青魚(yú)“出血癥”的病理形態(tài)學(xué)觀察

王榮華，陳 乘，劉小燕* 1，譚 情，劉 集,文祝友，鐘 蕾，羅方興

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)a.動(dòng)物科技學(xué)院，b.科技師范學(xué)院，中國(guó) 長(zhǎng)沙 410128)

青魚(yú)(Mylopharyngodonpiceus)是中國(guó)主要淡水養(yǎng)殖魚(yú)類之一，與鰱魚(yú)(Hypophthalmichthysmolitrix)、鳙魚(yú)(Aristichthysnobilis)、草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)合稱“四大家魚(yú)”[1]．青魚(yú)肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美，蛋白質(zhì)含量超過(guò)雞肉，是淡水魚(yú)中的上品．由于其生長(zhǎng)速度快，肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，一直以來(lái)受到人們的青睞．近年來(lái)，隨著青魚(yú)養(yǎng)殖范圍、養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖密度的增大，青魚(yú)的病害問(wèn)題不斷發(fā)生，出血病[2]、腸炎病[3]、肝膽綜合癥[4-5]和腸道敗血癥[6]等疾病嚴(yán)重制約了青魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展．2011年6月，長(zhǎng)沙望城某漁場(chǎng)出現(xiàn)大批量青魚(yú)死亡，以體表多處出血、肛門(mén)紅腫等為主要癥狀．因該病發(fā)病急，死亡率高，給青魚(yú)養(yǎng)殖戶帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失．本文擬對(duì)發(fā)病青魚(yú)各組織器官進(jìn)行病理組織學(xué)研究，為弄清該病的發(fā)病機(jī)理提供理論依據(jù)．

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2011年6月～2011年10月，青魚(yú)病魚(yú)(平均體長(zhǎng)43±2 cm，平均體重1 300±100 g),取自望城縣喬口青魚(yú)養(yǎng)殖基地．

1.2 剖檢及病理組織學(xué)觀察

對(duì)患有嚴(yán)重出血癥狀的瀕死青魚(yú)進(jìn)行臨床觀察，并解剖、觀察其內(nèi)臟變化．取病魚(yú)的鰓、肝、腎、脾、腸等組織，用體積分?jǐn)?shù)為10%的福爾馬林固定，經(jīng)脫水、透明、包埋、切片和H·E染色后，在Motic光學(xué)顯微鏡下觀察其病理組織變化．

2 觀察結(jié)果

2.1 臨床癥狀與病理剖檢變化觀察

發(fā)病前期，病魚(yú)體色發(fā)黑變暗，常浮游于水面，動(dòng)作遲鈍，離群獨(dú)游，不攝食．病魚(yú)皮膚表面有多處充血(圖1a)；鰓蓋、鰭條基部充血嚴(yán)重(圖1b)，肛門(mén)紅腫；解剖可見(jiàn)腸道充血、出血，腸壁較薄，彈性尚好，腸腔內(nèi)無(wú)食物，嚴(yán)重者腸腔內(nèi)有大量血水及成片脫落的腸黏膜碎片(圖1c)；病魚(yú)鰓絲嚴(yán)重充血，呈暗紅色，鰓絲上有淤斑(圖1d )；肌肉嚴(yán)重充血(圖1e)；腹腔內(nèi)有含血積液；肝臟腫大，質(zhì)地脆，呈土黃色，表面有出血斑點(diǎn)；脾臟腫大、充血，顏色加深(圖1f)．

圖1 a.病魚(yú)體表多處嚴(yán)重充血、出血；b.鰓蓋充血；c.腸道內(nèi)無(wú)食物，腸腔內(nèi)有大量血凝塊；d.鰓絲充血，呈暗紅色；e.肌肉充血；f.肝臟腫大，質(zhì)地脆Fig.1 a.Severe hyperemia and haemorrhage appeared on fish surface; b.Hyperemia on opercular; c.No food in intestine and filled with blood clof; d.Hyperemia on gill, dark red; e.Hyperemia on muscle; f.Hepatomegaly texture partial crisp

2.2 病理組織學(xué)變化觀察

前腸：固有層嚴(yán)重充血、水腫、壞死，嚴(yán)重病魚(yú)可見(jiàn)大面積出現(xiàn)核濃縮以及核偏于一側(cè)，細(xì)胞胞漿及胞核染色質(zhì)減少，逐漸溶解、消失，使整個(gè)細(xì)胞淡染，只留下一個(gè)細(xì)胞輪廓(圖 2a )；腸粘膜上皮細(xì)胞全部脫落, 留下祼露的固有膜， 基底膜排列紊亂,大量細(xì)胞空泡變性，炎性白細(xì)胞浸潤(rùn)．絨毛之間間距變小(圖2b)．

后腸：腸黏膜上皮細(xì)胞脫落，固有膜嚴(yán)重充血、出血, 組織疏松水腫(圖2c)；腺體上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞數(shù)量減少，腸道黏膜下層水腫，血管擴(kuò)張充血、出血(圖2d)．

圖2 a.前腸固有層細(xì)胞充血，壞死400×； b.前腸絨毛上皮細(xì)胞壞死脫落，毛細(xì)血管充血嚴(yán)重，絨毛之間有一細(xì)菌團(tuán)塊400×； c.后腸絨毛上皮細(xì)胞壞死脫落100×； d.后腸細(xì)胞變性、壞死，大量毛細(xì)血管有淤血400×Fig.2 a.Hyperemia and necrosis of anterior intestine 400×; b.Epithelial cells cytoclasis and catfish in anterior intestine, serious hyperemia on capillary 400×; c.Epithelial cells cytoclasis and catfish in hindgut 100×; d.degeneration, necrosis of hindgut cells and passive congestion in capillary 400×

肝：肝細(xì)胞腫大，嚴(yán)重變性、壞死，大范圍空泡化，排列不緊密，并有少量的血細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)其中；細(xì)胞核染色質(zhì)凝縮或裂解成大小不等的深染團(tuán)塊，甚至整個(gè)細(xì)胞的染色質(zhì)溶解消失，只剩下核影(圖3a)．

圖3 a.肝細(xì)胞腫脹，空洞變性400×；b.遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞水腫變性，形成“花朵狀”細(xì)胞400×；c.腎小囊擴(kuò)張，腎間質(zhì)小血管和毛細(xì)血管輕度充血400×；d.脾淋巴細(xì)胞、網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞壞死400×；e.鰓小片基部變性，壞死400×；f.細(xì)胞組織溶解消失400×Fig.3 a.Liver cell swelling, degeneration 400×; b.Degeneration and cellular necrosis of renal distal convoluted tubule, forming a “flower ” cell 400×; c.Renal capsule expanded, mild congestive on Renal interstitial small blood vessels and capillaries 400×; d.The lymphocyte and reticuloendothelial cells were severe necrosis 400×; e.The base of gill chip degeneration, necrosis 400×; f.Lysed cells tissues 400×

腎：腎間質(zhì)小血管和毛細(xì)血管輕度充血，遠(yuǎn)曲小管上皮細(xì)胞水腫變性，染色質(zhì)溶解形成空泡，細(xì)胞核固縮并被擠壓在外圍，形成“花瓣?duì)睢?圖3b)；腎小囊擴(kuò)張，腎小球血管內(nèi)充滿紅細(xì)胞，上皮細(xì)胞和足細(xì)胞腫脹(圖3c)．

脾：淋巴細(xì)胞染色質(zhì)濃縮，許多細(xì)胞核碎裂，大量淋巴細(xì)胞壞死，細(xì)胞數(shù)量稀少；脾髓紅細(xì)胞大量減少；網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞核染色質(zhì)聚集，裂解(圖3d)．

鰓：鰓小片基部變性，壞死，甚至脫落；毛細(xì)血管明顯充血；局部的鰓小片相互融合成板塊狀(圖3e)．

肌肉：真皮下結(jié)締組織和肌纖維染色變深，混濁腫脹，玻璃樣變性，橫紋模糊、消失，甚者肌纖維溶解、斷裂、壞死；細(xì)胞完全溶解消失，僅留下組織輪廓(圖3f)．

3 分析與討論

3.1 分析

青魚(yú)出血癥的主要病理學(xué)變化表現(xiàn)為全身多部位的細(xì)胞腫脹、變性壞死、脫落，尤其是腸、腎、肝等器官受損嚴(yán)重，這與發(fā)生在異育銀鯽[7]、鯉魚(yú)[8]和團(tuán)頭魴[9]的報(bào)道基本相同．魚(yú)體肌肉、腸、肝、腎和鰓等器官的毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，組織變性、壞死,引起魚(yú)體許多部位出現(xiàn)出血斑點(diǎn)．在組織病理上則表現(xiàn)出形成微血栓，使得參與血液循環(huán)的血量大量減少；另一方面，微血栓的形成阻礙了微循環(huán)，正常的代謝受阻，引起臟器組織梗死樣病變，而使相關(guān)器官發(fā)生了嚴(yán)重的機(jī)能和物質(zhì)代謝的障礙, 加速病魚(yú)的死亡．腸道上皮細(xì)胞變性、壞死，脫落，細(xì)胞核破裂、溶解；固有膜和粘膜下層毛細(xì)血管擴(kuò)張淤血，排列紊亂、扭曲成空泡狀，有的甚至溶解壞死．這些病變嚴(yán)重影響了腸道的消化和吸收功能，使魚(yú)的攝食能力下降，這可能是病魚(yú)腸道內(nèi)沒(méi)有食物的原因；鰓小片壞死變性，和鄰近鰓小片融合成板塊狀，使魚(yú)的呼吸作用和鰓的滲透調(diào)節(jié)作用受到影響，病魚(yú)因缺氧造成組織器官呼吸障礙而能量不足，甚至代謝紊亂，從而加速了病魚(yú)的死亡．

3.2 討論

本研究中患病青魚(yú)表現(xiàn)出的體色發(fā)黑，體表、鰭條基部、鰓蓋等部位有出血斑，肛門(mén)紅腫，肝臟腫大，質(zhì)地變脆等臨床癥狀與朱成科等人[10]報(bào)道的南方鲇幼魚(yú)細(xì)菌性敗血癥的癥狀基本相似．關(guān)于該病的致病病原，到目前為止，少有人研究．翟子玉等研究發(fā)現(xiàn)，青魚(yú)出血病致病病原為一種RNA病毒,屬于呼腸弧病毒科[11]．然而， 2010年，秦國(guó)民[12]，張波[13]等報(bào)道青魚(yú)出血病是感染嗜水氣單胞菌所引起．從本研究收集到的病例來(lái)看，養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖過(guò)程中曾飼喂過(guò)多種抗生素，但其防治效果均不理想；且本實(shí)驗(yàn)組成員從發(fā)病的病魚(yú)內(nèi)臟中并沒(méi)有分離到病原細(xì)菌，從治療診斷角度考慮，不排除病毒感染的可能．本研究組成員將會(huì)對(duì)其發(fā)病原因進(jìn)行進(jìn)一步的探討．

致謝：衷心感謝動(dòng)物科技學(xué)院陳可毅教授在病理方面的指導(dǎo)!

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