[摘要] 目的 探討Survivin和PTEN在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達及臨床意義。 方法 應用免疫組織化學EnVision法檢測80例NSCLC組織和30例癌旁肺組織中Survivin及PTEN的表達,并分析其與臨床病理因素之間的關系。 結果 肺癌組織中,Survivin和 PTEN的陽性表達率分別為72.5%和33.8%,癌旁組織中Survivin和 PTEN的陽性表達率分別為 0和83.3%,Survivin隨著腫瘤惡性程度增高,陽性表達率逐漸升高,而PTEN的表達則相反,二者在腫瘤中的表述呈負相關(r = -0.235,P < 0.01)。 結論 Survivin和PTEN的異常表達與NSCLC的發(fā)生發(fā)展有關,可作為判斷肺癌生物學行為和預后的參考指標。
[關鍵詞] Survivin;PTEN;非小細胞肺癌;免疫組織化學
[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701(2013)22-0050-03
肺癌是世界上發(fā)病率和病死率均居首位的惡性腫瘤,其中非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)所占比例約為肺癌總數(shù)的80%~85%[1],成為嚴重危害人類健康的疾病之一。肺癌的發(fā)生發(fā)展是多個癌基因和抑癌基因共同參與的過程,另外還與細胞增殖和凋亡調控異常有關。Survivin是凋亡抑制基因,具有抑制細胞凋亡、調控細胞周期及參與血管形成的作用,在腫瘤形成中起著重要作用。PTEN基因是一個具有酪氨酸磷酸酶活性的抑癌基因,在腫瘤細胞浸潤、血管發(fā)生及腫瘤轉移中起作用。本研究通過檢測Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺組織中的表達并分析其與臨床病理學特征之間的關系,研究二者在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及相關性,為判斷NSCLC的生物學行為及患者預后提供依據(jù)。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
隨機選取2005年1月~2012年12月濮陽市人民醫(yī)院胸外科手術切除并經病理證實的肺癌標本80例和相應的癌旁組織30例,所有患者術前均未行化療、放療和其他抗腫瘤治療?;颊吣挲g38~80歲,平均年齡(62±3.2)歲;男46例,女34例;其中鱗癌45例,腺癌35例;高、中分化52例,低分化28例。TNM分期:I期18例,Ⅱ期25例,Ⅲ期22例,IV期15例;有淋巴結轉移者48例,無淋巴結轉移者32例。所有標本均經10%福爾馬林固定,石蠟包埋,4 μm厚切片,分別進行HE染色及免疫組化染色。
1.2 方法
采用免疫組化EnVision法,多克隆兔抗人Survivin抗體、鼠抗人PTEN抗體和EnVisionTM檢測試劑盒均購自DAKO公司。將已知陽性切片作為陽性對照,用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定參考Falleni等[2]的半定量計數(shù)方法。每張切片選10個高倍視野,計數(shù)至少500個腫瘤細胞,取其平均值計算陽性細胞百分率。腫瘤細胞陽性率≤5%為0分,6%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分。根據(jù)染色強度分為4級:0分:無染色;1分:淡黃色;2分:黃色;3分:棕黃色或棕褐色。陽性細胞率與染色強度得分相乘為每例積分。規(guī)定0~1分為陰性(-),積分≥2為陽性。其中2~4分為弱陽性(+),5~8分為中度陽性(++),9~12分為強陽性(+++)。
1.3 統(tǒng)計學處理
采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)分析,陽性率比較采用χ2檢驗,相關性采用校正χ2檢驗、Spearman等級相關分析,以α=0.05為檢驗水準。
2 結果
2.1 Survivin和PTEN在NSCLC和癌旁肺組織中的表達
Survivin的陽性表達信號位于胞漿,呈棕黃色細顆粒。在肺癌組織與癌旁組織Survivin的陽性表達率分別為72.5%和0。PTEN的陽性表達信號大部分位于胞質內,少數(shù)病例位于胞核,呈不同染色程度的棕黃色細顆粒。肺癌組織中PTEN的陽性表達率為33.8%,明顯低于癌旁組織 (83.3%)(P < 0.01)。見表1。
2.2 Survivin和PTEN在NSCLC中的表達與肺癌臨床病理學特征之間的關系
Survivin和PTEN的表達與腫瘤的分化程度、臨床分期及有無淋巴結轉移相關(P均< 0.05),Survivin的表達隨著腫瘤組織分化程度的降低、臨床分期的增高和有淋巴結轉移組織而逐漸增高。PTEN的表達則與之相反。二者的表達與患者的性別、年齡、腫瘤類型差異均無統(tǒng)計學意義(均P > 0.05)。見表2。
2.3 NSCLC中Survivin的表達和PTEN表達的相關性分析
Survivin、PTEN兩者經相關性檢驗得出,Spearman相關系數(shù)r = -0.235,P < 0.01,表明Survivin與PTEN之間存在負相關關系。見表3。
3 討論
Survivin基因定位于人染色體17q25,全長1476nt,長度范圍在75~130 kb,包含4個外顯子和3個內含子,由1.9 kb的mRNA轉錄和編碼,編碼142個氨基酸組成相對分子質量約16 200的胞漿蛋白,并被證實是一種結構和功能獨特的IAP家族成員,是IAP家族中分子結構最簡單、最獨特的,也是迄今發(fā)現(xiàn)最強的IAP。Survivin主要通過直接作用于凋亡末端通路,抑制Caspase-3、Caspase-7活性,阻斷細胞的凋亡過程[3],參與腫瘤的發(fā)生。Survivin 主要在胚胎組織及分化未成熟的組織和大多數(shù)腫瘤組織中表達,在成人體內所有分化成熟的組織內均無表達。Akyurek等[4]研究表明,在正常的支氣管上皮細胞中、低分化的非典型腺瘤樣增生以及癌旁肺組織中,Survivin的表達為陰性;而在鱗狀化生和發(fā)育異常的非典型腺瘤樣增生組織中Survivin的表達為陽性。說明Survivin陽性表達是腫瘤發(fā)生的早期分子事件,提示組織學尚正常的組織存在癌變的可能[5]。為NSCLC的早期診斷提供了可靠依據(jù)。朱叢中等[6]研究發(fā)現(xiàn)Survivin的表達與組織學分級、臨床分期和有無淋巴結轉移有關,我們的研究結果顯示Survivin在NSCLC組織中表達的陽性率為72.5%,而在癌旁正常肺組織不表達,Survivin蛋白的表達與腫瘤的分化程度、臨床分期和淋巴結轉移相關(P < 0.01),而與其他臨床病理特征均無相關(P >0.05),提示Survivin蛋白表達與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展密切相關, 同時也對預后評估提供了參考。
PTEN是一種具有雙重特異性磷酸酶活性的抑癌基因,定位于染色體10q23.3,全長200 kb,由9個外顯子和8個內含子組成,編碼403個氨基酸組成的蛋白質。參與細胞凋亡和細胞周期調控,與細胞黏附和腫瘤轉移有關。PTEN突變使細胞生長失去了負調控,可導致腫瘤進行性生長[7]。研究表明PTEN表達缺失是非小細胞肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的晚期事件之一,可成為判斷肺癌分化程度、轉移及判斷病人病情預后的指標。Goncharuk VN等[8]用免疫組化方法對51例肺腺癌和53例肺鱗狀細胞癌檢測了PTEN的表達,發(fā)現(xiàn)PTEN缺失與腫瘤臨床分期、遠處轉移和患者的預后顯著相關,并且是獨立的預后因子。Wang C等[9]檢測了172例肺腺癌組織中PTEN的表達,發(fā)現(xiàn)PTEN與腫瘤分化程度、淋巴結轉移和遠處轉移有關,對肺癌患者預后有著高度預測作用。本研究結果顯示,PTEN的表達隨著腫瘤組織分化程度的降低、臨床分期的增高和有淋巴結轉移組織而逐漸降低,為判斷肺癌細胞生物學行為和患者預后提供了重要參考。
蔣暉等[10]報道,Survivin與PTEN均與細胞周期調控和細胞凋亡有關,但二者作用相反,當組織發(fā)生惡變時Survivin的表達上調,而PTEN表達下降或缺失,進而抑制血管內皮細胞和腫瘤細胞的凋亡,促進腫瘤細胞的增殖以及腫瘤血管的生成。本研究結果與文獻報道一致。因此,研究Survivin和PTEN在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理因素之間的關系,將對非小細胞肺癌的早期診斷、臨床治療和預后判斷具有重要的指導意義。
[參考文獻]
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(收稿日期:2013-05-03)