CD8+（%）比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）高（P < 0.01）、CD4+/CD8+（%）比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低（P < 0.01），D-二聚體含量（μg/L）較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）高，外周血T細(xì)胞亞群比例和D-二聚體的含量與病理類型和病理分級無相關(guān)性（P > 0.05）。 結(jié)論 肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和D-二聚體含量與肺癌的臨床分期早晚相關(guān)，與肺癌的病理類型和分化級別無關(guān)，提示可作為肺癌患者分期的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] T淋巴細(xì)胞；D-二聚體；肺癌；臨床分期

[中圖分類號] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）22-0058-02

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)。而微環(huán)境內(nèi)執(zhí)行細(xì)胞免疫功能主要依賴于T淋巴細(xì)胞。正常情況下，T細(xì)胞及亞群的數(shù)目處于相對平衡狀態(tài)，維持免疫功能穩(wěn)定；若T細(xì)胞總數(shù)或者CD4+/CD8+T細(xì)胞比值發(fā)生異常時，即可視為免疫調(diào)節(jié)紊亂，宿主免疫功能低下或受抑制，易發(fā)生腫瘤或自身免疫疾病[1]。腫瘤抗原識別通過CD4+完成，肺癌患者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)減少，CD8+細(xì)胞數(shù)增多，則有利于腫瘤增長。而CD4+/CD8+比值增加，會抑制腫瘤增殖。故檢測肺癌患者外周血T細(xì)胞亞群，對于判斷腫瘤患者的免疫功能有一定價(jià)值，特別是對監(jiān)視腫瘤復(fù)發(fā)、提高療效、估計(jì)預(yù)后均有一定的臨床意義[2]。

D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化的因子交聯(lián)后再經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異降解產(chǎn)物，有報(bào)道在肺癌[3]、肝癌[4]、結(jié)直腸癌[5]等惡性腫瘤中均有較高的表達(dá)。因而近年來有關(guān)惡性腫瘤患者D-二聚體水平的變化引起了許多學(xué)者的關(guān)注，D-二聚體的水平可能與腫瘤的臨床分期有關(guān)。本文通過測定不同肺癌分期T細(xì)胞亞群的比例、D-二聚體的含量，分析兩者在肺癌臨床分期、病理類型及病理分化級別中的意義，以期為肺癌診斷和治療提供理論支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

80例肺癌患者為2011年7月～2012年7月在我院腫瘤科或胸外科住院患者，其中男43例，女37例，年齡42～85歲，中位年齡59.4歲。所有患者均為經(jīng)支氣管鏡或手術(shù)病理證實(shí)的初診肺癌患者，其中支氣管鏡活檢確診32例，手術(shù)病理48例，根據(jù)2009年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期患者24例、Ⅱ期患者21例、Ⅲ期患者25例、Ⅳ期患者10例。所有患者均為初治患者，不伴有免疫缺陷性疾病、器官移植或其他系統(tǒng)的腫瘤，近3個月未使用過免疫增強(qiáng)或抑制的藥物及其他生物治療。

1.2 主要試劑與儀器

小鼠抗人IgG-PE、IgG-FITC、CD4+-FITC、CD8+-FITC、CD4+-PE、CD8+-PE為美國CST公司生產(chǎn)，流式細(xì)胞儀為美國COULER EPICS XL，SIEMENS公司D-二聚體試劑盒，SYSMEX CA1500 全自動生化分析儀。

1.3 方法

收集治療前患者清晨空腹靜脈血2 mL，分別檢測患者治療前血漿D-二聚體水平及T淋巴細(xì)胞亞群的情況。采用SYSMEX CA1500全自動生化分析儀，D-二聚體試劑盒，應(yīng)用免疫比濁法檢測研究對象血漿D-二聚體含量。用流式細(xì)胞分析法測定T細(xì)胞亞群，方法為：用PE熒光標(biāo)記的單克隆抗體20 μL加入EDTA抗凝血100 μL發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，溶血劑2 mL破壞紅細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液洗滌，固定液固定后用COULER EPICS XL流式細(xì)胞儀檢測外周血T淋巴細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，并用SPSS 13.0軟件包對T淋巴細(xì)胞亞群和血清D-二聚體含量與肺癌臨床分期的關(guān)系進(jìn)行兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)， T淋巴細(xì)胞亞群和血清D-二聚體含量與病理分化級別的關(guān)系采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P < 0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌的分期與肺癌患者T細(xì)胞亞群分布及D-二聚體含量的關(guān)系

對肺癌臨床分期Ⅰ～Ⅱ期（早期）和Ⅲ～Ⅳ期（晚期）的樣本進(jìn)行兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)按α=0.01的標(biāo)準(zhǔn)，CD4+細(xì)胞比例（t=5.523，P=0.00047）、CD8+細(xì)胞比例（t=5.690，P=0.00032）、CD4+/CD8+比例（t=6.418，P=0.00063）及D-二聚體含量（t=6.154，P=0.00082）的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2 肺癌病理類型及病理分化級別與肺癌患者T細(xì)胞亞群分布及D-二聚體含量的關(guān)系

肺癌病理類型分為鱗癌41例，腺癌39例。CD4+細(xì)胞的比例（鱗癌：t=3.193，P=0.592，腺癌：t=4.803，P = 0.843）、CD8+細(xì)胞比例（鱗癌：t=4.492，P = 0.321，腺癌：t = 5.52，P = 0.582）、CD4+/CD8+的比例（鱗癌：t = 0.546，P = 0.605，腺癌：t=0.558，P =0.642）與病理分化級別之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D-二聚體含量（鱗癌：t = 3.28，P = 0.910，腺癌：t = 4.231，P = 0.431）與病理分化級別的差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

3 討論

在惡性腫瘤形成過程中腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生免疫抑制因子抑制淋巴細(xì)胞分化增殖，使得淋巴細(xì)胞表面CD4+抗原減少，CD4+ T細(xì)胞降低，免疫反應(yīng)誘導(dǎo)及效應(yīng)不足，特異抗腫瘤效應(yīng)下降[5]；CD8+T細(xì)胞反應(yīng)性增多，則CD8+T可直接作用于B淋巴細(xì)胞表面的同種異型受體，使與腫瘤抗原結(jié)合的受體被封閉，CD8+T細(xì)胞升高則免疫反應(yīng)低下，CD4+/CD8+降低，免疫抑制反應(yīng)的效應(yīng)高于免疫誘導(dǎo)[6]，國內(nèi)已有報(bào)道T淋巴細(xì)胞亞群與結(jié)直腸癌、宮頸癌等臨床分期的關(guān)系，本研究發(fā)現(xiàn)外周血中CD4+比例、CD8+比例、CD4+/CD8+比例的改變與臨床分期早晚有關(guān)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期（晚期）外周血中CD4+比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低、CD8+的比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）高、CD4+/CD8+比例較臨床Ⅰ～Ⅱ期（早期）低，這與董暉等[7]、劉小林等[8]的報(bào)道類似。

D-二聚體作為交聯(lián)纖維蛋白的降解產(chǎn)物，是繼發(fā)性纖溶的特異性分子標(biāo)志物之一，對惡性腫瘤的觀測有重要臨床價(jià)值。有報(bào)道稱約90%以上轉(zhuǎn)移癌和一半以上的原發(fā)癌存在凝血參數(shù)異常，研究發(fā)現(xiàn)D-二聚體含量與胃癌、乳腺癌、腸癌的TNM分期有關(guān)[9]。我們的數(shù)據(jù)顯示血清中D-二聚體與肺癌患者的TNM分期級別高低有關(guān)，臨床晚期較于早期的外周血D-二聚體含量明顯增高，提示可以利用D-二聚體含量來檢測腫瘤的存在，同時同一病理類型（鱗癌或腺癌）分化級別與D-二聚體含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同病理類型同一分化級別的腫瘤D-二聚體的含量亦無顯著性差異，說明D-二聚體的含量與肺癌的分期級別高低有關(guān)而與肺癌病理類型無關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和血清D-二聚體含量與臨床分期級別高低有關(guān)，同時T淋巴細(xì)胞亞群和血清D-二聚體含量與肺癌的病理類型和分化級別無關(guān)，提示T淋巴細(xì)胞亞群和D-二聚體可以作為臨床分期的輔助參考指標(biāo)。

[參考文獻(xiàn)]

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[7] 董暉，王朝杰. 結(jié)直腸癌患者免疫狀況與腫瘤分期的關(guān)系[J]. 國外醫(yī)學(xué)：放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊，2005，29（5）：115-117.

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（收稿日期：2013-04-02）