用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析鼻竇炎口服液中正己烷萃取物

★ 劉明穎 馬晉芳 羅國(guó)安 葛發(fā)歡 (.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌0004;.廣州中大南沙科技創(chuàng)新產(chǎn)業(yè)園有限公司 廣州5458;.清華大學(xué) 北京00084;4.中山大學(xué) 廣州5075)

1 引言

鼻竇炎口服液由辛夷、荊芥、薄荷、桔梗、竹葉柴胡、蒼耳子、白芷等14 味中藥組成，具有疏風(fēng)清熱、祛濕通竅的功效。鼻竇炎口服液由辛夷、荊芥、薄荷、竹葉柴胡4 味藥材通過(guò)水蒸氣蒸餾提取芳香水，此4 味藥材蒸餾后的藥渣再與其余10 味藥材煎煮，然后將芳香水與煎煮液混合得到［1］。辛夷為鼻炎要藥，辛夷揮發(fā)油［2－4］具有抗炎、抗過(guò)敏、抗組胺、抗菌和抗病毒作用;薄荷具有抗炎［5］、抗過(guò)敏、抗組胺和抗菌［6］的作用;荊芥有解熱鎮(zhèn)痛和抗炎抗菌［7］的作用，荊芥揮發(fā)油中具有抗流感病毒［8］作用。鼻竇炎口服液對(duì)慢性鼻竇炎［9］、慢性副鼻竇炎［10］具有明顯的療效。目前，尚未有鼻竇炎口服液的揮發(fā)性成分的研究報(bào)道，本方的主藥辛夷、荊芥、蒼耳子、竹葉柴胡［11］為芳香通竅之藥，主要藥效成為揮發(fā)性成分，本文應(yīng)用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)其揮發(fā)性成分進(jìn)行定性鑒別，為鼻竇炎口服液的質(zhì)量控制和藥理作用機(jī)制的研究提供了基礎(chǔ)。

2 儀器與試藥

儀器:Trace 1300 － ISQ 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司)，Hettich Mikro22R 離心機(jī)(德國(guó)Hettich 公司)，Milli －Q 超純水系統(tǒng)(美國(guó)Millipore 公司)。

試劑:正己烷(色譜純，美國(guó)Fisher 公司，批號(hào)601037000)，無(wú)水硫酸鈉(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20120820)，超純水(自制)。

樣品:鼻竇炎口服液，批號(hào)10120102，太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司。

3 方法與結(jié)果

3.1 氣相色譜條件

VF － 5ms 毛 細(xì) 管 柱(30m × 0. 25mm × 0.25μm);載氣為氦氣，流速1.0mL/分，分流進(jìn)樣，分流比為10:1;進(jìn)樣口溫度為250 ℃;檢測(cè)器溫度為280 ℃;程序升溫:起始溫度為50 ℃，以2℃/分升溫至120 ℃，再以5 ℃/分升溫至200 ℃，再以10 ℃/分升溫至280 ℃，保持3 分鐘。進(jìn)樣量1μL。

3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源，電子能量70eV，離子源溫度220 ℃，傳輸線溫度280 ℃，溶劑延遲時(shí)間3 分鐘，掃描范圍40 －650m/z。

3.3 供試品溶液的制備

精密移取鼻竇炎口服液20mL，置氣相渦旋瓶中，精密加入1mL 正己烷，渦旋5 分鐘，于4 ℃5 000 rpm 離心10 分鐘，取有機(jī)層，加入適量無(wú)水硫酸鈉除水，即得。

3.4 分析結(jié)果

將上述供試品溶液注入氣質(zhì)聯(lián)用儀，得到總離子流圖(見(jiàn)圖1)，與NIST2008 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，應(yīng)用峰面積歸一化法測(cè)得各成分的相對(duì)百分含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 鼻竇炎口服液正己烷提取物總離子流圖

表1 鼻竇炎口服液正己烷提取物成分分析

初步共鑒定出56 個(gè)成分，其中L－薄荷醇、桉葉油醇、3 －甲基環(huán)己酮、水合莰烯、胡薄荷酮、α －萜品醇、薄荷酮等7 種含量較高，約占總成分含量的80%。

4 討論

4.1 提取溶劑的選擇

本文對(duì)乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、石油醚等4 種有機(jī)溶劑進(jìn)行考察，比較溶劑對(duì)鼻竇炎口服液萃取成分信息量的影響。得到正己烷萃取得到的圖譜信息量最大，能最大程度地表征鼻竇炎口服液中揮發(fā)性成分，因此選擇正己烷為提取溶劑。

4.2 提取方法的選擇

本文選擇水蒸氣蒸餾法、超聲法和萃取法3 種提取方式進(jìn)行考察，比較提取方式對(duì)鼻竇炎口服液萃取成分信息量的影響。超聲法得到的信息量最小，萃取法與水蒸氣蒸餾法相當(dāng)，萃取法較水蒸氣蒸餾法操作簡(jiǎn)便、易于重復(fù)，因此選擇萃取法作為樣品的提取方法。

4.3 載氣流速的選擇

分別對(duì)不同載氣流速0.5 mL/分、0.8 mL/分、1.0 mL/分和1.2 mL/分進(jìn)行色譜分析，考察不同載氣流速對(duì)各色譜峰色譜行為的影響。隨著載氣流速的增加，各色譜峰的保留時(shí)間變短，分離度增大;但是當(dāng)流速增大到1.2 mL/分時(shí)，部分色譜峰分離度降低，無(wú)法達(dá)到完全分離，因此選擇載氣流速為1.0 mL/分。

本文共檢測(cè)到66 個(gè)主要色譜峰，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)匹配，初步鑒定出了56 個(gè)成分，其中43 個(gè)化合物為萜類(lèi)化合物，有30 個(gè)化合物為單萜;2 個(gè)香豆素類(lèi)化合物;11 個(gè)烷烴類(lèi)化合物;1 個(gè)脂肪族化合物，另外10 個(gè)化合物結(jié)構(gòu)未知，需要進(jìn)一步的研究。經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研可知，結(jié)構(gòu)鑒定中兩個(gè)含量較高的成分胡薄荷酮和薄荷酮［8］來(lái)源于荊芥和薄荷藥材，具有抗流感病毒的作用。目前鼻竇炎口服液的質(zhì)量控制指標(biāo)成分主要為水溶性成分梔子苷［1］、木蘭脂素［13］、黃芩苷［14］，此3 種指標(biāo)成分不能全面地反映鼻竇炎口服液的質(zhì)量。為了更加全面有效的對(duì)鼻竇炎口服液進(jìn)行質(zhì)量控制，需要對(duì)該方中揮發(fā)油成分藥材歸屬和有效成分含量進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

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