GC-MS 內(nèi)標(biāo)法測定蘋果中噠螨靈殘留量不確定度的評定

賴添財，蔡恩興

（漳州市農(nóng)業(yè)檢驗監(jiān)測中心，福建漳州363000）

噠螨靈又名噠螨酮、速螨酮，屬廣譜、高效、低毒的雜環(huán)類殺蟲、殺螨劑，用于防治蘋果、梨、柑橘等果樹上的害螨[1-3]。其作為一種廣泛使用的農(nóng)藥，噠螨靈的殘留及其相關(guān)研究情況一直倍受關(guān)注[4-7]。農(nóng)業(yè)部于2012年2月14日印發(fā)了《茄果類蔬菜等37類無公害農(nóng)產(chǎn)品檢測目錄》，其中，柑果和漿果類果品則要求依據(jù)國標(biāo)GB/T 19648檢測的農(nóng)殘項目檢測噠螨靈等多個項目。

測量不確定度是對測量結(jié)果質(zhì)量的定量表征，測量結(jié)果的可靠性很大程度上取決于不確定度的大小。測量不確定度的評定是實驗室質(zhì)量管理和認(rèn)可評審的重要內(nèi)容[8]，本研究參照《測量不確定度評定與表示》[9]，通過《水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法（GB/T 19648—2006）》[10]評定蘋果中噠螨靈殘留量的不確定度，為實驗室質(zhì)量控制提供科學(xué)、準(zhǔn)確的依據(jù)，同時為測量其他農(nóng)藥殘留量的不確定評定提供參考。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀Agilent 6890/5975B（美國安捷倫公司），電子天平（0.1 mg：CPA224S，賽多利斯；0.01 g：TMP-500，湖南儀器儀表廠），噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品（99.0%±0.4%，農(nóng)業(yè)部環(huán)境科研監(jiān)測所），環(huán)氧七氯（99.5%±0.5%，Dr.Ehrenstorfer GmbH，德國），甲苯（色譜純），乙腈（色譜純）。

1.2 測定方法

按照GB/T 19648—2006的要求，稱取20 g蘋果試樣（精確至0.01 g），加入40 mL乙腈，勻漿提取1 min，加5 g氯化鈉，再勻漿提取1 min，3 000 r/min離心后取20 mL上清液于45℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1 mL，經(jīng)GCB/PSA固相萃取柱凈化后，樣液濃縮定容為1 mL，加入50μL內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，用于氣相色譜質(zhì)譜的測定。

1.3 數(shù)學(xué)模型

式中，X 為試樣中被測物殘留量（mg/kg）；cs為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的濃度（μg/mL）；A為試樣溶液中被測物的色譜峰面積；As為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的色譜峰面積；ci為試樣溶液中內(nèi)標(biāo)物的濃度（μg/mL）；csi為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中內(nèi)標(biāo)物的濃度（μg/mL）；Asi為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積；Ai為試樣溶液中內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積；V 為樣液最終定容體積（mL）；m 為試樣溶液所代表試樣的質(zhì)量（g）。

2 不確定度的來源

測定不確定的主要來源為：校準(zhǔn)過程產(chǎn)生的不確定度；測量重復(fù)性產(chǎn)生的不確定度；樣品稱質(zhì)量產(chǎn)生的不確定度；體積量取產(chǎn)生的不確定度；回收率產(chǎn)生的不確定度。

3 不確定度的評定

3.1 校準(zhǔn)過程產(chǎn)生的不確定度

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)產(chǎn)生的不確定度u1（C）

3.1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程產(chǎn)生的不確定度 取1 mL噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)儲備液（400μg/mL）放入100 mL容量瓶（A級）中，用甲苯定容至刻度，得到4μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。再用5 mL分度吸量管移取5，2.5，1.25，0.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于一系列10 mL容量瓶中，每個容量瓶加0.5 mL內(nèi)標(biāo)溶液，定容至刻度，得到濃度分別為2.0，1.0，0.5，0.2μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

按照3.1.1.1計算方法，由標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程產(chǎn)生的不確定度分量列于表1，合成相對不確定度為：u11rel（C）＝0.010 8。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程產(chǎn)生的不確定度分量

故合成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制產(chǎn)生的相對不確定度為：

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合產(chǎn)生的不確定度 分別取以上5種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液1μL于氣質(zhì)聯(lián)機(jī)重復(fù)測定2次，通過化學(xué)工作站積分得到相應(yīng)的色譜峰面積A，使用內(nèi)標(biāo)法擬合而成的線性回歸方程為A＝b C＋a（a為截距，b為斜率），計算結(jié)果如表2所示。

擬合而成的線性回歸方程為：A＝190 655C-23 505（線性相關(guān)系數(shù)r＝0.999 0）。

取一陽性樣品，進(jìn)行3次重復(fù)檢測，測得其平均質(zhì)量濃度C0為1.803μg/mL，則由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合所產(chǎn)生的不確定度和相對不確定度分別為：

合成校準(zhǔn)過程產(chǎn)生的相對不確定度為：

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

3.2 測量重復(fù)性產(chǎn)生的不確定度u（）

表3 蘋果中噠螨靈含量測定的結(jié)果

3.3 回收率產(chǎn)生的不確定度u（R）

3.4 樣品稱質(zhì)量產(chǎn)生的不確定度

3.5 體積量取產(chǎn)生的不確定度

量取體積產(chǎn)生的不確定度主要由定容體積和進(jìn)樣體積不確定度組成，屬B類不確定度。

3.5.1 定容容量產(chǎn)生的不確定度

3.5.1.2 添加50μL內(nèi)標(biāo)物引起的不確定度 根據(jù)校準(zhǔn)結(jié)果可知，移取體積為50μL（V8）的最大允許差為±1.5%，按照正態(tài)分布（k＝3）計算，其引入的相對不確定度為：urel（V8）＝1.5%/3＝0.005。

4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

5 擴(kuò)展不確定度及測定結(jié)果的表示

取包含因子k＝2，噠螨靈含量的擴(kuò)展不確定度U（uc（X）×k）為0.004 4 mg/kg，故GC-MS法測定蘋果中噠螨靈含量的結(jié)果表示為（0.090 0±0.004 4）mg/kg，k＝2。

6 結(jié)論

蘋果中噠螨靈殘留量測定不確定度的來源有稱量、提取、凈化、質(zhì)譜測定等；由于始終使用同一份內(nèi)標(biāo)物，故配制內(nèi)標(biāo)溶液時無需精密稱量，由內(nèi)標(biāo)物引起的不確定度僅考慮由內(nèi)標(biāo)液轉(zhuǎn)移至標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試樣品溶液過程中引入的不確定度。

評定結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合過程和標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所產(chǎn)生的不確定最大，而體積量取和檢測重復(fù)性所產(chǎn)生的不確定度分量也較大。在日常檢查過程中，需要注意，盡量保持氣相色譜-質(zhì)譜儀較高的靈敏度，并定期對所涉儀器進(jìn)行檢定和提高操作人員的熟練水平，從而減小測量不確定度。

［1］錢宗耀，劉河疆，王建梅，等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定水果和蔬菜中噠螨靈殘留量[J].農(nóng)藥，2010，49（11）：828-829.

［2］李蓓，楊仁斌，余佳榮.噠螨靈的殘留分析方法研究進(jìn)展[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2007，26（增刊）：662-667.

［3］賀春娟，鄭衛(wèi)鋒.殺螨藥劑防治蘋果紅蜘蛛田間藥效試驗[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（11）：112-114.

［4］張昌朋，趙華，吳珉，等.我國小麥中農(nóng)藥殘留及代謝研究進(jìn)展[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2013，15（3）：243-249.

［5］丁立平，魏云昊.茶葉中噠螨靈和噻嗪酮殘留量的測定[J].農(nóng)藥，2011，50（5）：352-354，376.

［6］鄔元娟，陳子雷，李明立，等.噠螨靈在蘋果上的殘留量檢測與消解動態(tài)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2007，9（4）：419-422.

［7］馬輝，張少軍，張東海，等.噠螨靈在蘋果和土壤中的殘留動態(tài)研究[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，11（1）：108-110.

［8］郭鐵箏，潘國卿，趙治國，等.蕎麥仁水分測量不確定度評定[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2012（5）：53，72.

［9］中國計量科學(xué)研究院.JJF 1059—1999 測量不確定評定與表示[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1999.

［10］中華人民共和國秦皇島出入境檢疫檢驗局.GB/T 19648—2006 水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.