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    Kiss—1、β—catenin蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

    2013-12-31 00:00:00陳一峰鐘清木張白凌
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2013年22期

    [摘要] 目的 探討Kiss-1、β-catenin蛋白在甲狀腺乳頭狀癌(PTC)中的表達(dá)與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測86例PTC組織和15例正常甲狀腺組織中Kiss-1、β-catenin蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 ①正常甲狀腺組織的Kiss-1陽性表達(dá)率顯著高于PTC(χ2=14.16,P < 0.01);無伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC的Kiss-1陽性表達(dá)率顯著高于伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=15.41,P < 0.01);微小癌與非微小癌兩者的Kiss-1陽性表達(dá)率間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.47,P > 0.05)。②PTC的β-catenin異常表達(dá)率顯著高于正常甲狀腺組織(χ2=24.75,P < 0.01);微小癌和非微小癌、伴有和無伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC間的β-catenin異常表達(dá)率的差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.35和0.53,P > 0.05)。③Kiss-1陰性表達(dá)與β-catenin異常表達(dá)正相關(guān)(spearman correlation value=0.56,P < 0.01)。 結(jié)論 β-catenin的異位表達(dá)很可能始于PTC發(fā)生發(fā)展過程中的早期階段,Kiss-1表達(dá)的下調(diào)可能級聯(lián)增強(qiáng)了β-catenin的正向效應(yīng)作用,最終導(dǎo)致PTC的發(fā)生和頸部淋巴結(jié)的癌轉(zhuǎn)移。

    [關(guān)鍵詞] 甲狀腺腫瘤;Kiss-1;β-catenin

    [中圖分類號] R714.246 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701(2013)22-0053-03

    Kiss-1[1]是新近發(fā)現(xiàn)的與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的抑制基因,β-catenin降解障礙致使細(xì)胞質(zhì)內(nèi)游離β-catenin蓄積是Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路致癌的關(guān)鍵所在[2]。甲狀腺乳頭狀癌(PTC)具有強(qiáng)烈的早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移傾向,約有1/2患者初診時伴有頸部淋巴結(jié)腫大,很多臨床檢查淋巴結(jié)陰性的患者其實(shí)已存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)旨在分析這兩種腫瘤相關(guān)基因在PTC中的表達(dá)與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    收集2002年1月~2005年12月福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院術(shù)后病理確診的86例PTC病例(術(shù)前患者均未接受放療或化療):男21例,女65例,年齡18~86歲,平均38歲,中位年齡33歲,其中微小癌(直徑<1 cm)61例,非微小癌25例;伴有頸部淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移者40例(A組),不伴轉(zhuǎn)移者46例(B組),另取結(jié)節(jié)性甲狀腺腫或?yàn)V泡性腺瘤標(biāo)本中盡量遠(yuǎn)離病變區(qū)的周圍正常甲狀腺組織15例作為對照組(C組)。所有患者的術(shù)后切除標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定10~12 h后取材,由全自動脫水機(jī)脫水、透明、浸蠟,然后石蠟包埋制成蠟塊,對照HE切片隨機(jī)挑取含有較為豐富癌組織的PTC的蠟塊連續(xù)切片,待免疫組化染色備用。

    1.2 方法

    采用S-P免疫組化法染色。兔抗人Kiss-1單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司,工作濃度1∶120。一抗鼠抗人即用型單克隆抗體β-catenin(克隆號:MAB-0259)、通用型Ultrasensitive S-P試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)公司。用PBS緩沖液代替一抗做陰性對照,用已知陽性組織切片做陽性對照,嚴(yán)格照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

    1.3 結(jié)果判斷

    由兩位高年資病理醫(yī)師采用雙盲法對免疫組化染色切片進(jìn)行觀察,Kiss-1以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒沉著為陽性染色,每張切片隨機(jī)選取10個高倍視野(×400),根據(jù)文獻(xiàn)[3]報(bào)道,分別對其中陽性細(xì)胞的比率和染色深度分別進(jìn)行評估,最后綜合評定,陽性細(xì)胞比例計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):<10%為1分,10%~50%為2分,>50%為3分;染色強(qiáng)弱計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):陰性為0分,淡黃色染色為1分,中度黃色染色為2分,棕褐色染色為3分。二者之積計(jì)總分:總分<3分為陰性(圖1),≥3分為陽性。β-catenin主要表達(dá)于上皮細(xì)胞.細(xì)胞接觸側(cè)的胞膜上,β-catenin結(jié)果判斷參照Mayurama等[4]的方法,分別從細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核判斷β-catenin在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)特征,細(xì)胞膜β-catenin表達(dá)陽性的細(xì)胞數(shù)>70%判定為正常表達(dá),反之為表達(dá)缺失;細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核β-catenin表達(dá)陽性的細(xì)胞數(shù)>10%(包括同時細(xì)胞膜表達(dá)>70%者)判定為異位表達(dá),膜表達(dá)缺失或異位表達(dá)均稱為異常表達(dá)(圖2)。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    應(yīng)用SPSS13.5軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用χ2檢驗(yàn),P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析亦采用χ2檢驗(yàn)中的相關(guān)性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    2.1 正常甲狀腺組織、PTC組織中Kiss-1蛋白的表達(dá)

    15例正常甲狀腺組織均表達(dá)Kiss-1,陽性表達(dá)率為100%;86例PTC組織中41例表達(dá)Kiss-1,陽性表達(dá)率為47.67%,兩者間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.16,P < 0.01)。25例微小癌中8例表達(dá)Kiss-1,陽性表達(dá)率為32%;61例非微小癌中33例表達(dá)Kiss-1,陽性表達(dá)率為54.1%,兩者間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.47,P > 0.05)。40例伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC(A組)中10例表達(dá)Kiss-1,陽性表達(dá)率為25%;46例無伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC(B組)中31例表達(dá)Kiss-1,陽性表達(dá)率為67.39%,兩者間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.41,P < 0.01)。見表1。

    2.2 正常甲狀腺組織、PTC組織中β-catenin蛋白的表達(dá)

    在正常甲狀腺組織中,β-catenin主要表達(dá)于細(xì)胞膜,未見異常表達(dá);86例PTC組織中59例異常表達(dá)β-catenin,異常表達(dá)率為68.60%,兩者間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.75,P < 0.01)。25例微小癌中16例異常表達(dá)β-catenin,異常表達(dá)率為64%;61例非微小癌中43例異常表達(dá)β-catenin,異常表達(dá)率為70.49%,兩者間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.35,P > 0.05)。40例伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC(A組)中29例異常表達(dá)β-catenin,異常表達(dá)率為72.5%;46例無伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC(B組)中30例異常表達(dá)β-catenin,異常表達(dá)率為65.22%,兩者間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.53,P > 0.05)。見表1。

    2.3 PTC組織中Kiss-1、β-catenin蛋白表達(dá)的關(guān)系

    45例Kiss-1表達(dá)陰性的PTC中,β-catenin異常表達(dá)者42例,正常表達(dá)者3例;41例Kiss-1表達(dá)陽性的PTC中,β-catenin異常表達(dá)者17例,正常表達(dá)者24例,兩者間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=26.80,P < 0.01),而且Kiss-1陰性表達(dá)與β-catenin異常表達(dá)呈正相關(guān)(spearman correlation value=0.56,P < 0.01)。見表2。

    3 討論

    甲狀腺乳頭狀癌在甲狀腺惡性腫瘤中的發(fā)病率最高,且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,其臨床特點(diǎn)是易發(fā)生早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和局部浸潤,即使在微小癌階段。癌細(xì)胞從原發(fā)部位脫落作為浸潤和轉(zhuǎn)移的首要環(huán)節(jié),與細(xì)胞粘附功能降低密切相關(guān)。結(jié)合型β-catenin參與細(xì)胞間的黏附,它與E鈣黏蛋白形成復(fù)合體,再與肌動蛋白的細(xì)胞骨架相連,進(jìn)一步加強(qiáng)細(xì)胞之間的緊密連接[5],本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PTC的β-catenin異位表達(dá)率顯著高于正常的甲狀腺組織,說明PTC癌細(xì)胞胞膜結(jié)合型β-catenin減少,進(jìn)入胞漿的游離型β-catenin增多,而后者是APC-β-cat-Tcf4/Lef信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵分子,它可以通過核膜進(jìn)入到細(xì)胞核內(nèi),與DNA親和蛋白Tcf/Lef(T cell factor/lymphoid enhancer factor)結(jié)合,激活Wnt途徑靶基因調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖,參與腫瘤形成[6]。但是β-catenin的異位表達(dá)率在微小癌和非微小癌、伴有和無伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC組織之間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,由此可見β-catenin的異位表達(dá)很可能始于PTC發(fā)生發(fā)展過程中的早期階段,并且不斷地蓄積于細(xì)胞漿、進(jìn)而累積在細(xì)胞核引發(fā)細(xì)胞癌變。

    腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因是近年來關(guān)注的研究領(lǐng)域,Kiss-1在正常組織中,如心臟、腦、肺、胎盤、睪丸、胰腺、肝臟、腎臟、小腸等組織中都有不同水平的表達(dá)[7],其編碼蛋白可與其受體GPR54結(jié)合引起一系列生理生化改變,從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[8]。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)PTC組織的Kiss-1陽性表達(dá)率顯著低于正常甲狀腺組織,提示PTC的發(fā)生可能與Kiss-1的表達(dá)缺失有關(guān);伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的Kiss-1陽性表達(dá)率顯著低于無伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,提示Kiss-1是影響PTC發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要因素。然而Kiss-1陽性表達(dá)率在微小癌和非微小癌之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩者的Kiss-1的陽性表達(dá)率均較低,這亦可成為一個解釋PTC即使在微小癌階段也極易發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移原因的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。經(jīng)相關(guān)性分析得知PTC組織中Kiss-1的陰性表達(dá)與β-catenin異常表達(dá)正相關(guān),提示Kiss-1表達(dá)的下調(diào)可能級聯(lián)增強(qiáng)了β-catenin在Wnt信號通路的正向效應(yīng)作用,隨后引發(fā)一系列的基因突變,最終導(dǎo)致PTC的發(fā)生和頸部淋巴結(jié)的癌轉(zhuǎn)移。

    [參考文獻(xiàn)]

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    [3] 呂寶軍,王曉鴻,茍新敏,等. Kiss-1、黏蛋白1和上皮鈣黏附蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系[J]. 中華實(shí)驗(yàn)外科,2011,28(9):1452-1455.

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    [8] Canbay E,Ergen A,Bugra D,et al. Kisspeptin-54 levels are increased in patients with colorectal cancer[J]. World J Surg,2012,36(9):2218-2224.

    (收稿日期:2013-05-06)

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