皮炎康顆粒對(duì)小鼠慢性變應(yīng)性接觸性皮炎的實(shí)驗(yàn)研究

劉 彬 關(guān)小紅 王小輝 李鈺瑤

(1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科，沈陽，110032;2美國加利福尼亞州安大略基督教高中加州安大略市西菲力刀飛亞街931號(hào)ca91762，加利福尼亞，91762)

皮炎康顆粒由炙黃芪、黃芩、黃柏、白芍、白術(shù)、當(dāng)歸、大黃、青蒿、生地黃、甘草等中藥組成，具有清熱利濕解毒、涼血疏風(fēng)解癢、益氣養(yǎng)血固表之功效，是我科臨床協(xié)定方，長期應(yīng)用于濕熱及血虛證的急、慢性變應(yīng)性接觸性皮炎和急、亞急性、慢性濕疹的治療并取得了比較滿意的臨床療效。本實(shí)驗(yàn)通過觀察皮炎康顆粒對(duì)小鼠慢性變應(yīng)性接觸性皮炎耳腫脹度、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響，為進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料及方法

1.1 藥物 皮炎康顆粒(含藥材2.55 g生藥/kg)，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供，批號(hào):20110501。氯雷他定片，國藥準(zhǔn)字H10970410，由上海先靈葆雅制藥公司生產(chǎn)，批號(hào)09JRXF1043，規(guī)格10 mg/片，1 次/d，1 片/次。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性昆明種小鼠，體重18～22 g，購自中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(遼)2008－0005。于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)，許可證號(hào):SYXK(遼)2007－0010。實(shí)驗(yàn)室溫度20℃ ～23℃，濕度50% ～60%。

1.3 試劑及儀器 2，4－二硝基氯苯(分析純)，天津市津科精細(xì)化工研究所，批號(hào):20070622;丙酮(分析純)，沈陽化學(xué)試劑廠;批號(hào):0303011:大豆油，嘉里糧油有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20090522;娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。YLS－Q4耳腫打耳器，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院;電子數(shù)顯卡尺，桂林廣陸數(shù)字測控股份有限公司生產(chǎn);FA2004分析天平，由上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);TD10001電子天平，浙江余姚金諾天平儀器有限公司。

2 方法

2.1 藥品的配制方法 取皮炎康顆粒，用蒸餾水配制成所需的濃度，給藥體積為小鼠40 mL/kg。

2.2 劑量選擇和分組 根據(jù)受試藥臨床使用的劑量和預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果設(shè)定空白組、模型組、皮炎康顆粒高(4倍等效量)、中(2倍等效量)、低(等效量)3個(gè)劑量組和氯雷他定片高劑量(4倍量)組。

2.3 小鼠慢性ACD模型的建立[1]及給藥方法[2]取體重18～22 g的小鼠60只，隨機(jī)分為6組，空白組、模型組、氯雷他定片組、皮炎康顆粒4倍量(58.73 g生藥/kg)組、2倍量(29.47 g生藥/kg)組、1倍量(14.73 g生藥/kg)組。每組10只，實(shí)驗(yàn)前1 d，在小鼠背部去毛，面積約4 cm2，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日各組(除空白組)于去毛區(qū)涂以7%DNCB液(丙酮/大豆油 =4∶1)100 μL致敏1次。5 d后涂1%DNCB丙酮液5 μL于小鼠右耳內(nèi)側(cè)激發(fā)，每隔3 d激發(fā)1次，左耳涂抹等量基質(zhì)，空白組左右耳均涂抹等量的基質(zhì)。分別于第4次激發(fā)后72 h處死小鼠。致敏前1 d各組按規(guī)定的劑量灌胃給藥，空白組和模型組給予同體積蒸餾水，1次/d，再于末次激發(fā)后6 h灌藥。

2.4 取材方法 激發(fā)后72 h，將動(dòng)物頸椎離斷處死，用游標(biāo)卡尺測量小鼠耳中部厚度后立即剪下雙側(cè)耳廓備檢。使用0.8 cm半徑的金屬耳腫打孔器在左右耳中部打孔，取相同大小的耳組織，用電子天平稱重，計(jì)算左右耳重量差。完整摘取小鼠胸腺及脾，用電子天平測定其重量，分別以每10 g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作為脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 皮炎康顆粒對(duì)慢性ACD小鼠耳厚度差、重量差的影響 模型組與空白組相比耳重量差、耳厚度差均明顯增加，與空白組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。皮炎康顆粒各劑量組和氯雷他定片組均能減輕小鼠耳重量差、耳厚度差，與模型組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。

3.2 皮炎康顆粒對(duì)慢性ACD小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的影響 由表2可以看出，模型組與空白組相比胸腺指數(shù)、脾指數(shù)均明顯增加，與空白組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。皮炎康各劑量組和氯雷他定片組均能降低小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，與模型組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。

表1 皮炎康顆粒對(duì)慢性ACD模型小鼠耳腫脹的影響(±s)

表1 皮炎康顆粒對(duì)慢性ACD模型小鼠耳腫脹的影響(±s)

注:與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*P＜0.05，＊＊P＜0.01);與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(△△P＜0.01)。

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表2 皮炎康顆粒對(duì)慢性ACD模型小鼠臟器指數(shù)的影響(±s)

表2 皮炎康顆粒對(duì)慢性ACD模型小鼠臟器指數(shù)的影響(±s)

注:與模型組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與空白組相比，△△P＜0.01。

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4 討論

ACD是機(jī)體經(jīng)皮膚接受抗原刺激后當(dāng)再次接觸相同抗原時(shí)發(fā)生以皮膚損害為主要特征的Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)[3－4]，導(dǎo)致以單核細(xì)胞浸潤為主，變性壞死為特征的炎性反應(yīng)[5]。ACD發(fā)生的機(jī)理是針對(duì)皮膚接觸性變應(yīng)原發(fā)生的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，多數(shù)由Th1型CD4+T細(xì)胞激發(fā)活化效應(yīng)細(xì)胞和分泌細(xì)胞因子，介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[6]。ACD接觸部位甚至以外的部位表現(xiàn)為紅斑、水腫、水皰甚至大皰[7]。胸腺及脾是重要的免疫器官，機(jī)體發(fā)生超敏反應(yīng)的同時(shí)脾臟、胸腺腫大，重量增加。脾指數(shù)、胸腺指數(shù)可衡量藥物對(duì)免疫器官的抑制作用[8]。而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般又常以鼠左右耳厚度和質(zhì)量差值作為衡量炎性反應(yīng)輕重程度指標(biāo)。隨著科學(xué)技術(shù)的提高，工業(yè)化的發(fā)展，出現(xiàn)了許多新的過敏原，接觸性皮炎和濕疹發(fā)病率都呈逐漸上升的趨勢。目前抗組胺藥廣泛應(yīng)用于過敏性疾病的治療，但由于其作用機(jī)制主要對(duì)Ⅰ型超敏反應(yīng)有著良好拮抗作用，治療Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)效果不理想。雖有文獻(xiàn)報(bào)道新一代抗組胺藥物在體外呈現(xiàn)良好抗炎，抑制細(xì)胞的趨化以及對(duì)細(xì)胞介質(zhì)的抑制作用，但是往往其濃度達(dá)到目前所應(yīng)用的體內(nèi)藥物濃度數(shù)百倍以上[9]。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)慢性變應(yīng)性接觸性皮炎和慢性濕疹的治療有著大量臨床實(shí)踐和經(jīng)驗(yàn)積累[10－11]，特別對(duì)中藥的有效成分的研究顯示，其可作用于過敏反應(yīng)不同環(huán)節(jié)[12－16]。皮炎康顆粒作為科內(nèi)臨床協(xié)定方長期用于上述疾病的治療并取得了比較滿意的臨床療效。此方由黃芪、黃芩、黃柏、白芍、白術(shù)、當(dāng)歸、大黃、青蒿、生地黃、甘草等組成。方中黃芩、黃柏、大黃、青蒿、生地黃、牡丹皮、白鮮皮清熱利濕，涼血疏風(fēng);而黃芪、白芍、白術(shù)、當(dāng)歸健脾利濕，養(yǎng)血益氣，固表御邪;甘草調(diào)和諸藥。目前慢性變應(yīng)性接觸性皮炎、慢性濕疹的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療是以抗炎、抗組胺為主要方法，同時(shí)可配以免疫調(diào)節(jié)治療。本方的治療原則與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療方法有相通之處，既清熱利濕、涼血疏風(fēng)，亦養(yǎng)血益氣、固表御邪。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，皮炎康顆?？筛纳艱NCB引起的慢性變應(yīng)性接觸性皮炎模型小鼠的耳部腫脹，具有一定的抗炎作用，同時(shí)可降低小鼠胸腺、脾指數(shù)。

[1]李敏.疏風(fēng)飲對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)及IFN－γ與 IL－4分泌的影響[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2011，25(1):24－25.

[2]郝光榮.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)[M].2版，上海，第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，2002:276.

[3]Bradley J，McCluskey J.Clinical Immunology[M].Chapter 16.Oxford:Oxford University Press，1997:330－348.

[4]Abbas AK.Cellular and molecular immunology[M].3rd ed.Chaper 14 Philadelphia:W.B.Saunders company，1997:301－308.

[5]陳妍，郭在培.變應(yīng)性接觸性皮炎的原位免疫學(xué)研究[J].華西醫(yī)學(xué)，2006，21(1):217－218.

[6]SehimiuT，AbeR，NishihiarJ，et al.Impaired contact hypesensitivity in macrophage migration inhibitory factor－ deficient mice.EurJ Immunol，2003，33:1478－1487.

[7]趙辨.中國臨床皮膚病學(xué)[M].南京:江蘇科學(xué)出版社，2009:717－718.

[8]梁秀宇.消風(fēng)散對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎抑制作用及其免疫學(xué)機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究[D].沈陽:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2007.

[9]Walsh GM，Annunziato L，F(xiàn)rossard N，etal.New insigts into the second generation antihisatanmines[J].Durgs，2001，61:207－236.

[10]楊寶華，陳德宇，肖順漢.消風(fēng)膠囊對(duì)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響及其作用機(jī)理研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2003，2(1):13－15.

[11]楊寶華，陳德宇，肖順漢.消風(fēng)膠囊對(duì)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響及其作用機(jī)理研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2003，2(1):13－15.

[12]黃礴，吳鐵，樊翌明，6種中藥抑制二硝基氟苯所致小鼠接觸性皮炎的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(13):1756－1757.

[13]韓春雷，陳學(xué)榮，馬俊江.氧化苦參堿對(duì)大鼠變應(yīng)性接觸性皮炎藥效學(xué)作用[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，28(1):59－61.

[14]郝飛.甘草酸國外研究進(jìn)展[J].中國藥房，2001，12(8):500－502.

[15]鄭詠秋，魏偉，戴敏，等.木瓜總甙抑制小鼠接觸性超敏反應(yīng)及對(duì)胸腺T淋巴細(xì)胞亞型的調(diào)節(jié)作用[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2004，20(9):1016－1020.

[16]陳子珺，李慶生，淤澤愽，等.防風(fēng)與刺蒺藜抗過敏作用的試驗(yàn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2003，24(4):30－32.