參芎明膠微球含量測定方法的建立*

王曦 于書儀 劉旭紅

中藥丹參和川芎具有增強(qiáng)免疫作用[1]，臨床應(yīng)用廣泛。明膠微球是明膠的一種衍生物，作為藥物載體[2]，能夠明顯降低藥物崩解速度，延長體內(nèi)的存留時(shí)間，增加藥物療效[3]。制備微球的方法很多，有乳化-化學(xué)交聯(lián)法，揮散有機(jī)溶劑法，照射聚合法，加熱固化法等，本文采用明膠做基質(zhì)，采取乳化-化學(xué)交聯(lián)法制備參芎明膠微球[4]。

1 材料與儀器

1.1 材料 丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，）；

1.2 主要儀器 JUV757CRT型紫外可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）

2 方法和結(jié)果

2.1 檢測波長的選擇 精密稱取丹參素鈉對照品、鹽酸川芎嗪對照品各20.0 mg，用60%乙醇溶液溶解并稀釋適當(dāng)倍數(shù)，在200～500 nm波長范圍內(nèi)掃描，最大吸收波長分別為280 nm、290 nm。按照處方量制成的空白微球，用60%乙醇溶液稀釋適當(dāng)濃度，在200～500 nm掃描，實(shí)驗(yàn)表明在同等條件下空白輔料對丹參、川芎嗪的測定沒有干擾，見圖1、圖2。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取丹參素鈉對照品2.0 mg（相當(dāng)于丹參素標(biāo)準(zhǔn)品1.4 mg），用蒸餾水定容至10 ml容量瓶中，濃度（以丹參素計(jì)）為1.4 mg/mL。然后分別稀釋至濃度為0.70 mg/ml，0.0350 mg/mL，0.1750mg/ml，0.08750 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以蒸餾水為空白，在280 nm處分別測定空白微球和參芎微球的吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.9965x+0.0195，r=0.9995，表明在8.750 μ g/ml～1.4 mg/mL線性關(guān)系良好。

圖1 參芎明膠微球紫外掃描圖譜

圖2 空白明膠微球紫外掃描圖譜

精密稱取鹽酸川芎嗪對照品20 mg，蒸餾水定容至20 ml容量瓶中，濃度為1 mg/ml，分別量取2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml稀釋定容至20 ml容量瓶中，制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以蒸餾水為空白，在290 nm處分別測定空白微球和參芎微球的吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=4.0732x-0.0436，r=0.9995，表明在0.1～0.5 mg/ml線性關(guān)系良好。按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算微球的包封率。求得參芎明膠微球的包封率為51.20%。

2.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取丹參素鈉對照品2.0 mg（相當(dāng)于丹參素標(biāo)準(zhǔn)品1.4 mg），用純化水定容至10 ml容量瓶中，濃度（以丹參素計(jì)）為1.4 mg/ml。然后分別稀釋至濃度為 0.70 mg/ml，0.0350 mg/ml，0.1750mg/ml，0.08750 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以蒸餾水為空白，在280 nm測定吸收度，重復(fù)測定5次，試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 丹參總酚酸重現(xiàn)性測定結(jié)果

精密稱取鹽酸川芎嗪對照品20 mg，用純化水定容至20 ml容量瓶中，濃度為1 mg/ml，分別量取2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml稀釋定容至20 ml容量瓶中，作為不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以蒸餾水為空白，在290 nm處測定鹽酸川芎嗪的吸光度，重復(fù)測定5次，結(jié)果表明，該方法測定結(jié)果重現(xiàn)性良好。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 鹽酸川芎嗪重現(xiàn)性測定結(jié)果

2.4 精密度試驗(yàn) 精確配制丹參素鈉5種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于1 d內(nèi)分別測定5次，計(jì)算日內(nèi)誤差；同法每日測定1次連續(xù)測定5 d，計(jì)算日間誤差，結(jié)果見表3、表4。丹參總酚酸日間精密度測定結(jié)果見表5。川芎嗪日間精密度測定結(jié)果見表6。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取1.4 mg/ml的丹參素鈉對照品溶液，分別于 0、2、4、6、8、12 h 測定吸收度，結(jié)果分別為 0.345、0.340、0.344、0.336、0.335、0.337，RSD為 1.33%。 取 1 mg/ml的鹽酸川芎嗪對照品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h測定吸收度，結(jié)果分別為12.112、12.134、12.234、12.135、12.243、12.246，RSD為0.51%，結(jié)果表明，該方法測定結(jié)果穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率試驗(yàn) 分別準(zhǔn)確稱取126.6 mg的空白微球9份，和丹參素鈉9份混合后置于燒杯中，加入40 ml蒸餾水，然后調(diào)節(jié)pH至3.5，分別加入0.2 g胃蛋白酶，將燒杯置于（37±1）℃的水溶液中先超聲1 h，攪拌震蕩3 h使微球完全水解。微孔濾膜過濾，，取續(xù)濾液定容至20 ml容量瓶中。

表3 丹參總酚酸日內(nèi)精密度測定結(jié)果

表4 川芎嗪日內(nèi)精密度測定結(jié)果

結(jié)果表明，該方法測定結(jié)果日內(nèi)精密度良好。

表5 丹參總酚酸日間精密度測定結(jié)果

表6 川芎嗪日間精密度測定結(jié)果

結(jié)果表明，該方法測定結(jié)果日間精密度良好。在280 nm處測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算，結(jié)果見表7。

分別準(zhǔn)確稱取126.6 mg的空白微球9份，和鹽酸川芎嗪9份混合后置于燒杯中，加入40 ml蒸餾水，然后調(diào)節(jié)pH至3.5，再分別加入0.2 g胃蛋白酶，將燒杯置于（37±1）℃的水溶液中先超聲1 h，攪拌震蕩3 h使微球完全水解。微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液定容至20 ml容量瓶中。在290 nm處測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算，結(jié)果見表8。

表7 丹參素鈉回收率測定結(jié)果

表8 鹽酸川芎嗪回收率測定結(jié)果

丹參的平均回收率為98.55%，川芎平均回收率為98.58%，表明該方法回收率良好，輔料對丹參、川芎的含量測定不產(chǎn)生干擾。

2.7 含量測定方法 稱參芎明膠微球126.6 mg，加入40 ml蒸餾水，再調(diào)節(jié)pH至3.5，各加入0.2 g胃蛋白酶，將燒杯置于（37±1）℃的水溶液中先超聲1 h，再攪拌3 h使微球完全水解。微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液定容至20 ml容量瓶中。以蒸餾水作為空白溶劑，分別在200～500 nm掃描參芎明膠微球的圖譜測定吸收度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算微球的載藥量和包封率。

3 結(jié)論

3.1 近年來，川芎臨床應(yīng)用研究廣泛[5-6]，本研究建立了紫外分光光度法，該方法精密度良好，重現(xiàn)性良好，樣品在12h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.9965x+0.0195，r=0.9995，表明在8.750 μ g/ml～1.4mg/ml線性關(guān)系良好。鹽酸川芎嗪檢測波長為290 nm，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=4.0732x-0.0436，r=0.9995，表明在0.1～0.5 mg/ml線性關(guān)系良好，輔料對檢測無干擾。

[1]于蓮，張傳美，李愛臣，董宇，張喆，等.參芎明膠微球的制備工藝研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21(3)：667-668.

[2]Maria Angela Vandelli，Marcello Romagnoli，Aless-andra Monti，Manuela Gozzi， Paolo Guerra，F(xiàn)rancesco Rivasi，F(xiàn)lavio Forni.Journal of Controlled Release 2004，96(1)：67-84.

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