氣相色譜法測(cè)定聯(lián)苯乙酸原料藥中5種有機(jī)溶劑殘留量

曹翠，盧潔，閻君，林子琦（.吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司，長(zhǎng)春300；.長(zhǎng)春師范學(xué)院初等教育學(xué)院，長(zhǎng)春 3003）

聯(lián)苯乙酸（Felbinac）是一種新型的非甾體抗炎藥，也是合成聯(lián)苯乙酸乙酯、聯(lián)苯乙酰吡啶等中間體的原料[1]。其是非甾體抗炎藥芬布芬的活性代謝物，具有很強(qiáng)的抗炎、鎮(zhèn)痛作用和良好的透皮性能；用于治療關(guān)節(jié)炎和肌肉疼痛，具有速效和安全等特點(diǎn)，如3%聯(lián)苯乙酸凝膠軟膏外用對(duì)于變形性關(guān)節(jié)痛病、肩周炎、腱鞘炎、肌肉痛及外傷后腫脹等疾病具有良好的鎮(zhèn)痛和消炎作用[2]。在本公司聯(lián)苯乙酸原料藥的合成工藝中使用了甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和嗎啉等5種有機(jī)溶劑，2010年版《中國(guó)藥典》（二部）對(duì)上述溶劑均規(guī)定了殘留限度[3]。為此，本文建立了直接進(jìn)樣法[4]測(cè)定聯(lián)苯乙酸原料藥中5種有機(jī)溶劑殘留量的氣相色譜法，結(jié)果表明建立的方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，可滿足聯(lián)苯乙酸原料藥中有機(jī)溶劑檢測(cè)的要求。

1 材料

GC-2010氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）、GC工作站（日本島津公司）；GHL-300氫氣發(fā)生器（北京匯佳精儀工貿(mào)有限公司）；雙量程分析天平[梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司]。

聯(lián)苯乙酸原料藥（吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司藥物研究室合成，批號(hào)：20120501、20120502、20120503，純度：99.2%、99.6%、99.5%）；甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均為分析純（含量：均≥99.0%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-624毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm×1.5 μm），6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液；柱溫：程序升溫，初始溫度40℃，以4℃/min升溫至100℃，再以20℃/min升溫至180℃，保持2 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；FID檢測(cè)器溫度：250℃；分流比：30∶1；載氣：高純氮?dú)猓粔毫Γ?00 kPa；進(jìn)樣量：2 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液。精密稱取甲醇0.6800 g、乙酸乙酯0.4832 g、冰醋酸0.2853 g、嗎啉0.4081 g，分別置于50 ml量瓶中；另取三氯甲烷0.1624 g，置于25 ml量瓶中。分別加入適量DMF溶解并稀釋至刻度，充分搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密移取甲醇貯備液1.0 ml、乙酸乙酯貯備液2.5 ml、三氯甲烷貯備液0.5 ml、冰醋酸貯備液4.5 ml和嗎啉貯備液2 ml，置于同一50 ml量瓶中，以DMF稀釋至刻度，充分搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液。精密稱取聯(lián)苯乙酸原料藥1.0 g，置于10ml量瓶中，加DMF溶解并稀釋至刻度，充分搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

移取混合對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和嗎啉的保留時(shí)間分別為1.296、3.689、3.962、8.670和9.872 min，各相鄰色譜峰的分離度除乙酸乙酯和三氯甲烷為1.1外，其余均大于1.5，理論板數(shù)均不低于10000，系統(tǒng)適用性較好，詳見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；1.甲醇；2.乙酸乙酯；3.三氯甲烷；4.冰醋酸；5.嗎啉Fig 1 GC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.methanol；2.acetic ether；3.chloroform；4.glacial acetic acid；5.morpholine

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密移取上述對(duì)照品貯備液適量，置于同一50 ml量瓶中，加入DMF溶解并稀釋至刻度，各對(duì)照品的取樣量見(jiàn)表1（表中溶劑均指其對(duì)照品貯備液）。

表1 線性試驗(yàn)中各對(duì)照品溶液的制備Tab 1 Preparation of substance control in linear tests

取表1中制備好的對(duì)照品溶液Ⅰ～Ⅴ各2 μl進(jìn)樣，測(cè)得峰面積，分別以峰面積（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，各溶劑的線性方程及相關(guān)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各溶劑線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Linear ranges of solvents

2.5 精密度試驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液2 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算各混合對(duì)照品溶液中甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉的峰面積的RSD分別為0.6%、4.9%、4.3%、4.3%、4.6%（n＝5）。結(jié)果表明，各溶劑峰面積的RSD均小于5%（n＝5），精密度較好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)的樣品，分別制備成1.0 g/ml的供試品溶液6份，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算殘留溶劑的含量。結(jié)果甲醇含量的RSD＝1.6%（n＝6），其他溶劑均未檢出，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 檢測(cè)限和定量限試驗(yàn)

取各對(duì)照品貯備液，逐級(jí)進(jìn)行稀釋進(jìn)樣，記錄色譜圖。以信噪比為3計(jì)算檢測(cè)限，以信噪比為10計(jì)算定量限。結(jié)果，甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉的檢測(cè)限分別為0.816、1.598、0.773、12.855、1.712 μg/ml，定量限分別為 2.72、5.25、3.09、36.73、5.71 μg/ml。

2.8 回收率考察

精密稱取樣品1.0 g，置于10 ml量瓶中，精密移取對(duì)照品貯備液，制得相當(dāng)于各溶劑限度80%、100%、120%的溶液。根據(jù)峰面積計(jì)算回收率，測(cè)得5種溶劑的平均回收率為97.5%～100.2%，RSD為0.25%～1.39%，均小于5%（n＝3），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 3Results of recovery tests（n＝3）

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液，于室溫下放置0、2、4、8、12 h后分別進(jìn)樣，結(jié)果甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、嗎啉在12 h內(nèi)測(cè)得的峰面積的RSD分別為3.8%、2.2%、3.4%、1.5%、0.6%（n＝5），表明本溶液在室溫放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 樣品中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定

量取混合對(duì)照品溶液和3批供試品溶液各2 μl進(jìn)樣，記錄氣相色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中殘留溶劑的含量。結(jié)果表明，樣品中只檢出甲醇，且殘留量均＜0.3%，其他溶劑均未檢出。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

氣相色譜的常用溶劑有水、乙醇、DMF、二甲基亞砜（DMSO）等，因聯(lián)苯乙酸不溶于水，因此選擇DMF作為溶劑。結(jié)果證明，DMF不但可以很好地溶解聯(lián)苯乙酸，且對(duì)5種待測(cè)溶劑無(wú)干擾。

3.2 色譜柱的選擇

考慮到冰醋酸的殘留，本試驗(yàn)初期選擇了極性柱HPFFAP[5]，但由于甲醇和乙酸乙酯的極性相近，經(jīng)改變柱溫、分流比、載氣流速等條件仍很難分開(kāi)。按2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅧP[3]方法，采用氣相色譜法分離甲醇和乙酸乙酯，在極性色譜柱中二者的保留時(shí)間也僅相差0.2 min。因此嘗試用中等極性的色譜柱Agilent DB-624[6]，結(jié)果在本文設(shè)定的色譜條件下，采用該色譜柱能將5種有機(jī)溶劑較好地分離。

3.3 5種殘留溶劑限度的確定

甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和嗎啉均是生產(chǎn)過(guò)程中引入的對(duì)人體有害的有機(jī)溶劑?！吨袊?guó)藥典》[3]規(guī)定，甲醇、三氯甲烷均為第二類毒性試劑，其限度分別為0.3%和0.06%；乙酸乙酯、冰醋酸均為第三類毒性試劑，其限度為0.5%；而嗎啉尚未收入《中國(guó)藥典》中，故本試驗(yàn)參考文獻(xiàn)[4]中甲醇的限度，將其限度定為0.3%。

[1]陳芬兒.有機(jī)藥物合成法[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1999：365-367.

[2]沙靜姝.解熱消炎鎮(zhèn)痛藥研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)藥合成藥、生化藥、制劑分冊(cè)，1989，10（3）：143.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：63.

[4]李子靜.頂空氣相色譜法測(cè)定托伐普坦原料藥中的4種殘留溶劑[J].中國(guó)藥房，2012，23（41）：3916.

[5]范毅穎，于海龍，崔振輝.頭孢唑肟鈉殘留溶劑的氣相色譜測(cè)定[J].黑龍江醫(yī)藥，2007，20（2）：105.

[6]陳汝紅，楊春巧，張軼華.頂空氣相色譜法檢測(cè)芐星青霉素原料藥中的5種殘留溶劑[J].中國(guó)藥房，2012，23（45）：4287.