超聲醇溶-紫外分光光度法測定不同產地三七花中總黃酮含量*

朱艷琴，殷勤紅，楊俊，楊朝芬，孫曉東

1(昆明理工大學分析測試研究中心，云南昆明，650093)

2(昆明積大制藥股份有限公司，云南昆明，650106)

三七花是傳統(tǒng)名貴中藥五加科植物三七的干燥花蕾(flower buds of Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen)，盛產于云南文山、廣西等地，含有各種人參皂苷［1］、三七花苷元［2］等，作為藥材已載入《云南中草藥選》，“甘涼，清熱平肝，降壓，治療高血壓，頭昏，目眩，耳鳴，急性咽喉炎”。三七花既是名貴中藥藥品，又是優(yōu)等食品、保健品，可泡茶、炒肉、煲湯等藥膳食療，長期服用對治病和養(yǎng)生都頗有裨益［3-10］。但目前相關的研究力度尚為薄弱［11-13］。本實驗采用超聲醇溶-紫外分光光度法對不同產地的12批三七花總黃酮含量進行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

三七花，2009年8月采于云南省各地州，經云南大學中草藥生物資源研究所云百草實驗室虞泓教授鑒定為五加科植物三七(Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen)的干燥花蕾。無水乙醇、NaOH、NaNO2、Al(NO3)3(中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司，AR級);蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100080-200306)。

UV-2550型紫外可見分光光度計(SHIMADZU制作所)，SB3200型超聲波清洗器(必能信超聲有限公司);BP211D電子天平(Sartorius公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 蘆丁標準溶液配制

精確稱取經60℃減壓干燥至恒重的蘆丁標準對照品30.7 mg，加60%乙醇溶解并定容至50 mL，制成濃度為0.614 mg/mL的對照品溶液。

1.2.2 待測樣品的提取

取本品粉末0.2 g，加60%乙醇溶液5 mL，超聲1 h，混勻，5 000轉 r/min離心5 min，重復3次。吸取上清液2 mL至25 mL量瓶中，用60%乙醇溶液定容。用分光光度計在508 nm波長處測定吸光度，以60%乙醇代替樣品溶液，作為空白溶液。

2 結果

2.1 單因素試驗

2.1.1 乙醇濃度對總黃酮含量的影響

稱取編號為S12的三七花粉末0.2 g，分別加濃度為30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 乙醇溶液5 mL，照1.2.2項下方法操作，考察不同乙醇濃度對總黃酮含量的影響，結果見圖1。

圖1 乙醇濃度對總黃酮含量的影響Fig.1 Effect of ethanol concentration on the yield of total flavones

隨著乙醇濃度的增加，三七花總黃酮含量也升高，但乙醇濃度為60%時，總黃酮含量為最大;隨著乙醇濃度的進一步增加，三七花總黃酮含量卻降低。因此提取液選擇乙醇濃度為60%。

2.1.2 料液比對總黃酮含量的影響

稱取編號為S12的三七花粉末0.2 g，分別加60%乙醇溶液 2、3、4、5、6、7、8 mL，照 1.2.2 項下方法操作，考察不同料液比對總黃酮含量的影響，結果見圖2。由圖2可知，當料液比為1∶25時，三七花總黃酮含量為最大，隨著料液比的進一步增加，總黃酮增加不明顯。因此選擇料液比為1∶25。

圖2 料液比對總黃酮含量的影響Fig.2 Effect of liquid to solid ratio on the yield of total flavones

2.1.3 超聲時間對總黃酮含量的影響

稱取編號為S12的三七花粉末0.2 g，加60%乙醇溶液 5 mL，分別超聲 20、40、60、80、100、120 min，照1.2.2方法操作，結果見圖2。超聲時間為60 min時，總黃酮含量為最大;隨著超聲時間的進一步增加，三七花總黃酮含量增加不明顯。因此提取液選擇超聲時間為60 min。

圖3 超聲時間對總黃酮含量的影響Fig.3 Effect of extraction time on the yield of total flavones

2.2 標準曲線的繪制

取上述對照品溶液各 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL蘆丁對照品溶液，分別置于20 mL試管中，加甲醇至2 mL，再加50 g/L亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min;再加入100 g/L硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min;再加入40 g/L氫氧化鈉溶液10 mL，再加入60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min后，以蒸餾水為空白溶液，在508 nm波長處測定各標準品溶液的吸光度。以吸光度A為縱坐標，濃度(mg/mL)為橫坐標繪制標準曲線，并求出回歸方程為:Y=13.825X-0.007 4，R2=0.999 4。樣品測定見圖4。

圖4 總黃酮標準曲線圖Fig.4 Standard curves of total flavones

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度試驗

取編號為S12的樣品溶液，分別在508 nm波長處測定吸光度，分別為 0.255，0.256，0.257，0.255，0.258，0.257，平均值為 0.256，RSD 為 0.47%(n=6)，表明試驗的精密度良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗

取編號為S12的待測樣品，分別放置于室溫，于0、10、20、30、40、50、60 min 時測定吸光度，分別為0.257、0.254、0.251、0.246、0.245、0.242、0.241，平均值為0.248，RSD為2.46%(n=7)，表明待測樣品在1 h內較穩(wěn)定。

2.3.3 重復性試驗

取編號為S12的樣品，按照1.2.2項下的方法操作，平行制備6份樣品，分別在508 nm波長處測定吸光度，含量分別為 0.472%，0.476%，0.482%，0.485%，0.476%，0.478%，平均值為 0.478%，RSD為0.98%(n=6)，表明試驗的重復性良好。

2.3.4 加樣回收率試驗

取已知含量的三七花(編號S12)粉末各6份，每份約0.1 g，分別加入上述蘆丁對照品溶液各1 mL，按1.2.2項下的方法平行制備樣品溶液，測定吸光度，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗表Table 1 Recovery of adding standards

2.4 三七花總黃酮含量的測定

取下表中12個不同產地的三七花樣品，按1.2.2項下的方法平行制備樣品溶液，測定吸光度，計算其含量，結果見表2。

表2 三七花中總黃酮含量測定結果Table 2 Assay results of flavones in Panax notoginseng flowers

3 討論與結論

本研究采用超聲醇溶的方式提取三七花中的黃酮類化合物，并對總黃酮含量進行了測定。從研究結果看，云南馬關縣八寨鎮(zhèn)和文山縣開化鎮(zhèn)東山鄉(xiāng)的三七花總黃酮含量最高，達到了0.73%和0.72%;而云南硯山縣江娜鎮(zhèn)銃卡村和空心山的三七花總黃酮含量最低，僅有0.43%和0.45%。表明云南產三七花總黃酮含量差異較大，這可能與三七花的產地、種植條件、采收期等有關。三七花因含特有的甘味而受到眾多消費者的喜愛，隨著研究的逐步深人，必然會為新藥研發(fā)提供更堅實的理論基礎，同時也為三七花的可持續(xù)產業(yè)化發(fā)展道路指明了方向。

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