條葉榕抗炎鎮(zhèn)痛作用研究＊

王喜周 應(yīng)躍躍 張 昊 姚曉偉 陳學(xué)智 麗水學(xué)院醫(yī)學(xué)院（麗水323000）

△浙江省麗水市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)院（麗水323000）

▲浙江省景寧縣人民醫(yī)院（麗水310000）

條葉榕（Ficus pandurata hance var.angustifolia Cheng）為?？崎艑僦参?，畬藥名小香勾，別名小康補(bǔ)［1］，是畬族最常用的畬藥之一?！墩憬≈兴幣谥埔?guī)范》記載：條葉榕的功效：利濕，健脾。主治：消化不良，疳積，腹瀉等的疾病［2］。該藥在浙中南地區(qū)民間應(yīng)用較廣，主要用于水腫，腹痛，風(fēng)濕等疾病。鄢連和等認(rèn)為其有祛風(fēng)除濕，行氣活血的功效［3］。有科研工作者對(duì)條葉榕的黃酮類生物活性物質(zhì)進(jìn)行了提取分離研究［4］，發(fā)現(xiàn)其富含黃酮類物質(zhì)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道榕屬藥用植物所含的黃酮類物質(zhì)具有多重生物活性功效，如抗菌［5］、抗炎［6］、抗氧化［7］、護(hù)肝作［8］等。本文對(duì)條葉榕的抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行藥效學(xué)研究，并比較了其不同提取的抗炎鎮(zhèn)痛效果。為條葉榕的藥物開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料1.1 儀器和試劑 YLS－6B智能熱板儀、YLS－Q4耳腫打耳器，醋酸地塞米松（浙江仙居制藥廠，批號(hào)110736），阿司匹林、95%乙醇、氯仿、醋酸乙酯、冰醋酸、二甲苯均為分析純；角叉菜膠，Sigma公司。

1.2 藥物 野生條葉榕2010年8月中旬采自浙江遂昌白馬山國(guó)家森林公園，麗水食品藥品檢驗(yàn)所李建良鑒定為Ficus pandurata hance var.angustifolia Cheng，取條葉榕根莖，水洗，60℃烘箱中烘至恒重，粉碎，過(guò)三號(hào)篩，裝保鮮袋，冷藏備用。

稱取條葉榕根莖粉末100g，加蒸餾水1000mL，28℃超聲輔助提取20min，100℃回流30min，過(guò)濾，藥渣加蒸餾水500mL，100℃回流30min，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至生藥1g/mL，得條葉榕水提液，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

稱取條葉榕根莖粉末100g，加50%（v/v）乙醇1000mL，28℃超聲輔助提取20min，煮沸，回流30min，過(guò)濾，藥渣加50%（v/v）乙醇500mL，煮沸，回流30min，過(guò)濾，合并濾液，揮醇，濃縮至生藥1g/mL，得條葉榕醇提液，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

給藥方式及容積：條葉榕水提液、條葉榕醇提液和阿司匹林灌胃給藥，每天一次，每次25mL/kg，地塞米松腹腔注射給藥。

1.3 動(dòng)物 昆明種小白鼠（清潔級(jí)），雌雄各半，年齡4～6周，體重18～22g，由麗水學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供并飼養(yǎng)。飼養(yǎng)條件：籠養(yǎng)，安靜，室溫23±2℃，濕度60±10%，12小時(shí)晝夜更替。

2 實(shí)驗(yàn)方法2.1 二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)［9］60只18～22g小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為6組，每組10只，即生理鹽水組（25g·kg－1）、陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松1mg·kg－1）、條葉榕水提液高劑量組（9g·kg－1）、條葉榕水提液低劑量組（3g·kg－1）、條葉榕醇提液高劑量組（9g·kg－1）、條葉榕醇提液低劑量組（3g·kg－1）。各組動(dòng)物每天給藥1次，連續(xù)給藥6d，末次給藥lh后，將二甲苯（0.04mL/只）涂于小鼠右耳正反兩面，左耳作對(duì)照，1h后處死小鼠，沿耳廓基線剪取兩耳，用直徑8mm打孔器分別在雙耳的同一部位打下圓耳片，精確稱重，其差值為炎性腫脹度，并計(jì)算小鼠耳朵腫脹抑制率。

抑制率（%）＝（生理鹽水對(duì)照組腫脹度—條葉榕組腫脹度）/生理鹽水對(duì)照組腫脹度×100%

2.2 角叉菜膠致小鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)［10］60只18～22g小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分組、劑量和給藥同2.1項(xiàng)。末次給藥lh后，在小鼠右后足跖皮下注入以1%角叉菜膠（0.02mL/只）致炎，致炎后次日處死小鼠，剪取小鼠左右后足跖，精確稱重，左右足跖差值為炎性腫脹度，并計(jì)算小鼠足跖腫脹抑制率，計(jì)算公式同2.1項(xiàng)。

2.3 小鼠皮下棉球肉芽腫增生實(shí)驗(yàn)［11］60只18～22g小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，每只小鼠注射0.7%硫噴妥鈉（10mL·kg－1）麻醉后，無(wú)菌操作，在其背部切1cm長(zhǎng)小口，在小鼠左右腋窩各植入已滅菌棉球一只（10mg/只），縫合皮膚，次日對(duì)植棉小鼠進(jìn)行分組，分組、劑量和給藥同2.1項(xiàng)，連續(xù)給藥8d，末次給藥1h后脫頸處死小鼠；剖取棉球肉芽腫，剔除脂肪組織，置60℃烘箱烘至恒重，減去原棉球質(zhì)量即為肉芽腫質(zhì)量，計(jì)算肉芽腫抑制率。

抑制率（%）＝（正常對(duì)照組肉芽腫質(zhì)量—條葉榕組肉芽腫質(zhì)量）/正常對(duì)照組肉芽腫質(zhì)量×100%

2.4 醋酸致小鼠扭體的實(shí)驗(yàn)方法［9］60只18～22g實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只，即陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林溶液200mg·kg－1），其余分組及劑量同2.1項(xiàng)。連續(xù)給藥6d，各組小鼠在末次給藥后1h，每只小鼠腹腔注射0.6%（v/v）的醋酸溶液0.4mL/只。記錄注射醋酸后小鼠15min內(nèi)的扭體次數(shù)，并計(jì)算扭體抑制率。

抑制率（%）＝（正常對(duì)照組扭體次數(shù)—條葉榕組扭體次數(shù)）/正常對(duì)照組扭體次數(shù)×100%

2.5 對(duì)小鼠熱板痛反應(yīng)的影響［9］將實(shí)驗(yàn)小鼠置于（55±0.5）℃的智能熱板儀上，測(cè)定每只小鼠的痛閾值。痛閾值在10～15s為合格小鼠。選取痛閾值在10～15s間的小鼠60只，隨機(jī)分成6組，分組及給藥同2.4項(xiàng)，每組給藥前重復(fù)測(cè)定痛閾值2次，取均值作為基礎(chǔ)痛閾值，連續(xù)給藥6d，每天1次，第6天給藥后，在分別在第30min、60min、90min時(shí)測(cè)量小鼠的痛閾值，計(jì)算各組痛閾提高百分率。

痛閾提高百分率（%）＝（給藥后痛閾值－給藥前痛閾值）/給藥前痛閾值×100%

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 條葉榕對(duì)二甲苯致小鼠耳殼腫脹的影響 條葉榕醇提液高劑量組、低劑量組和水提液高劑量組對(duì)二甲苯所致的鼠耳腫脹有抑制作用，抑制率分別為35.96%、17.21%和26.38%，與生理鹽水組比較有顯著性差異或非常顯著差異；條葉榕醇提液組對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用強(qiáng)于水提液組，但是在相同劑量組之間比較沒(méi)有顯著差異。見(jiàn)表1。

表1 條葉榕對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n＝10）

表1 條葉榕對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n＝10）

注：與生理鹽水組比較，△P＜0.05；▲P＜0.01；水提液高劑量組與醇提液高劑量組比較◇P＜0.05（下同）

組 別 劑量（g·kg－1）腫脹度（mg）抑制率（%—生理鹽水組 25 20.67±4.91）3 17.11±4.23 12.22地塞米松組 0.001 10.96±3.37▲ 46.98條葉榕水提液高劑量組 9 15.22±3.81△ 26.37條葉榕水提液低劑量組 3 18.54±4.65 10.30條葉榕醇提液高劑量組 9 13.24±3.45▲ 35.95條葉榕醇提液低劑量組

3.2 條葉榕對(duì)角叉菜膠所致足腫脹的影響 條葉榕醇提液高劑量組、低劑量組和水提液高劑量組對(duì)角叉菜膠所致足跖腫脹有抑制作用，抑制率分別為34.29%、13.98%和23.34%，與生理鹽水組比較有顯著性差異或非常顯著差異；條葉榕醇提液高劑量組對(duì)角叉菜膠所致足腫脹的抑制作用高于水提液高劑量組，并有顯著差異。見(jiàn)表2。

表2 條葉榕對(duì)角叉菜膠致小鼠足跖腫脹的影響（±s，n＝10）

表2 條葉榕對(duì)角叉菜膠致小鼠足跖腫脹的影響（±s，n＝10）

組 別 劑量（g·kg－1）腫脹度（mg）抑制率（%生理鹽水組 25 89.25±15.60）—地塞米松組 0.001 48.86±9.71▲ 45.25條葉榕水提液高劑量組 9.0 68.42±12.58△◇ 23.34條葉榕水提液低劑量組 3.0 80.63±14.12 9.66條葉榕醇提液高劑量組 9.0 58.65±13.90◇▲ 34.29條葉榕醇提液高劑量組 3.0 76.77±14.35△13.98

3.3 條葉榕對(duì)小鼠皮下棉球肉芽腫增生的影響 條葉榕水提液高劑量組和醇提液高劑量組均抑制皮下棉球所致小鼠皮下腫脹，其抑制率分別為21.19%和28.73%，與生理鹽水組比較有顯著性差異，其它條葉榕組與生理鹽水組比較沒(méi)有顯著差別；相同劑量的醇提液組與水提液組比較沒(méi)有顯著差異。見(jiàn)表3。

表3 條葉榕對(duì)小鼠皮下棉球肉芽腫增生的影響（±s，n＝10）

表3 條葉榕對(duì)小鼠皮下棉球肉芽腫增生的影響（±s，n＝10）

組 別 劑量（g·kg－1）肉芽腫質(zhì)量（mg）抑制率（%）生理鹽水組 25 6.23±1.73—地塞米松組 0.001 4.16±1.55 33.22條葉榕水提液高劑量組 9.0 4.91±1.72△ 21.19條葉榕水提液低劑量組 3.0 5.30±1.59 14.93條葉榕醇提液高劑量組 9.0 4.44±1.98△ 28.73條葉榕醇提液高劑量組3.0 5.24±1.76 15.89

3.4 條葉榕對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 條葉榕4個(gè)劑量組均能顯著減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)，其中水提液高劑量組、醇提液高劑量組和低劑量組與生理鹽水組比較有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）；醇提液高劑量組鎮(zhèn)痛作用大于水提液高劑量組，且有顯著差異。見(jiàn)表4。

表4 條葉榕對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（±s，n＝10）

表4 條葉榕對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（±s，n＝10）

組 別 劑量（g·kg－1）扭體次數(shù)（次/15min）抑制率（%）生理鹽水組 25 41.4±13.2—18.5阿司匹林組 0.001 15.2±6.8▲ 63.2條葉榕水提液高劑量組 9.0 24.8±10.1△◇ 40.1條葉榕水提液低劑量組 3.0 38.1±12.9 7.8條葉榕醇提液高劑量組 9.0 18.1±9.2▲◇ 56.1條葉榕醇提液低劑量組 3.0 33.72±11.6△

3.5 條葉榕對(duì)小鼠熱板痛反應(yīng)的影響 條葉榕水提液組合醇提液組均能夠能顯著提高小鼠熱刺激體表的痛閾值，其中條葉榕水提液高劑量組合和醇提液高劑量組與生理鹽水組比較有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01），表明一定劑量的條葉榕水提液和醇提液對(duì)小鼠具有鎮(zhèn)痛作用；條葉榕醇提液組高于水提液組的鎮(zhèn)痛作用，其中90min的條葉榕醇提液高劑量組與水提液高劑量組比較有顯著差異；條葉榕用藥組的痛閾值隨時(shí)間的延長(zhǎng)而提高。見(jiàn)表5。

表5 條葉榕對(duì)小鼠熱板痛反應(yīng)時(shí)間的影響（±s，n＝10）

表5 條葉榕對(duì)小鼠熱板痛反應(yīng)時(shí)間的影響（±s，n＝10）

痛閾值（s）痛閾值提高率（%）組 別 劑量（g·kg－1）5 29.2阿司匹林組 0.2 14.4±6.3 24.3±7.4▲ 28.7±7.4▲ 33.7±7.4▲ 66.6 96.2 130.9條葉榕水提液高劑量組 9 13.8±5.2 18.9±7.0△ 23.6±6.2▲ 24.1±6.8◇▲ 36.7 71.2 74.9條葉榕水提液低劑量組 3 14.3±6.7 16.52±6.6 18.0±6.7 18.1±5.3 15.2 25.4 25.9條葉榕醇提液高劑量組 9 13.9±5.6 20.7±5.5△ 24.8±7.1▲ 27.7±6.8◇▲ 49.5 78.8 99.4條葉榕醇提液低劑量組 3 13.7±5.8 17.1±6.2 18.1±5.8 19.5±5.9 25.6 32 30min 60min 90min生理鹽水組 25 14.2±5.0 15.8±6.0 17.1±5.7 18.4±6.1 11.5 20.基礎(chǔ)痛閾30min 60min 90min.7 43.2

4 討 論本研究采用3種炎癥模型（兩種急性致炎模型與一種慢性致炎模型）和2種鎮(zhèn)痛模型（中樞性鎮(zhèn)痛模型和外周性鎮(zhèn)痛模型）檢測(cè)條葉榕的抗炎鎮(zhèn)痛效果。條葉榕的水提液和醇提液對(duì)二甲苯所致小鼠耳片腫脹、角叉菜膠所致小鼠足腫脹以及小鼠皮下棉球肉芽腫增生均有抑制作用，說(shuō)明條葉榕能夠有效緩解炎癥發(fā)生過(guò)程中的癥狀；條葉榕水提液和醇提液均能抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛反應(yīng)，減少小鼠的扭體次數(shù)，提高小鼠熱刺激體表的痛閾，延長(zhǎng)熱板痛反應(yīng)時(shí)間，說(shuō)明條葉榕可以分別通過(guò)中樞神經(jīng)和外周神經(jīng)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；同劑量條葉榕醇提液的抗炎鎮(zhèn)痛作用高于水提液，與前期研究的黃酮類物質(zhì)更易被乙醇溶劑提取有關(guān)［12］。條葉榕抗炎鎮(zhèn)痛作用可能與榕屬植物含有生物活性物質(zhì)有關(guān)，如黃酮類、萜類、三萜類、甾醇類和多糖類等成分有關(guān)；條葉榕氣味芳香，可能與中藥芳香化濕，通暢氣機(jī)，通則不痛的理論有關(guān)。

總之，條葉榕具有鎮(zhèn)痛抗炎作用，并且同劑量醇提液比水提液抗炎鎮(zhèn)痛效果強(qiáng)，但對(duì)條葉榕抗炎鎮(zhèn)痛藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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