• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠脾T細(xì)胞及血清細(xì)胞因子的影響①

    2013-11-27 11:15:50陳育民陳曉潔劉曉霞王雪玲陳雪皎河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院邯鄲056029
    中國(guó)免疫學(xué)雜志 2013年11期
    關(guān)鍵詞:荷瘤亞群細(xì)胞因子

    陳育民 陳曉潔 劉曉霞 王雪玲 陳雪皎 (河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院,邯鄲056029)

    惡性腫瘤是危害人類(lèi)健康和生命的嚴(yán)重疾病之一。目前,化學(xué)治療是腫瘤治療中必不可少的手段之一,但單純化療常引起免疫抑制,導(dǎo)致惡性反復(fù)感染,機(jī)體衰弱,時(shí)常出現(xiàn)各種不同程度的毒副反應(yīng)、預(yù)后不良而加速患者的死亡。環(huán)磷酰胺(CTX)作為臨床常用的化療藥物,對(duì)免疫系統(tǒng)有抑制作用,T細(xì)胞也在被抑制之列,而T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫是抗腫瘤的主力[1],故化療后腫瘤患者的抗腫瘤能力降低,無(wú)法自我徹底清除體內(nèi)殘存的腫瘤細(xì)胞,使其應(yīng)用受到一定的限制。因此,尋找能夠逆轉(zhuǎn)化療對(duì)T細(xì)胞抑制的藥物,將有助于臨床上更好開(kāi)展化療治療腫瘤。

    八珍湯源自《正體類(lèi)要》,是四君子湯和四物湯的復(fù)方。四君子湯能健脾益氣,四物湯可補(bǔ)血養(yǎng)血,八珍湯能匯兩方之功,奏兩方之效,為氣血雙補(bǔ)的經(jīng)典方。臨床上常用于內(nèi)科、婦科上的病后失調(diào)、久病失治、失血過(guò)多等慢性消耗性疾病的治療。近年來(lái),中藥日益受到重視,八珍湯作為中國(guó)古方的經(jīng)典方,其對(duì)免疫系統(tǒng)的藥理作用近年來(lái)已有報(bào)道,但對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的影響還未見(jiàn)報(bào)道。故本研究探討了八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞增殖、T細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子的影響,為臨床上輔助治療腫瘤提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 動(dòng)物及瘤株 健康昆明小鼠,雌雄各半,體重18~22 g,由河北工程大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。S180腫瘤細(xì)胞由河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院科研中心饋贈(zèng)。

    1.1.2 藥物 八珍湯(一副)包括:當(dāng)歸10 g,川芎5 g,白芍 8 g,甘草 5 g,熟地黃 15 g,人參 3 g,白術(shù)10 g,茯苓8 g。均購(gòu)自邯鄲市中醫(yī)院中藥房,經(jīng)河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理室鑒定。將所有藥材水中浸泡0.5小時(shí),加入大約為藥材體積10倍的水,煮沸1小時(shí),濾出藥液;再加5倍體積的水,煮沸0.5小時(shí),濾出藥液。兩次藥液合并,水浴蒸發(fā)至終濃度為2 g生藥/ml的藥液。4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.1.3 試劑 四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、RPMI1640培養(yǎng)基、ConA為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品;PE-Cy7-抗小鼠 CD3、FITC-抗小鼠 CD4、PE-抗小鼠CD8均為eBioscience公司產(chǎn)品;小鼠IL-2、IFN-γ ELISA試劑盒為伊萊瑞特生物科技有限公司產(chǎn)品;胎牛血清為杭州四季青生物材料有限公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    1.2.1 動(dòng)物模型的建立、分組及給藥 取腹腔內(nèi)傳代7天的肉瘤S180小鼠,脫臼處死小鼠,在無(wú)菌條件下抽取腹腔內(nèi)瘤細(xì)胞,并以生理鹽水洗滌3次,2 500 r/min離心3分鐘,棄上清液,用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整腫瘤細(xì)胞濃度為5×106ml-1,接種于小鼠右腋窩皮下(0.2 ml/只)。接種24小時(shí)后隨機(jī)分為3組,每組10只,分別為模型組、CTX組、八珍湯+CTX組。另取10只正常小鼠作為正常對(duì)照組。正常對(duì)照組和模型組腹腔注射生理鹽水0.1 ml/(10 g·d),連續(xù)3天,CTX組和八珍湯+CTX組腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)0.1 ml/(10 g·d),連續(xù)3天。自第4天始,正常對(duì)照組、模型組和CTX組用生理鹽水0.2 ml/(10 g·d)灌胃,八珍湯+CTX組用八珍湯0.2 ml/(10 g·d)灌胃,連續(xù)10天。末次給藥后2小時(shí)進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。

    1.2.2 MTT法檢測(cè)八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞增殖的影響 處死小鼠,無(wú)菌取脾,制備脾細(xì)胞懸液,臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)活細(xì)胞在95%以上。用完全RPMI1640培養(yǎng)液將脾細(xì)胞懸液調(diào)配成細(xì)胞濃度2×106ml-1的單細(xì)胞懸液。取已制備的脾細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中,100 μl/孔,每個(gè)樣本做6個(gè)孔。其中3孔加ConA液(0.1 mg/ml)100 μl,使其終濃度為5 μg/ml,另3孔作為對(duì)照。置 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)。于實(shí)驗(yàn)終止前每孔加入5 g/L MTT 20 μl,振蕩器上振蕩10分鐘,繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入100 μl DMSO,振蕩10分鐘,使紫色結(jié)晶完全溶解。用酶標(biāo)儀于570 nm波長(zhǎng)測(cè)定A值。細(xì)胞增殖率=(實(shí)驗(yàn)組平均A值 /對(duì)照組平均A值)×100%。

    1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群的影響 取100 μl已制備的脾淋巴細(xì)胞懸液于EP管中,4℃、1 500 r/min離心5分鐘,加入冷 PBS 1 ml,離心,棄上清,加冷凍 PBS 100 μl,并按說(shuō)明加入 PE-Cy7-抗小鼠 CD3、FITC-抗小鼠 CD4、PE-抗小鼠 CD8,4℃避光孵育30分鐘,加入 PBS1 ml,離心,棄上清,加入 500 μl PBS,流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

    1.2.4 ELISA檢測(cè)八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠血清IFN-γ、IL-2的影響 末次給藥后2小時(shí),各組小鼠球后靜脈叢采血,每只取血0.8~1 ml,分離血清,并嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)本的OD值減去空白孔的OD值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),以平滑曲線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn),通過(guò)標(biāo)本的OD值在曲線上查出其對(duì)應(yīng)濃度。IL-2/IFN-γ(μg/L)=標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的濃度×稀釋倍數(shù)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS11.5軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果以±s表示,兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn),多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞增殖的影響

    用MTT法檢測(cè)各組T細(xì)胞經(jīng)ConA刺激72小時(shí)后的增殖能力,由圖1可見(jiàn)各組荷瘤小鼠的T細(xì)胞增殖能力顯著低于正常對(duì)照組(P<0.01),CTX組T細(xì)胞增殖能力明顯低于模型組(P<0.01),八珍湯+CTX組T細(xì)胞增殖能力明顯高于CTX組(P<0.01),與模型組相比沒(méi)有顯著性差異,但有增高趨勢(shì)(P>0.05)。

    表1 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群的影響(±s,%)Tab.1 Effect of bazhen decoction on subpopulations of T lymphocytes in tumor-bearing mice after chemotherapy(±s,%)

    表1 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群的影響(±s,%)Tab.1 Effect of bazhen decoction on subpopulations of T lymphocytes in tumor-bearing mice after chemotherapy(±s,%)

    Note:Compared with normal control group,1)P <0.01;compared with model group,2)P <0.01;compared with model group,3)P <0.05;compared with CTX group,4)P <0.01.

    7±4.29 1.59±5.06 Model 10 40.21±4.711) 23.89±6.321) 12.51±3.651) 1.82±3.271)CTX 10 24.26±7.281)2) 15.60±4.931)2) 7.46±3.011)2) 1.92±2.351)Bazhen decoction+CTX 10 34.93±4.241)3)4) 19.46±5.041)3)4) 10.48±4.841)3)4) 1.79±4.831)CD4/CD8 Normal control 10 47.43±7.08 28.25±3.12 17.1 Groups n CD3+T CD3+CD4+T CD3+CD8+T

    圖1 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞增殖能力的影響Fig.1 Effect of Bazhen decottion on proliferation of T lymphocytes in tumor-bearing mice after chemotherapy

    2.2 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞亞群的影響由表1可見(jiàn),各荷瘤小鼠組的T細(xì)胞亞群明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01),而CD4/CD8比值明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。CTX組的T細(xì)胞亞群與模型組相比顯著降低(P<0.01)。八珍湯+CTX組的T細(xì)胞亞群明顯高于CTX組(P<0.01),但仍低于模型組(P<0.05)。各荷瘤小鼠組CD4/CD8比值均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

    2.3 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠血清IFN-γ、IL-2的影響 ELISA測(cè)得各組小鼠血清細(xì)胞因子的結(jié)果如表2所示:各荷瘤小鼠組血清中IFN-γ、IL-2的含量明顯低于正常對(duì)照組(P<0.01),CTX組荷瘤小鼠血清中 IFN-γ、IL-2含量明顯低于模型組(P<0.01),八珍湯+CTX組小鼠血清IFN-γ、IL-2含量明顯高于CTX組(P<0.01),而與模型組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

    表2 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠血清IFN-γ、IL-2的影響(μg/L,±s)Tab.2 Effect of Bazhen decoction on serum levels of TFN-γ and IL-2 in tumor-bearing mice after chemotherapy(μg/L,±s)

    表2 八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠血清IFN-γ、IL-2的影響(μg/L,±s)Tab.2 Effect of Bazhen decoction on serum levels of TFN-γ and IL-2 in tumor-bearing mice after chemotherapy(μg/L,±s)

    Note:Compared with normal control group,1)P <0.01;compared with model group,2)P <0.01;compared with CTX group,3)P<0.01.

    Groups n IFN-γIL-2 Normal control 10 10.276±6.953 9.841±2.618 Model 10 7.702±7.0161) 6.914±3.9081)CTX 10 4.260±3.5621)2) 4.012 1±5.2831)2)Bazhen decoction+CTX 10 7.329±3.7081)3) 7.025±2.9671)3)

    3 討論

    腫瘤是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病,目前除手術(shù)外,化學(xué)療法是治療腫瘤的主要手段,但它在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時(shí),也會(huì)殺傷正常細(xì)胞,對(duì)機(jī)體的免疫功能全面抑制,使機(jī)體免疫功能低下。而T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能低下在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。故機(jī)體T細(xì)胞的狀況能夠反映機(jī)體抗腫瘤的能力。因此如何提高化療后機(jī)體T細(xì)胞功能是腫瘤治療的一個(gè)重要內(nèi)容。

    國(guó)內(nèi)已將中草藥用于防治化療毒副作用方面[2-4]。八珍湯源自《正體類(lèi)要》,是四君子湯和四物湯的復(fù)方。四君子湯能健脾益氣,四物湯可補(bǔ)血養(yǎng)血,八珍湯能匯兩方之功,奏兩方之效,為氣血雙補(bǔ)的經(jīng)典方。臨床上常用于內(nèi)科、婦科上的病后失調(diào)、久病失治、失血過(guò)多等慢性消耗性疾病的治療。本課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)八珍湯能夠解除TGF-β1對(duì)T細(xì)胞增殖和活化的抑制作用[5]。本文從下述指標(biāo)觀察了八珍湯對(duì)化療后荷瘤小鼠T細(xì)胞及細(xì)胞因子的影響。

    在體外研究中,T細(xì)胞經(jīng)特異性抗原或非特異性抗原,如ConA等的誘導(dǎo),會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化增殖。因此,常將T細(xì)胞的增殖反應(yīng)作為評(píng)價(jià)T細(xì)胞功能,反映機(jī)體免疫狀況的指標(biāo)[6]。T細(xì)胞按表面CD分子的不同分為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞,參與抗腫瘤免疫的主要是CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫,故T細(xì)胞亞群是反映機(jī)體抗腫瘤能力的一個(gè)常用指標(biāo)。IFN-γ是活化的T細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有多潛能的細(xì)胞因子,對(duì)免疫系統(tǒng)具有重要的調(diào)節(jié)作用,它可以激活巨噬細(xì)胞,促進(jìn)MHC分子表達(dá)和抗原提呈,誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化,抑制Th2細(xì)胞分化,從而促進(jìn)細(xì)胞免疫功能[7]。IL-2主要由活化的細(xì)胞產(chǎn)生,是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能最主要的細(xì)胞因子之一。它能刺激T細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化,激活NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,促進(jìn)CTL細(xì)胞的功能。故IFN-γ和IL-2不僅能反映T細(xì)胞的功能,而且在一定程度上也能反映機(jī)體的免疫水平,在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用[8]。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:八珍湯能夠促進(jìn)T細(xì)胞增殖,提高CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比例,特別是CD8+T細(xì)胞比例,促進(jìn)T細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-2。故可知八珍湯可促進(jìn)T細(xì)胞功能,提高機(jī)體細(xì)胞免疫能力。

    因此,本研究為臨床上將八珍湯用于改善化療所致機(jī)體免疫功能低下提供了理論依據(jù)。但有關(guān)八珍湯的給藥時(shí)間、用藥時(shí)間長(zhǎng)短等問(wèn)題需要進(jìn)一步探討。

    1 金伯泉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008;214-215.

    2 胡志明,邱錫謙,曾玉芬.扶正排毒通腸湯治療惡性腫瘤化療毒副作用60例[J].江西中醫(yī)藥,2011;42(338):25-26.

    3 古紅莉.參麥注射液減輕惡性腫瘤化療毒副作用60例臨床觀察[J].新中醫(yī),2008;40(10):20-21.

    4 邵青偉,葛 熙.參芪扶正液預(yù)防癌癥化療所致毒副作用的觀察與護(hù)理[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2010;14(10):17-18.

    5 劉曉霞,陳劍華,陳育民et al.八珍湯對(duì)TGF-β1抑制的T淋巴細(xì)胞增殖及其活化影響[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2009;25(11):1053-1055.

    6 呂世靜.臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)[M].第2版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010;165-166

    7 金伯泉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008;60-61.

    8 金伯泉.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M].第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008;252-253.

    猜你喜歡
    荷瘤亞群細(xì)胞因子
    TB-IGRA、T淋巴細(xì)胞亞群與結(jié)核免疫的研究進(jìn)展
    甲狀腺切除術(shù)后T淋巴細(xì)胞亞群的變化與術(shù)后感染的相關(guān)性
    抗GD2抗體聯(lián)合細(xì)胞因子在高危NB治療中的研究進(jìn)展
    除痰解毒方聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺腺癌H1975荷瘤小鼠Twist、Fibronectin表達(dá)的影響
    綠蘿花及其多糖對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤免疫相關(guān)因子的影響
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:35
    獨(dú)角蓮軟膠囊抗人肝癌Hep-2荷瘤裸鼠移植瘤作用及對(duì)p53表達(dá)的影響
    石見(jiàn)穿多糖對(duì)H22荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用
    急性心肌梗死病人細(xì)胞因子表達(dá)及臨床意義
    外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)在惡性腫瘤中的價(jià)值
    細(xì)胞因子在慢性腎缺血與腎小管-間質(zhì)纖維化過(guò)程中的作用
    亚洲av第一区精品v没综合| 久久热在线av| 人人妻人人澡人人看| bbb黄色大片| 国产一区二区在线观看av| 久久久久视频综合| 狂野欧美激情性xxxx| 大码成人一级视频| 免费av中文字幕在线| 在线av久久热| 日韩中文字幕视频在线看片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久国产精品男人的天堂亚洲| videosex国产| 极品人妻少妇av视频| 黄色a级毛片大全视频| 不卡av一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 成人手机av| 大片电影免费在线观看免费| 久久国产精品影院| 免费黄频网站在线观看国产| 久久婷婷成人综合色麻豆| 夫妻午夜视频| 青青草视频在线视频观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 男女无遮挡免费网站观看| 女性被躁到高潮视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 午夜日韩欧美国产| 女性被躁到高潮视频| 国产亚洲一区二区精品| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一进一出抽搐动态| 丰满少妇做爰视频| 美女午夜性视频免费| 免费观看人在逋| aaaaa片日本免费| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美日韩黄片免| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 麻豆成人av在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 中文欧美无线码| 电影成人av| cao死你这个sao货| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 水蜜桃什么品种好| 在线观看免费视频日本深夜| 国产深夜福利视频在线观看| 国产不卡一卡二| 国产在线一区二区三区精| 黄色 视频免费看| 久久久久久久国产电影| 美女午夜性视频免费| 99re6热这里在线精品视频| 天天添夜夜摸| 亚洲av国产av综合av卡| 后天国语完整版免费观看| 欧美精品一区二区大全| 久久性视频一级片| 国产黄频视频在线观看| 欧美乱妇无乱码| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美精品av麻豆av| xxxhd国产人妻xxx| 成年人午夜在线观看视频| 国产精品久久久久久精品古装| 少妇粗大呻吟视频| 老司机午夜福利在线观看视频 | 淫妇啪啪啪对白视频| av不卡在线播放| 自线自在国产av| 精品视频人人做人人爽| 叶爱在线成人免费视频播放| 99热国产这里只有精品6| 久久影院123| 国产精品99久久99久久久不卡| 丁香六月天网| 大陆偷拍与自拍| 久久精品91无色码中文字幕| 99久久国产精品久久久| av天堂久久9| 久久久久网色| 波多野结衣av一区二区av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产人伦9x9x在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 老熟女久久久| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲人成伊人成综合网2020| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 老司机午夜福利在线观看视频 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 十八禁高潮呻吟视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | av天堂在线播放| 人妻 亚洲 视频| 一夜夜www| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 在线观看免费视频网站a站| 极品教师在线免费播放| 国产成人影院久久av| 亚洲熟女精品中文字幕| 久9热在线精品视频| 午夜成年电影在线免费观看| 国产在视频线精品| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品福利永久在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久久久网色| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲精品一二三| 国产精品二区激情视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 十八禁人妻一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 一级片'在线观看视频| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲欧美激情在线| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产免费现黄频在线看| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲av国产av综合av卡| av福利片在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产高清国产精品国产三级| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品熟女久久久久浪| 国产成人欧美| 三上悠亚av全集在线观看| 国产高清激情床上av| 亚洲九九香蕉| 欧美在线一区亚洲| 免费在线观看黄色视频的| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲男人天堂网一区| 国产一区二区激情短视频| 91av网站免费观看| 一区在线观看完整版| 国产男女内射视频| 高清欧美精品videossex| 老司机深夜福利视频在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲专区国产一区二区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 中文亚洲av片在线观看爽 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产伦人伦偷精品视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品高清国产在线一区| 中文亚洲av片在线观看爽 | av在线播放免费不卡| 日韩欧美三级三区| 黄片大片在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 一夜夜www| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| xxxhd国产人妻xxx| 在线观看66精品国产| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 热re99久久国产66热| www.自偷自拍.com| 国产精品.久久久| 欧美精品一区二区免费开放| 在线av久久热| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲专区国产一区二区| 久久精品国产a三级三级三级| 国产日韩欧美亚洲二区| 成年动漫av网址| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 香蕉国产在线看| www.精华液| 色播在线永久视频| 在线观看66精品国产| 精品人妻1区二区| 亚洲精品在线观看二区| av免费在线观看网站| 亚洲伊人色综图| 国产精品二区激情视频| 久久中文字幕人妻熟女| 成人手机av| 大码成人一级视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲精品中文字幕在线视频| 男女午夜视频在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 天堂中文最新版在线下载| 少妇的丰满在线观看| 成年版毛片免费区| 欧美午夜高清在线| 一区二区三区精品91| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲专区字幕在线| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品自拍成人| 久久久久久久久免费视频了| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 操出白浆在线播放| 在线观看免费高清a一片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99国产综合亚洲精品| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲精品在线美女| 国产午夜精品久久久久久| 免费在线观看黄色视频的| 精品高清国产在线一区| 咕卡用的链子| 极品少妇高潮喷水抽搐| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 在线看a的网站| 免费观看a级毛片全部| 午夜激情久久久久久久| 精品少妇内射三级| 激情视频va一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久欧美国产精品| 久久免费观看电影| 大片电影免费在线观看免费| 免费日韩欧美在线观看| 日韩一区二区三区影片| 欧美黄色片欧美黄色片| 99精品久久久久人妻精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 精品人妻在线不人妻| 亚洲精品美女久久av网站| cao死你这个sao货| 精品久久久久久电影网| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜视频精品福利| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 91九色精品人成在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 后天国语完整版免费观看| av一本久久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品成人av观看孕妇| 另类亚洲欧美激情| 欧美日韩成人在线一区二区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 99国产精品一区二区三区| 99re在线观看精品视频| 在线看a的网站| 99久久国产精品久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲全国av大片| 国产精品九九99| 日本黄色日本黄色录像| 成人手机av| 黄色a级毛片大全视频| av免费在线观看网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 搡老熟女国产l中国老女人| 动漫黄色视频在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成人手机av| 亚洲精品国产色婷婷电影| 女性被躁到高潮视频| 国产淫语在线视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 99久久精品国产亚洲精品| 精品少妇内射三级| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成人免费观看视频高清| 久久亚洲真实| 在线播放国产精品三级| 成年人午夜在线观看视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品一二三| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久人妻av系列| 精品欧美一区二区三区在线| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲美女黄片视频| 久久久国产精品麻豆| 性少妇av在线| a级毛片黄视频| 日本黄色视频三级网站网址 | 欧美日韩成人在线一区二区| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲精品美女久久av网站| 99久久精品国产亚洲精品| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品乱久久久久久| 久久久精品区二区三区| 色94色欧美一区二区| 国产精品久久电影中文字幕 | 精品第一国产精品| 亚洲 国产 在线| 国产成人精品久久二区二区免费| 一个人免费看片子| 久久性视频一级片| 亚洲熟妇熟女久久| 在线av久久热| 麻豆乱淫一区二区| 十八禁网站免费在线| 在线观看一区二区三区激情| 成人黄色视频免费在线看| 少妇 在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲人成电影观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产男靠女视频免费网站| 成人手机av| 色播在线永久视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 桃花免费在线播放| 曰老女人黄片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 在线观看舔阴道视频| 成人国产一区最新在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 国产成人av激情在线播放| 国产xxxxx性猛交| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 在线播放国产精品三级| 一边摸一边做爽爽视频免费| 宅男免费午夜| 极品人妻少妇av视频| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成年版毛片免费区| 亚洲,欧美精品.| 午夜福利在线观看吧| 黄片播放在线免费| 免费在线观看影片大全网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日韩有码中文字幕| 岛国在线观看网站| 久久久精品免费免费高清| 日韩大码丰满熟妇| 国产免费视频播放在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产免费现黄频在线看| 国产区一区二久久| 下体分泌物呈黄色| 国产精品国产av在线观看| 91国产中文字幕| 国精品久久久久久国模美| 亚洲美女黄片视频| 久久免费观看电影| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久久久久久久久久大奶| 啦啦啦在线免费观看视频4| 精品一区二区三卡| 91国产中文字幕| 欧美人与性动交α欧美软件| 精品人妻在线不人妻| 99久久国产精品久久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲五月婷婷丁香| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 成人国产一区最新在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av | 老鸭窝网址在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 免费看a级黄色片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜福利视频精品| 韩国精品一区二区三区| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 一级a爱视频在线免费观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产1区2区3区精品| 久久av网站| 多毛熟女@视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产福利在线免费观看视频| av电影中文网址| 一二三四社区在线视频社区8| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产精品久久久久成人av| 另类亚洲欧美激情| 欧美日韩福利视频一区二区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久人妻av系列| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲国产看品久久| 免费在线观看黄色视频的| 99国产精品一区二区三区| a级片在线免费高清观看视频| 国产av又大| 美国免费a级毛片| 一进一出好大好爽视频| 热99re8久久精品国产| 色老头精品视频在线观看| 99re6热这里在线精品视频| aaaaa片日本免费| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲九九香蕉| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 韩国精品一区二区三区| 最近最新免费中文字幕在线| 中文字幕高清在线视频| 久久久精品免费免费高清| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 不卡一级毛片| 18禁美女被吸乳视频| 丁香六月欧美| 午夜福利乱码中文字幕| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产在线免费精品| 黄色丝袜av网址大全| 免费黄频网站在线观看国产| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 99国产精品一区二区三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美+亚洲+日韩+国产| a在线观看视频网站| 99国产精品一区二区三区| 十八禁网站网址无遮挡| 午夜激情久久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久国内视频| 99国产精品一区二区三区| 性高湖久久久久久久久免费观看| av天堂久久9| 国产成人系列免费观看| 国产成人aa在线观看| av天堂中文字幕网| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 怎么达到女性高潮| 午夜a级毛片| 99久久精品国产亚洲精品| 免费在线观看影片大全网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| netflix在线观看网站| 亚洲中文av在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 夜夜夜夜夜久久久久| 999久久久精品免费观看国产| av视频在线观看入口| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产91精品成人一区二区三区| 国产v大片淫在线免费观看| 国产三级中文精品| 欧美色视频一区免费| 国语自产精品视频在线第100页| 51午夜福利影视在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲,欧美精品.| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99riav亚洲国产免费| 色老头精品视频在线观看| 九九热线精品视视频播放| 亚洲在线自拍视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久精品91蜜桃| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲,欧美精品.| 国产精品久久电影中文字幕| av中文乱码字幕在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产高清有码在线观看视频| 中文资源天堂在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 成人18禁在线播放| 美女午夜性视频免费| 两人在一起打扑克的视频| 97碰自拍视频| 一进一出抽搐动态| 不卡一级毛片| 欧美黑人巨大hd| 免费看光身美女| 国产精品av久久久久免费| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产91精品成人一区二区三区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美三级亚洲精品| 日韩高清综合在线| 婷婷亚洲欧美| 51午夜福利影视在线观看| 在线观看舔阴道视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久久精品大字幕| 1024香蕉在线观看| 国产精品永久免费网站| 国产真人三级小视频在线观看| 国产成人av教育| 一进一出抽搐gif免费好疼| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲色图av天堂| 91在线精品国自产拍蜜月 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久久久久久久黄片| 99久久成人亚洲精品观看| 午夜福利欧美成人| 婷婷丁香在线五月| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久9热在线精品视频| 亚洲精品在线美女| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久久久久久精品吃奶| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 香蕉丝袜av| 亚洲无线观看免费| 欧美日韩乱码在线| 激情在线观看视频在线高清| 97超视频在线观看视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久精品国产清高在天天线| 精品久久久久久久久久久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 蜜桃久久精品国产亚洲av| avwww免费| 成人亚洲精品av一区二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | av福利片在线观看| 午夜精品在线福利| 97碰自拍视频| www国产在线视频色| 国产高清激情床上av| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲中文av在线| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产成人精品无人区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久色成人| 97碰自拍视频| 欧美一级毛片孕妇| 热99在线观看视频| 国产精品久久电影中文字幕| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 精品免费久久久久久久清纯| 网址你懂的国产日韩在线| 国产亚洲精品久久久com| 日本免费一区二区三区高清不卡| 少妇的丰满在线观看| 黄色女人牲交| 亚洲在线自拍视频| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美日本视频| 免费观看人在逋| 又黄又爽又免费观看的视频| av视频在线观看入口| 老司机在亚洲福利影院| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产淫片久久久久久久久 | 网址你懂的国产日韩在线| 69av精品久久久久久| 手机成人av网站| 亚洲黑人精品在线| 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美黑人巨大hd|