鉬中毒對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中SOD、CP、XOD和POD活性的影響

摘要：將10只體重為（21±3）kg的健康卡拉庫(kù)爾羊隨機(jī)分成2組，每組5只，試驗(yàn)組按每天30 mg/kg體重灌服鉬酸銨，對(duì)照組灌服相同體積的去離子水，每隔15 d檢測(cè)血清中超氧化物歧化酶（SOD）、銅藍(lán)蛋白（CP）、黃嘌呤氧化酶（XOD）和過(guò)氧化物酶（POD）的活性。結(jié)果顯示，試驗(yàn)組的血清中SOD、CP、XOD、POD活性顯著低于對(duì)照組（P﹤0.05）。因此，血清中SOD、XOD、CP、POD活性可作為綿羊鉬中毒診斷的敏感指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：卡拉庫(kù)爾羊；鉬中毒；銅酶；鉬酶

中圖分類號(hào)：S826.8+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）18-4458-03

鉬（Molybdenum，Mo）是人和動(dòng)物的必需微量元素，是動(dòng)物體內(nèi)多種酶的組成成分，對(duì)維持機(jī)體生命活動(dòng)具有極其重要的作用，但人和動(dòng)物對(duì)鉬的需求量均小于1 mg/kg[1]，且反芻動(dòng)物對(duì)鉬特別敏感，過(guò)量食入則會(huì)導(dǎo)致鉬中毒。據(jù)研究表明，高鉬引起的動(dòng)物中毒主要表現(xiàn)為明顯的銅缺乏癥狀[2]，故測(cè)定血液中相關(guān)酶活的變化，對(duì)動(dòng)物鉬中毒早期診斷具有重要意義。李三強(qiáng)等[3]通過(guò)高鉬飲水復(fù)制了耕牛鉬中毒的病理模型，并測(cè)定了超氧化物歧化酶（SOD）和黃嘌呤氧化酶（XOD）等的活性，為耕牛鉬中毒的診斷提供了依據(jù)。為此，本試驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建卡拉庫(kù)爾羊鉬中毒的動(dòng)物模型，觀察卡拉庫(kù)爾羊鉬中毒后血清中SOD、銅藍(lán)蛋白（CP）、XOD和過(guò)氧化物酶（POD）活性變化規(guī)律，以期為動(dòng)物鉬中毒的診斷、治療和環(huán)境污染的控制提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動(dòng)物為10只（21±3） kg的卡拉庫(kù)爾羊，健康狀況良好。試驗(yàn)羊集體驅(qū)蟲，飼喂相同基礎(chǔ)日糧，預(yù)飼期20 d。預(yù)飼期后根據(jù)體重相近的原則將試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成2組，即試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組5只，分欄飼養(yǎng)。試驗(yàn)期為60 d，其飼喂方式相同，均以青貯玉米為主，分早、晚兩次添加，中午補(bǔ)飼青干草，除此之外每晚添加精料200 g/只。試驗(yàn)組每天以30 mg/kg劑量灌服鉬酸銨（NH4）2MoO4，對(duì)照組灌服相同體積的去離子水。

1.2 主要試劑

超氧化物歧化酶（SOD）、銅藍(lán)蛋白（CP）、黃嘌呤氧化酶（XOD）、過(guò)氧化物酶（POD）試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；鉬酸銨（分析純），購(gòu)自淄博市三營(yíng)化工有限公司。

1.3 主要儀器

721型可見光分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠），TDL-5-A型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），HH-W420型三用恒溫水箱（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠），VORTEX-5型旋窩振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.4 樣本采集與處理

分別在試驗(yàn)期的0、15、30、45、60 d早上9：30～10：30空腹采血，血液采集后先于37 ℃恒溫水浴30 min，之后以3 000 r/min離心30 min，分離血清后置于4 ℃冰箱內(nèi)，待測(cè)。

1.5 樣品的測(cè)定方法

SOD采用羥胺法測(cè)定，CP、XOD和POD活性均采用比色法測(cè)定，操作步驟及方法嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，結(jié)果以x±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

在試驗(yàn)開始15 d后，試驗(yàn)組個(gè)別羊出現(xiàn)采食量減少、精神沉郁等癥狀，此后隨著試驗(yàn)天數(shù)的增加，試驗(yàn)組全部羊逐漸出現(xiàn)上述癥狀。與此同時(shí)，眼圈周圍的毛色開始逐漸變白，發(fā)生嚴(yán)重的持續(xù)性腹瀉、糞便稀薄并帶有氣泡，有泥炭味，個(gè)別羊發(fā)生共濟(jì)失調(diào)；食欲不振，貧血，消瘦；被毛粗糙，色澤變淺，可視黏膜蒼白。

2.2 鉬中毒對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中SOD活性的影響

由表1可知，試驗(yàn)組和對(duì)照組血清SOD活性在0 d差異不顯著（P>0.05），但在15、30、45、60 d時(shí)差異顯著（P<0.05）；試驗(yàn)組SOD活性在試驗(yàn)期由（87.79±8.42） U/mL下降到（77.26±12.41） U/mL；對(duì)照組卡拉庫(kù)爾羊血清中SOD活性變化不明顯。

2.3 鉬中毒對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中CP活性的影響

由表2可知，試驗(yàn)組和對(duì)照組血清CP活性在0、15、30 d時(shí)差異不顯著（P>0.05），但在45、60 d時(shí)差異顯著（P<0.05）；試驗(yàn)組CP活性總體呈下降趨勢(shì)，但在15 d時(shí)所測(cè)CP活性較0 d時(shí)升高；對(duì)照組0、30、45、60 d時(shí)CP活性變化不大，但15 d時(shí)所測(cè)得的CP活性明顯高于0、30、45、60 d時(shí)的。

2.4 鉬中毒對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中XOD活性的影響

由表3可知，試驗(yàn)組和對(duì)照組血清中XOD活性在0、15 d時(shí)差異不顯著（P>0.05），但在30、45、60 d時(shí)差異顯著（P<0.05）；試驗(yàn)組XOD活性由（11.29±4.47） nU/mL下降到（9.94±1.56） nU/mL，XOD活性總體呈持續(xù)下降趨勢(shì)。

2.5 鉬中毒對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中POD活性的影響

由表4可知，試驗(yàn)組和對(duì)照組血清POD活性在0 d時(shí)差異不顯著（P<0.05），在15、30、45、60 d時(shí)差異顯著（P<0.05）；試驗(yàn)組POD活性由（73.91±9.78） U/mL下降到（58.32±11.93） U/mL。

3 小結(jié)與討論

3.1 鉬對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中SOD、CP活性的影響

鉬與銅在吸收上存在著明顯的拮抗作用，其原理可能是由于鉬與銅相互競(jìng)爭(zhēng)載體系統(tǒng)從而導(dǎo)致相互抑制[4]。隨著鉬在體內(nèi)的含量不斷升高，會(huì)干擾體內(nèi)銅的吸收與代謝，導(dǎo)致動(dòng)物銅缺乏，進(jìn)而影響SOD和CP的活性[5，6]。本試驗(yàn)血清中SOD活性隨鉬在體內(nèi)的蓄積而顯著降低，這與張瑜等[7]和楊自軍等[8]研究結(jié)果相一致。銅在體內(nèi)大部分與蛋白結(jié)合，吸收進(jìn)入血液的銅主要以CP的形式存在，而高鉬導(dǎo)致繼發(fā)性銅缺乏，使體內(nèi)的銅含量迅速下降而減少血清中CP的合成，本試驗(yàn)血清中CP的活性降低，這與張明等[9]研究報(bào)道一致。

3.2 鉬對(duì)卡拉庫(kù)爾羊血清中XOD、POD活性的影響

到目前為止，已知鉬的生理功能在于通過(guò)各種酶的活性來(lái)實(shí)現(xiàn)，其存在于所有生物體。XOD作為機(jī)體的重要酶之一，對(duì)體內(nèi)嘌呤化合物的氧化代謝及最后形成尿酸起主要的催化作用，對(duì)機(jī)體代謝和有害物質(zhì)的清除有重要作用[10]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，血清中XOD活性隨著鉬在機(jī)體內(nèi)的蓄積呈顯著降低，過(guò)量的鉬抑制了XOD的活性，從而影響細(xì)胞的正常代謝，這與程才才等[11]研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)中POD活性隨鉬中毒的加重而顯著下降。POD是機(jī)體重要的酶，也是機(jī)體內(nèi)主要抗氧化酶系之一，它協(xié)同SOD一起分解體內(nèi)自由基代謝產(chǎn)物H2O2，使其變成H2O[12]。適量的鉬可促進(jìn)POD將一定數(shù)量的自由基快速分解，而鉬中毒時(shí)會(huì)造成機(jī)體自由基的大量堆積，這時(shí)POD無(wú)法有效清除過(guò)量的自由基，而其活性也受到自由基的抑制。

本試驗(yàn)結(jié)果表明卡拉庫(kù)爾羊機(jī)體鉬中毒時(shí)，高劑量的鉬能夠引起機(jī)體銅缺乏，導(dǎo)致自由基大量堆積、細(xì)胞能量代謝障礙等因素，所測(cè)SOD、CP、XOD和POD的活性均顯著降低，故上述四個(gè)指標(biāo)可作為鉬中毒診斷的敏感指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 施詠梅.鉬——人體必需微量元素[J].中國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)雜志，2005， 13（2）：120-123.

[2] 李樹鵬，郝艷霞.畜禽鉬中毒[J].飼料博覽，2004，6（11）：33.

[3] 李三強(qiáng)，龍 晶，牛映斗，等.飲用天然高鉬水誘發(fā)鉬中毒耕牛主要生物酶測(cè)定[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1998，10（1）：29-33.

[4] BOSTICK B C，F(xiàn)ONDORF S.Differential adsorption of molybdate and tetrathion molybdate on pyrite[J].Environ Sci Technol，2003，37（2）：285-291.

[5] MARTYNOWICZ H，SKOCZYNSKA A.Cadmium toxicity：Cadmium and hypertension[J].Pol Arch Med Wewn，2004，111（2）：243-249.

[6] 劉宗平.動(dòng)物中毒病學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[7] 張 瑜，許建海，朱曉萍，等.日糧不同銅、鉬水平對(duì)遼寧絨山羊機(jī)體抗氧化性能的影響[J].中國(guó)畜牧雜志，2010，46（17）：30-33.

[8] 楊自軍，冉林武，趙樹科，等.試驗(yàn)性鉬中毒綿羊血液酶學(xué)指標(biāo)的變化與鋅、銅的保護(hù)作用[J].畜牧與獸醫(yī)，2008，40（4）：52-55.

[9] 張 明，段 鏈，劉 妍，等.銅攝入量對(duì)大鼠血中脂蛋白代謝酶的影響[J].環(huán)境與健康雜志，2010，27（9）：792-794.

[10] 王自良，張海棠，李軍民.鉬的毒性與反芻動(dòng)物鉬中毒[J].黃牛雜志，2004，30（5）：40-43.

[11] 程才才，楊自軍.不同劑量鉬對(duì)小尾寒羊組織病理變化及抗氧化功能影響[J].飼料工業(yè)，2012，33（5）：41-44.

[12] 曾 陽(yáng)，馬繼雄，陳振寧，等.藏藥翁布對(duì)力竭運(yùn)動(dòng)小鼠心肌過(guò)氧化物酶（POD）活性及脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，26（6）：6-8.