五加參沖劑（浸膏粉）毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)研究Ⅱ＊

朱愛(ài)華 楊鈞 張藝芳 秦永剛 周新民 何愛(ài)武

陜西中藥研究所（咸陽(yáng)712000）

五加參沖劑是在繼承祖國(guó)傳統(tǒng)養(yǎng)生理論的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究成果，選用陜西地產(chǎn)五加—倒卵葉五加莖為主要原料，配以麥冬、五味子研制而成的具有抗疲勞作用的保健功能食品。該產(chǎn)品可明顯地延長(zhǎng)小鼠游泳時(shí)間，降低血清尿素氮、乳酸含量，提高肝糖原含量，消除疲勞狀態(tài)，具有明顯地抗疲勞作用。本研究是在五加參沖劑的經(jīng)口急性毒性、30d喂養(yǎng)試驗(yàn)毒性、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用小鼠精子畸形試驗(yàn)、傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)的方法，進(jìn)一步研究五加參沖劑的毒理學(xué)安全性。

1 材 料 1.1 樣 品 五加參沖劑（浸膏粉）內(nèi)容物呈棕色細(xì)粉狀，1g浸膏粉相當(dāng)于成品3g，由陜西利威爾制藥有限公司提供。用蒸餾水配制各劑量濃度。人體推薦成品最大用量14g／人／d。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 SD 大鼠和昆明種小鼠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（陜）2007－001。

2 方 法［1］2.1 小鼠精子畸形試驗(yàn) 將雄性小鼠分為5組，每組5 只小鼠。即五加參沖劑（浸膏粉）4.0g／kg、8.0g／kg和16.0g／kg3個(gè)劑量組，另設(shè)陰性對(duì)照組（蒸餾水）和陽(yáng)性對(duì)照組（絲裂霉素C1.5mg／kg）共5組，連續(xù)5d分別灌胃給予受試物。按照衛(wèi)生部保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范小鼠精子畸形試驗(yàn)試驗(yàn)方法，在末次灌胃后30d，處死小鼠，取其副睪放入生理鹽水中剪碎、過(guò)濾，然后用濾液涂片、染色、鏡檢，計(jì)數(shù)精子畸形數(shù)，并計(jì)算精子畸形發(fā)生率（‰），結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析（χ2檢驗(yàn)）。

2.2 傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 將五加參沖劑（浸膏粉）設(shè)計(jì)為2.75g／kg、5.50g／kg和11.0g／kg3個(gè)劑量組，另設(shè)溶劑對(duì)照組（蒸餾水），每組15只孕鼠（按查得陰栓計(jì)），按照衛(wèi)生部保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范致畸試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。于孕第7～16d灌胃給予受試物，每天1次，第20d解剖取胎鼠，進(jìn)行外觀檢查后分別進(jìn)行胎鼠骨骼、內(nèi)臟前處理，再觀察與統(tǒng)計(jì)。

3 結(jié) 果 3.1小鼠精子畸形試驗(yàn) 各劑量組與溶劑對(duì)照組精子畸形率間差異無(wú)顯著性（P ﹥0.05）；陽(yáng)性對(duì)照組與溶劑對(duì)照組精子畸形率間差異有高度顯著性（P＜0.01）。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示五加參沖劑（浸膏粉）在4.0g／kg～16.0g／kg劑量范圍內(nèi)對(duì)小鼠生殖細(xì)胞未見(jiàn)損害作用。

3.2 傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)（大鼠） 3.2.1對(duì)孕鼠體重的影響：

表1 五加參沖劑（浸膏粉）精子畸形試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)（±s）

表1 五加參沖劑（浸膏粉）精子畸形試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)（±s）

注：卡方檢驗(yàn)；與溶劑對(duì)照組比較△P＜0.05，▲P＜0.01

組 別（g／kg）n精子計(jì)數(shù)畸形精子數(shù)精子畸形率（%）4.0 5 1000×5 18.6±3.85 1.86五加參沖劑8.0 5 1000×5 20.2±6.69 2.02五加參沖劑16.00 5 1000×5 22.4±4.67 2.24陰性對(duì)照－5 1000×5 19.0±3.81 1.90絲裂霉素C陽(yáng)性對(duì)照1.5mg 5 1000×5 116.0±20.0▲ 11.60五加參沖劑▲

表2 五加參沖劑（浸膏粉）對(duì)孕鼠體重的影響（g）（±s）

表2 五加參沖劑（浸膏粉）對(duì)孕鼠體重的影響（g）（±s）

注：組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，與溶劑對(duì)照組比較△P＜0.05，▲P＜0.01

組 別劑量（g／kg）孕鼠數(shù)（n）妊娠天數(shù)（d）0 7 12 16 20總增重（g）.82 314±38.51 95.4±34.20五加參沖劑 5.50 13 196±7.37 227±10.52 227±10.52 279±12.03 305±13.00 109.2±16.71五加參沖劑 11.0 12 219±19.99 247±14.86 262±15.42 292±29.63 310±25.23 90.8±28.73溶劑對(duì)照－ 12 215±20.66 242±17.20 260±17.55 283±18.54 五加參沖劑 2.75 13 242±25.29 254±34.55 254±34.55 282±36 310±22.21 94.5±19.81

表2中，各實(shí)驗(yàn)組孕鼠總增重與對(duì)照組孕鼠總增重值比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，結(jié)果t值均小于2.074，其差異均無(wú)顯著性（P ﹥0.05）。

3.2.2 對(duì)胎鼠的影響：

表3 五加參沖劑（浸膏粉）對(duì)大鼠胎鼠的影響（±s）

表3 五加參沖劑（浸膏粉）對(duì)大鼠胎鼠的影響（±s）

注：組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，與溶劑對(duì)照組比較△P＜0.05，▲P＜0.01

組別劑量（g／kg）受精鼠（n）受孕鼠（n）胎鼠數(shù)（n）平均胎仔數(shù)（n）胎仔平均重（g）吸收胎（n）死胎數(shù)（n）2.75 16 13 140 10.8±2.42 4.11±0.475 6 0五加參沖劑5.50 16 13 140 10.8±1.88 4.09±0.375 4 0五加參沖劑11.00 16 13 136 11.3±1.37 4.05±0.527 3 0溶劑對(duì)照五加參沖劑－16 13 136 11.4±2.75 4.04±0.472 6 0

表4 五加參沖劑（浸膏粉）對(duì)胎鼠骨骼的影響

表5 五加參沖劑（浸膏粉）對(duì)胎鼠內(nèi)臟的影響

從表2～5可見(jiàn)，各劑量組胎鼠一般狀況、骨骼及內(nèi)臟檢查與溶劑對(duì)照組比較均無(wú)明顯異常變化。

試驗(yàn)期各劑量組孕鼠均未見(jiàn)中毒表現(xiàn)。

3 討 論 五加參沖劑是由倒卵葉五加、麥冬、五味子組成的復(fù)方制劑，急性毒性試驗(yàn)、大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及Ames試驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)毒性作用［2］，本次小鼠精子畸形試驗(yàn)為陰性結(jié)果，大鼠致畸試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)致畸作用，說(shuō)明五加參沖劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各項(xiàng)毒理學(xué)指標(biāo)均未產(chǎn)生毒理作用，根據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》［3］，五加參沖劑符合食用要求，安全無(wú)毒。

［1］ 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范［S］.北京：中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，2003：177－224.

［2］ 朱愛(ài)華，張藝芳，楊 鈞，等.五加參沖劑毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)研究［J］.陜西中醫(yī)，2013，34（4）：489.

［3］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序及評(píng)價(jià)方法［S］.北京，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.1－21－2003.