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    精子體外處理方法與技巧

    2013-12-04 12:25:08周世敏李艷萍鄔伶仟劉冬娥劉能輝姚仲元陳仙花張葉青
    中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2013年22期
    關(guān)鍵詞:體外受精不育癥完整性

    周世敏 李艷萍 鄔伶仟 劉冬娥 劉能輝 姚仲元 陳仙花 張葉青

    本文將對本院2010年1月1日-2012年9月30日近三年來進行體外受精-胚胎移植治療的夫婦進行臨床研究,從而探討精液體外處理方法及技巧,為臨床提高體外受精-胚胎移植治療不孕不育癥患者療效以及優(yōu)質(zhì)胚胎率提供可靠依據(jù),現(xiàn)報告結(jié)果如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 本文將對本院2010年1月1日-2012年9月30日近三年來進行體外受精-胚胎移植治療的夫婦進行臨床研究,其中2010年1402例,男平均(31.4±0.5)歲,女平均(29.7±0.8)歲,不孕不育癥平均病程(5.6±0.5)年;2011 年 1667 例,男平均(31.9±0.5)歲,女平均(30.3±0.7)歲,不孕不育癥平均病程(5.1±0.8)年;2012年1321例,男平均(32.1±0.6)歲,女平均(30.5±0.8)歲,不孕不育癥平均病程(5.2±0.6)年。2010年IVF-ET取卵周期數(shù)為1402例、2011年1667例、2012年(1-9月)1321例。

    1.2 方法 對2010年1月1日-2012年9月30日近三年來進行體外受精-胚胎移植治療的夫婦臨床資料進行回顧性分析,2010年取卵周期數(shù)為1402例實施部分上游法及部分密度梯度離心法對精液進行處理;2011年取卵周期數(shù)為1667例實施大部分梯度密度離心法+上游法以及少部分上游法對精液進行處理;2012年取卵周期數(shù)為1321例實施全部梯度密度離心+上游法對精液進行處理。觀察并記錄各年份患者受精情況,進行統(tǒng)計學(xué)分析,得出結(jié)論。

    1.2.1 采樣處理 女方給予常規(guī)促排卵方案,于體內(nèi)卵泡發(fā)育成熟后對其肌肉注射人絨毛膜促性腺激素(即hCG)[1],劑量為5000或10 000 IU,32~36 h后,經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下對女方進行穿刺取卵[2]。男方于女方取卵當日通過手淫法取精液[3],取精液前男方禁欲3~7 d[4],將精液收集在無菌塑料杯中液化后待用。

    1.2.2 上游法[5]取將液化后的精液,加入2~3 ml Vitorlife公司生產(chǎn)的HTF洗滌液進行混合,之后以每分鐘2000轉(zhuǎn)速度離心3~5 min,棄上清液后加入試管底部并在上層加入2 ml培養(yǎng)液,經(jīng)濃度為5%、37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中上游30~40 min,之后取上清液離心3~5 min,棄上清液后待用。

    1.2.3 密度梯度離心+上游序貫法[6]對精液進行處理,選用Vitorlife公司生產(chǎn)的Isolate梯度分離液,在15 ml圓錐離心管首先將濃度為90%、劑量為1 ml的Isolate分離液注入,之后在其上方加入濃度為45%、劑量為1 ml的Isolate分離液,最上層也輕輕緩慢加入液化的精液,離心速度為每分鐘2000轉(zhuǎn)離心10 min棄上清,用劑量為2 ml的HTF洗滌液把上述所得沉淀物輕輕混勻,離心速度為每分鐘2000轉(zhuǎn)離心3~5 min棄上清,下懸液加入試管底部,在上面加入2 ml培養(yǎng)液,于濃度為5%、37 ℃二氧化碳培養(yǎng)箱中上游30~40 min將其吸出,每分鐘2000轉(zhuǎn)速度離心3~5 min,棄上清后待用。

    1.2.4 受精措施 患者取卵完成后,對其進行黃體酮肌肉注射以便支持黃體[7],于胚胎移植完成2周后進行尿液試驗,結(jié)果為人絨毛膜促性腺激素呈陽性,于4周后對患者進行B超臨床醫(yī)學(xué)影像觀察,若患者體內(nèi)出現(xiàn)妊娠囊及胎心搏動,則可確診為臨床妊娠[8]。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計量資料用(±s)表示,比較采用t檢驗;計數(shù)資料采用 字2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    體外受精-胚胎移植治療結(jié)果分析,見表1。由表1可知,本院自2010年-2012年,臨床妊娠成功率呈現(xiàn)出逐年上升趨勢,結(jié)果比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 近三年內(nèi)體外受精-胚胎移植治療不孕不育癥結(jié)果分析

    3 討論

    目前臨床上常借助輔助生殖技術(shù)對不孕不育癥患者進行治療,常規(guī)治療方法為體外受精-胚胎移植(簡稱IVF-ET)[9]。臨床研究表明,對不孕不育癥患者進行IVF-ET技術(shù)治療時,由于實施卵漿內(nèi)單精子注射(簡稱ICSI)方式,精子將繞過自然選擇過程,直接被注入卵母細胞內(nèi),因此部分發(fā)生遺傳物質(zhì)受損的精子有可能直接注入卵子內(nèi)部,從而對胚胎發(fā)育造成影響,嚴重時可導(dǎo)致患者孕育后代時出現(xiàn)遺傳風險,造成嚴重后果[10]。

    應(yīng)用精液體外處理注意事項:在取精前數(shù)月,男方應(yīng)戒煙酒,生活有規(guī)律,如有生殖系統(tǒng)炎癥需積極治療。進入治療周期后,根據(jù)醫(yī)囑在估計取卵前3~7 d,其丈夫需排精一次,然后禁欲,直至取卵日,精液在體內(nèi)存留時間過長或過短會影響精子質(zhì)量。首先用清水洗凈雙手,陰莖,外陰等,然后手淫法留取精液時所用小杯為無菌消毒,留取時不要觸摸杯緣及杯內(nèi)。取精后對其進行液化后應(yīng)盡快使用,其原因為液化時間過長,精子核易出現(xiàn)空泡現(xiàn)象,影響精子質(zhì)量,精子核空泡的形狀和數(shù)目對囊胚的發(fā)育有負面影響,精子頭部的空泡可能與移植后的流產(chǎn)率相關(guān)。由于人精子頂體部含有大量不飽和脂肪酸,并且缺乏抗氧化機制,處理精液時較大的離心力可增加精子產(chǎn)生過多氧自由基(ROS)而損傷精子功能,特別是促使精子的DNA氧化變性,因此在對精液行離心時應(yīng)盡量減少離心時間及轉(zhuǎn)數(shù),從而盡量避免精液中精子損傷情況發(fā)生。

    在本次研究過程中對精液應(yīng)用洗滌液進行洗滌目的為:(1)去除精液中的前列腺素及其他可引起子宮痙攣及疼痛的物質(zhì)。(2)去除精液中可引起感染及其他副作用的細菌和化學(xué)物質(zhì)。(3)增加了精子的獲能,從而增強其受孕能力。(4)有可能去除影響精子功能的抗體。

    Pereoll法和Isolate法是臨床常用的精液體外梯度密度離心處理方法,但Isolate法處理效果優(yōu)于Pereoll法,其原因為:(1)Percoll中含有聚乙烯吡咯烷酮在離心過程中可加速精子膜過氧化反應(yīng)導(dǎo)致DNA完好性受損;(2)Isolate精子分離液是一種非連續(xù)液態(tài)過濾膜,為二氧化硅以共價鍵形式交錯聯(lián)結(jié)于Hepes-HTF,是經(jīng)特殊處理的懸浮膠體密度梯度介質(zhì),可有效減少細胞污染,與待分離精子不發(fā)生反應(yīng),不易使頂體膜蛋白失活[3],具有保護精子DNA結(jié)構(gòu)免受損傷作用,另一方面可能是Isolate所含有的二氧化硅膠體兼作支持體與分子篩的作用,對離心力有緩沖作用,使對精子潛在的氧化損傷降至最低。

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