• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    4種滋陰藥含藥血清的免疫調(diào)節(jié)作用的比較研究*

    2013-11-13 06:58:14賴小東趙益尚廣彬徐國(guó)良孫有智江西中醫(yī)學(xué)院南昌330004
    江西中醫(yī)藥 2013年8期
    關(guān)鍵詞:一貫煎含藥淋巴細(xì)胞

    ★賴小東 趙益 尚廣彬 徐國(guó)良 孫有智(江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004)

    臨床上治療腫瘤的方法雖然各不相同,但滋陰清熱是其中最為常用的治療方法之一。滋陰藥可以提高機(jī)體的免疫功能來(lái)達(dá)到抗腫瘤的作用,例如六味地黃湯、山藥、墨旱蓮、枸杞子能提高免疫功能[1-6]。本實(shí)驗(yàn)選擇了4種常用的滋陰方:六味地黃丸、二至湯、二冬膏、一貫煎,考察他們對(duì)大鼠免疫功能的影響以及分泌IL-2的作用,比較其提高免疫的強(qiáng)弱,為研究抗腫瘤效應(yīng)提供基礎(chǔ)。

    1 材料和方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    清潔級(jí)SD大鼠,雄性,體重180±20g,由江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。批號(hào):SCXK(贛)2005-0001。

    1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

    天冬、麥冬、女貞子、墨旱蓮、北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地、枸杞子、川楝子,均購(gòu)于北京同仁堂藥店;六味地黃丸水蜜丸(北京同仁堂藥店,批號(hào):1004701)。

    二冬湯:精密稱取天冬200g、麥冬200g,第一次加入8倍量的水煎煮3小時(shí),第二次加入6倍量的水煎煮2小時(shí),合并濾液,過(guò)濾,濾液濃縮,密度為2g/mL。

    六味地黃丸:稱取六味地黃丸300g,加雙蒸水研磨至密度為2g/mL。

    二至湯:稱取女貞子200g、墨旱蓮200g,第一次加入8倍量的水煎煮3小時(shí),第二次加入6倍量的水煎煮2小時(shí),合并濾液,過(guò)濾,濾液濃縮,密度為2g/mL。

    一貫煎:稱取北沙參161g,麥冬161g,當(dāng)歸161g,生地483g,枸杞子193.2g,川楝子80.5g。第一次加入8倍量的水煎煮3小時(shí),第二次加入6倍量的水煎煮2小時(shí),合并濾液,過(guò)濾,濾液濃縮,密度為2 g/m L。

    1.3 主要試劑與儀器

    刀豆蛋白A:Sigma公司(批號(hào):20110918);脂多糖:Sigma公司(批號(hào):20110926);大鼠白細(xì)胞介素IL-2試劑盒:上海西塘生物科技有限公司;

    1.4 動(dòng)物分組與含藥血清制備

    清潔級(jí)SD大鼠30只,普通環(huán)境,自然光照,自由飲水、普通飼料,室溫20±2℃,適應(yīng)性飼養(yǎng)三天后,按體重隨機(jī)分為兩組:空白對(duì)照組、二冬湯組、六味地黃丸組、二至湯組、一貫煎組,每組6只。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn),確定給藥劑量為二冬湯7.99g/kg/天,六味地黃丸4.8g/kg/天,二至湯6.77g/kg/天,一貫煎15.4 g/kg/天,每天分2次以灌胃方式給藥,給藥5天后,取血,放在25℃室溫下靜置1小時(shí),凝血后2 000rpm離心20分鐘,取上清液,并將同一組大鼠的血清合并,56℃滅活30分鐘,然后用0.22μm醋酸纖維素膜過(guò)濾,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.5 大鼠脾淋巴細(xì)胞的制備

    無(wú)菌條件下剖開(kāi)雄性SD大鼠腹腔取脾,用生理鹽水沖洗干凈,在100目篩網(wǎng)上一邊研磨一邊用Hank's液沖洗,收集分離所得的脾細(xì)胞懸液,1 000r/分離心5分鐘,吸棄上清;添加紅細(xì)胞裂解液10mL,混勻脾細(xì)胞,靜置4-5分鐘,待紅細(xì)胞完全破碎后,1 000r/分離心5分鐘,吸棄上清剔除紅細(xì)胞,Hank's液沖洗3遍,用RPMI1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù),調(diào)整脾細(xì)胞濃度為1×108個(gè)/mL。

    1.6 4種含藥血清對(duì)ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖的影響

    在96孔培養(yǎng)板中分別加入含藥血清使終濃度為10%,20%,每個(gè)濃度組分別設(shè)相應(yīng)濃度的空白對(duì)照組血清最為對(duì)照組。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,另外設(shè)置一個(gè)不含血清組對(duì)照,每孔中加入1×108個(gè)/mL細(xì)胞懸液100μL,100μg/mL的ConA,使終濃度為10 μg/mL,將培養(yǎng)板置5%的CO2培養(yǎng)箱飽和濕度37℃培養(yǎng)72小時(shí)。于培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí),加入5mg/mL的MTT溶液20μL,置37℃5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。取出培養(yǎng)板,每孔加入200μL二甲基亞砜(DMSO),靜置20分鐘,使紫色結(jié)晶呈完全溶解。,以無(wú)細(xì)胞懸液孔調(diào)零,490nm處使用酶標(biāo)儀測(cè)OD值。

    1.7 4種含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞活性檢測(cè)

    在96孔培養(yǎng)板每孔中分別加入含藥血清使終濃度為10%,20%,每個(gè)濃度組分別設(shè)相應(yīng)濃度的空白血清組對(duì)照。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,每孔中加入1×108個(gè)/mL細(xì)胞懸液100μL,100μg/mL的LPS使終濃度為5μg/mL,將培養(yǎng)板置5%的CO2培養(yǎng)箱飽和濕度37℃培養(yǎng)72小時(shí)。于培養(yǎng)結(jié)束前4小時(shí),加入5mg/mL的MTT溶液10μL,置37℃5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。取出培養(yǎng)板,每孔加入200μL二甲基亞砜(DMSO),靜置20分鐘,使紫色結(jié)晶呈完全溶解。,以無(wú)細(xì)胞懸液孔調(diào)零,490nm處使用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值。

    1.8 4種含藥血清對(duì)ConA/LPS誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響

    用24孔培養(yǎng)板,每孔加入1×108個(gè)/mL脾細(xì)胞懸液1mL,并加入100μg/mL的ConA/LPS溶液,使終濃度為10/5μg/mL,根據(jù)前期研究結(jié)果,確定含藥血清加入量為10%,空白血清組加入相應(yīng)的空白血清血清,將培養(yǎng)板置37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)48h后,離心,沉淀,取上清液,備用。

    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS12.0分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,結(jié)果用(±s)表示,P<0.05表示差異有顯著性。

    2 結(jié)果

    2.1 4種含藥血清對(duì)ConA/LPS誘導(dǎo)的大鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響

    見(jiàn)表1、2。

    表1 4種含藥血清對(duì)ConA誘導(dǎo)的大鼠T淋巴細(xì)胞增殖的影響(n=3,-±s)

    表1 4種含藥血清對(duì)ConA誘導(dǎo)的大鼠T淋巴細(xì)胞增殖的影響(n=3,-±s)

    注:與空白血清組比較*P<0.05,**P<0.01

    組別空白血清+conA二冬含藥血清+conA六味含藥血清+conA二至含藥血清+conA一貫煎含藥血清+conA含藥血清濃度10%0.157±0.019 0.258±0.024**0.272±0.041**0.256±0.015**0.217±0.013*20%0.147±0.024 0.286±0.020**0.242±0.045*0.251±0.026**0.210±0.018*

    表2 4種含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的B大鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響(n=3,x-±s)

    表1結(jié)果表明,二冬湯含藥血清對(duì)ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖均具有促進(jìn)作用,與空白對(duì)照組比有極顯著性差異(P<0.01),且隨給藥濃度的增加其增殖效應(yīng)也增加,20%濃度的含藥血清對(duì)ConA誘導(dǎo)的大鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖作用最強(qiáng);六味地黃丸10%濃度、20%濃度的含藥血清都能增加T淋巴細(xì)胞的增殖,與空白對(duì)照組比有顯著性差異(P<

    0.05 ),其中10%濃度的效果強(qiáng)于20%濃度;二至湯和一貫煎對(duì)T淋巴細(xì)胞的增殖并未看出隨濃度增加效應(yīng)增大的趨勢(shì),二至湯組與空白對(duì)照組比較有極顯著性差異(P<0.01),一貫煎組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)。

    表2結(jié)果表明,二冬湯含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞的增殖均具有促進(jìn)作用,與空白對(duì)照組比有極顯著性差異(P<0.01),且隨給藥濃度的增加其增殖效應(yīng)也增加,20%含藥血清的增殖作用最強(qiáng);六味地黃丸兩個(gè)濃度的含藥血清都能引起B(yǎng)淋巴細(xì)胞增殖,與空白對(duì)照組比有顯著性差異(P<0.05);二至湯兩個(gè)濃度之間對(duì)B淋巴細(xì)胞的增殖無(wú)明顯差異,與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01);一貫煎對(duì)B淋巴細(xì)胞的增殖隨濃度增加效應(yīng)增大的趨勢(shì),20%濃度一貫煎組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。

    2.2 4種含藥血清對(duì)ConA/LPS誘導(dǎo)的大鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的影響

    見(jiàn)表3、4。

    表3 4種含藥血清對(duì)conA誘導(dǎo)的大鼠T淋巴細(xì)胞IL-2的影響(n=3,±s)

    表3 4種含藥血清對(duì)conA誘導(dǎo)的大鼠T淋巴細(xì)胞IL-2的影響(n=3,±s)

    注:與空白血清組比較*P<0.05,**P<0.01

    IL-2(pg/m L)238.24±10.72 378.24±14.38**361.10±35.72**342.0±22.15**319.19±10.53**組別脾+conA+空白血清脾+conA+二冬血清脾+conA+六味血清脾+conA+二至含藥血清脾+conA+一貫煎含藥血清

    表4 4種含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠B淋巴細(xì)胞IL-2的影響(n=3,±s)

    表4 4種含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠B淋巴細(xì)胞IL-2的影響(n=3,±s)

    注:與空白血清組比較*P<0.05,**P<0.01

    組別脾+LPS+空白血清脾+LPS+二冬血清脾+LPS+六味血清脾+LPS+二至血清脾+LPS+一貫煎含藥血清IL-2(pg/m L)150.62±6.75 218.24±10.14**168.71±7.95*183.00±5.71**159.19±6.75

    表3、4表明,4種滋陰藥含藥血清可以促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的大鼠脾淋巴細(xì)胞分泌白介素-2(IL2),與空白血清組比有極顯著性差異(P<0.01),其中以二冬膏含藥血清的作用最為明顯。對(duì)于LPS誘導(dǎo)的大鼠B淋巴細(xì)胞分泌IL-2的作用,二冬含藥血清的作用最為明顯,與空白血清組比有極顯著性差異(P<0.01)。

    3 討論

    中藥抗腫瘤的機(jī)理有很多種,其中滋陰藥抗腫瘤的機(jī)制主要集中在:抑制細(xì)胞增殖、提高機(jī)體免疫力、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等,其中提高機(jī)體免疫力是一個(gè)重要機(jī)制。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為,機(jī)體的免疫功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。當(dāng)宿主免疫功能低下或受抑制時(shí),腫瘤發(fā)生率增高,而在腫瘤進(jìn)行性生長(zhǎng)時(shí)腫瘤患者的免疫功能受抑制,二者也互為因果[7]。因此,如何增強(qiáng)機(jī)體免疫功能,更好地發(fā)揮機(jī)體的抗腫瘤免疫機(jī)制,已成為目前腫瘤研究的重要課題之一??v觀腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程,腫瘤細(xì)胞必須克服內(nèi)在,細(xì)胞自主和外在,免疫介導(dǎo)的屏障才能成瘤,宿主的免疫功能是決定腫瘤發(fā)生和發(fā)展的最后關(guān)卡,只有當(dāng)癌變細(xì)胞通過(guò)各種免疫逃避機(jī)制逃過(guò)免疫監(jiān)視,克服免疫功能的控制,腫瘤才能進(jìn)展或致死宿主,因此從這一角度講,腫瘤可能是一種免疫學(xué)。目前中藥抗腫瘤有扶正固本法、除痰散結(jié)法、化積消滯法、清熱解毒法、活血化瘀法、滋陰清熱法等,是現(xiàn)代中藥抗腫瘤的基本療法。藥物集中在:扶正類,如人參、甘草、黃芪、黨參;消積類,如陳皮、莪術(shù)、豬苓;還要解毒類,如半枝蓮、仙鶴草、夏枯草、白花蛇舌草[8]。目前臨床上治療腫瘤的方法雖然各不相同,但滋陰清熱是其中最為常用的治療方法之一。臨床以養(yǎng)陰清熱法治療惡性腫瘤,大都可取得提高生存質(zhì)量,減輕化療毒副反應(yīng)的效果[9-10]。大量地臨床實(shí)踐說(shuō)明陰虛與癌瘤的發(fā)生發(fā)展之間存在一定的相互關(guān)聯(lián)性。對(duì)此,我們?cè)诜治瞿壳澳[瘤發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上,結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論,提出了“陰虛癌瘤相關(guān)”的新假說(shuō),認(rèn)為滋陰法能改變腫瘤發(fā)生的內(nèi)環(huán)境,既可有效預(yù)防惡性腫瘤的發(fā)生,也能抑制惡性腫瘤的生長(zhǎng)[11]。

    脾臟擁有全身循環(huán)T淋巴細(xì)胞的25%,直接參與細(xì)胞免疫,并對(duì)外周血中T細(xì)胞亞群的分布具有重要的調(diào)節(jié)作用,脾臟對(duì)T淋巴細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)作用是腫瘤免疫的一個(gè)重要環(huán)節(jié),B淋巴細(xì)胞約占脾內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)的55%,在腫瘤抗原刺激下轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞,繼而分泌特異性抗腫瘤的免疫球蛋白IgG,且具有抗原提呈能力[12]。白介素-2(IL-2)是一種在白細(xì)胞或者免疫細(xì)胞間相互作用的淋巴細(xì)胞因子,與血細(xì)胞生長(zhǎng)因子同屬細(xì)胞因子,兩者相互協(xié)調(diào)、相互作用,共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能,并在傳遞信息,激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞,介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用,同時(shí)可以促使T/B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)分泌抗體及干擾素,并產(chǎn)生抗病毒、抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等作用[13]。

    本從本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可見(jiàn),四種滋陰藥含藥血清都可以促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞的增殖、促進(jìn)IL-2的分泌,提示滋陰藥主要是通過(guò)提高腫瘤細(xì)胞的免疫功能達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。

    [1]孫學(xué)海,安志遠(yuǎn),翁福海.六味地黃丸增強(qiáng)免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究[J].天津中醫(yī),1994,14(6):40.

    [2]王彥武,李鳳文,黃超培.墨旱蓮提取物對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J].應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2008,14(6):354-356.

    [3]許小華,郝鵬飛,楊云,等.墨旱蓮多糖對(duì)正常小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)方劑學(xué)雜志,2010,16(5):181-182.

    [4]張曉宇.枸杞子抗癌作用及臨床研究概述[J].職業(yè)與健康,2007,23(18):1657-1658.

    [5]程林,陳斌,蔡寶昌.山藥及其麩炒品的多糖部位對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2006,17(2):86-89.

    [6]趙國(guó)華,陳宗道,李志孝,等.山藥多糖對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2003,25(1):110-112.

    [7]Tsai JP,Chen HW,Cheng ML,et al.Analysis of host versustumor interaction in cancerpatients:opposing role of transforming growth factor-betal and interleukin-6 in the development of in situ tumor immunity[J].Immunobio1,2005,210(9):661-671.

    [8]劉建明,陳素紅,呂圭源.扶正、化積、解毒中藥抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2011,7(3):155-156.

    [9]朱彩平,張聲華.枸杞多糖對(duì)H22肝癌小鼠的抑癌作用[J].中國(guó)公共衛(wèi)生,2006,22(6):717-71.

    [10]徐文清,高文遠(yuǎn),沈秀,等.銀耳孢子多糖抑制腫瘤及放射增效作用的研究[J].中國(guó)生化藥物雜志,2006,27(6):351-354.

    [11]孫有智,劉紅寧,朱衛(wèi)豐,等.“陰虛癌瘤相關(guān)”假說(shuō)的提出及其意義[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,20(4):1-5.

    [12]謝電,陳耀星,王子旭,等.單色光對(duì)脂多糖應(yīng)激后肉雞脾臟組織結(jié)構(gòu)及脾細(xì)胞免疫 功能的影響[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2007,12(1):13-16.

    [13]肖嘯,楊繼生,李松彪,等,白介素-2對(duì)臨床意義的研究[J].山東畜牧醫(yī)藥,2008,29(5):45-46

    猜你喜歡
    一貫煎含藥淋巴細(xì)胞
    一貫煎治療無(wú)結(jié)石慢性膽囊炎臨床療效分析
    遺傳性T淋巴細(xì)胞免疫缺陷在百草枯所致肺纖維化中的作用
    一貫煎加減聯(lián)合耳穴壓豆治療2型糖尿病伴抑郁焦慮障礙的臨床觀察
    急救含藥姿勢(shì)要正確
    乳病消片含藥血清對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:40:44
    急慢性膽囊炎應(yīng)用一貫煎加味治療的臨床效果分析
    探討CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在HCV早期感染的作用
    冠心II號(hào)含藥血清對(duì)心肌缺血再灌注樣損傷的保護(hù)作用
    一貫煎結(jié)合替普瑞酮治療慢性萎縮性胃炎的臨床觀察
    乳腺癌原發(fā)灶T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與預(yù)后的關(guān)系
    黄色视频,在线免费观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲最大成人中文| 欧美又色又爽又黄视频| 久久中文看片网| 夜夜爽天天搞| 久久伊人香网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲av电影在线进入| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久99热这里只有精品18| 亚洲七黄色美女视频| 99热6这里只有精品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 精品不卡国产一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 制服诱惑二区| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 午夜激情福利司机影院| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 老司机午夜十八禁免费视频| 99国产精品99久久久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| АⅤ资源中文在线天堂| a在线观看视频网站| 91麻豆av在线| 婷婷精品国产亚洲av| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 丝袜美腿诱惑在线| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产伦在线观看视频一区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久中文字幕一级| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精品一及| 亚洲欧美日韩高清专用| 成人精品一区二区免费| 午夜福利18| 亚洲av电影在线进入| 久久这里只有精品19| 可以在线观看毛片的网站| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲男人天堂网一区| 午夜免费激情av| 午夜久久久久精精品| 国产黄片美女视频| 亚洲男人天堂网一区| 给我免费播放毛片高清在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品,欧美在线| 日韩高清综合在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲专区中文字幕在线| 男女之事视频高清在线观看| 校园春色视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久这里只有精品中国| 在线观看免费日韩欧美大片| 麻豆一二三区av精品| 日韩免费av在线播放| 哪里可以看免费的av片| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 看片在线看免费视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲精品av麻豆狂野| 精品电影一区二区在线| 亚洲九九香蕉| 婷婷丁香在线五月| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美黄色片欧美黄色片| av福利片在线| 国产熟女xx| 亚洲自拍偷在线| 一二三四社区在线视频社区8| av视频在线观看入口| tocl精华| 成年女人毛片免费观看观看9| 一本精品99久久精品77| 国产亚洲精品av在线| 亚洲专区国产一区二区| av中文乱码字幕在线| 香蕉av资源在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲欧美日韩高清专用| 婷婷丁香在线五月| 99精品在免费线老司机午夜| 国语自产精品视频在线第100页| 男人舔女人的私密视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 我要搜黄色片| 在线播放国产精品三级| 久久久久久人人人人人| 天天添夜夜摸| 日本三级黄在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲中文字幕日韩| 床上黄色一级片| 午夜激情福利司机影院| 欧美日韩精品网址| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 首页视频小说图片口味搜索| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲熟妇熟女久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日日夜夜操网爽| 国产三级中文精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产成人啪精品午夜网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久香蕉激情| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精华一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| www日本黄色视频网| 精品久久久久久久末码| 国产激情欧美一区二区| 村上凉子中文字幕在线| 国产精品久久视频播放| 在线国产一区二区在线| 99久久精品热视频| 三级毛片av免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 两性夫妻黄色片| 国产精品野战在线观看| 午夜a级毛片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产99久久九九免费精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产av一区在线观看免费| 三级国产精品欧美在线观看 | 美女 人体艺术 gogo| 欧美日韩国产亚洲二区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜激情av网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久草成人影院| 国产精品一区二区精品视频观看| 淫秽高清视频在线观看| www.熟女人妻精品国产| 午夜福利高清视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲成人精品中文字幕电影| 成人手机av| 一级毛片高清免费大全| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久国产成人免费| netflix在线观看网站| av欧美777| tocl精华| 精品福利观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 欧美中文综合在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 黄色丝袜av网址大全| ponron亚洲| 18禁美女被吸乳视频| 中文在线观看免费www的网站 | 精品欧美一区二区三区在线| 日韩免费av在线播放| 欧美成人性av电影在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 视频区欧美日本亚洲| 人妻久久中文字幕网| 曰老女人黄片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 欧美色视频一区免费| 男女那种视频在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 免费观看精品视频网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 免费在线观看黄色视频的| www日本在线高清视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲男人的天堂狠狠| 两个人的视频大全免费| 午夜福利在线观看吧| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久久久国内视频| 天天一区二区日本电影三级| 91成年电影在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产三级中文精品| 午夜精品在线福利| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲国产精品久久男人天堂| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产av又大| 又黄又粗又硬又大视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久精品91蜜桃| 制服丝袜大香蕉在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 婷婷精品国产亚洲av在线| 色播亚洲综合网| 一级毛片精品| 精品国产美女av久久久久小说| 久久这里只有精品19| 国产视频一区二区在线看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 中文字幕最新亚洲高清| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久久久精品国产欧美久久久| av天堂在线播放| 国产精华一区二区三区| www日本在线高清视频| 国产三级黄色录像| 91老司机精品| 丰满的人妻完整版| 欧美一级毛片孕妇| 国产av在哪里看| 亚洲成av人片免费观看| 麻豆成人av在线观看| 天天添夜夜摸| 高潮久久久久久久久久久不卡| av在线播放免费不卡| 午夜老司机福利片| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品久久视频播放| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久精品影院6| 国产激情久久老熟女| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一本一本综合久久| 日本成人三级电影网站| 欧美黑人巨大hd| 9191精品国产免费久久| 国产午夜精品久久久久久| 日韩欧美在线二视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 禁无遮挡网站| 在线a可以看的网站| 性色av乱码一区二区三区2| 一级毛片精品| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品永久免费网站| 亚洲自拍偷在线| 操出白浆在线播放| 国产精品久久久久久久电影 | 99国产综合亚洲精品| 亚洲av成人精品一区久久| 美女午夜性视频免费| 无人区码免费观看不卡| 日韩欧美 国产精品| 欧美黑人巨大hd| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品色激情综合| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美性猛交黑人性爽| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 免费av毛片视频| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 老汉色∧v一级毛片| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产探花在线观看一区二区| www日本黄色视频网| 国内精品久久久久久久电影| 不卡一级毛片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美精品亚洲一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 麻豆国产97在线/欧美 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美3d第一页| 午夜影院日韩av| 亚洲人与动物交配视频| 日韩欧美 国产精品| 国产精华一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 男人的好看免费观看在线视频 | 麻豆国产av国片精品| 久热爱精品视频在线9| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久精品国产综合久久久| 变态另类丝袜制服| 亚洲精品av麻豆狂野| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产av一区在线观看免费| 国产又色又爽无遮挡免费看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 精品电影一区二区在线| 日本一区二区免费在线视频| 日韩欧美 国产精品| 成人手机av| 欧美成人午夜精品| 男插女下体视频免费在线播放| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日本熟妇午夜| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲午夜理论影院| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 十八禁网站免费在线| 天堂影院成人在线观看| 1024香蕉在线观看| 日本一本二区三区精品| 亚洲av成人av| 丁香六月欧美| 午夜福利免费观看在线| 9191精品国产免费久久| a级毛片a级免费在线| 国产av麻豆久久久久久久| www.999成人在线观看| 中文在线观看免费www的网站 | 成人精品一区二区免费| 国产一区二区在线av高清观看| 午夜久久久久精精品| 丰满的人妻完整版| 精品第一国产精品| 天堂动漫精品| 可以在线观看毛片的网站| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日日夜夜操网爽| 国产av不卡久久| 中文字幕久久专区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲无线在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲人成77777在线视频| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲性夜色夜夜综合| 黑人操中国人逼视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美乱色亚洲激情| cao死你这个sao货| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久精品91无色码中文字幕| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品在线美女| 午夜精品久久久久久毛片777| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美色视频一区免费| 老汉色∧v一级毛片| 99在线视频只有这里精品首页| 国产午夜福利久久久久久| 青草久久国产| 国产爱豆传媒在线观看 | 国产一区在线观看成人免费| 国产久久久一区二区三区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜成年电影在线免费观看| 国产91精品成人一区二区三区| 九色国产91popny在线| 亚洲精品色激情综合| 欧美一级a爱片免费观看看 | 欧美激情久久久久久爽电影| 精品久久久久久久末码| 精品国产亚洲在线| 可以在线观看的亚洲视频| 好男人电影高清在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 波多野结衣高清无吗| 免费在线观看成人毛片| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 日本黄色视频三级网站网址| 男女之事视频高清在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 动漫黄色视频在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美3d第一页| 国产精品av视频在线免费观看| 级片在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一本综合久久免费| 国产精品 国内视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜免费激情av| 我的老师免费观看完整版| bbb黄色大片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲国产看品久久| 观看免费一级毛片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人永久免费在线观看视频| 欧美在线一区亚洲| 国产午夜福利久久久久久| 久99久视频精品免费| 午夜福利在线在线| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品色激情综合| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美日韩乱码在线| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲自拍偷在线| 国产成人啪精品午夜网站| 黄片小视频在线播放| 成人欧美大片| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲人成电影免费在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产久久久一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 看黄色毛片网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 精品不卡国产一区二区三区| 久99久视频精品免费| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲精品在线美女| 免费在线观看亚洲国产| 久久亚洲精品不卡| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 国内精品一区二区在线观看| 久久久久九九精品影院| 97碰自拍视频| 国产精品久久电影中文字幕| 十八禁网站免费在线| 91在线观看av| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲国产欧美一区二区综合| 一区二区三区高清视频在线| 国产97色在线日韩免费| 欧美午夜高清在线| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 制服丝袜大香蕉在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 麻豆成人午夜福利视频| 搡老岳熟女国产| 最新美女视频免费是黄的| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲最大成人中文| 欧美乱妇无乱码| 国产精品影院久久| 国产精品永久免费网站| 久久精品综合一区二区三区| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久精品成人免费网站| 亚洲 国产 在线| 午夜福利成人在线免费观看| 长腿黑丝高跟| 天天一区二区日本电影三级| 欧美乱妇无乱码| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产三级黄色录像| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美乱妇无乱码| 2021天堂中文幕一二区在线观| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品亚洲美女久久久| 男女视频在线观看网站免费 | 精品久久蜜臀av无| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产午夜精品论理片| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美又色又爽又黄视频| 在线播放国产精品三级| or卡值多少钱| 小说图片视频综合网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品电影一区二区三区| 国产成人精品无人区| 不卡一级毛片| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲av成人av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 香蕉国产在线看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 91老司机精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产单亲对白刺激| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 老司机深夜福利视频在线观看| 日本一二三区视频观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 正在播放国产对白刺激| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲一区中文字幕在线| 操出白浆在线播放| 草草在线视频免费看| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩av在线大香蕉| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 老司机福利观看| 国产黄a三级三级三级人| 婷婷亚洲欧美| 三级毛片av免费| 国产免费av片在线观看野外av| 一级毛片精品| 国产精品久久视频播放| 国产男靠女视频免费网站| 中文字幕最新亚洲高清| 香蕉丝袜av| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲最大成人中文| 操出白浆在线播放| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲精品在线观看二区| 午夜久久久久精精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲免费av在线视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲国产精品合色在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 伦理电影免费视频| 日韩欧美免费精品| 色哟哟哟哟哟哟| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲国产欧美人成| 一级黄色大片毛片| 成人国语在线视频| 一二三四社区在线视频社区8| 成人国产综合亚洲| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品久久久人人做人人爽| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美成狂野欧美在线观看| av国产免费在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久人人精品亚洲av| 久久久精品大字幕| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人国产一区最新在线观看| 中文在线观看免费www的网站 | 动漫黄色视频在线观看| 欧美一级毛片孕妇| videosex国产| 亚洲中文字幕日韩| 成熟少妇高潮喷水视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本黄色视频三级网站网址| 精品欧美一区二区三区在线| 色综合站精品国产| 欧美成人午夜精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品九九99| 熟女电影av网| 人妻久久中文字幕网| 一个人免费在线观看的高清视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久香蕉国产精品| 全区人妻精品视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲av电影在线进入| 日本黄大片高清| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品av久久久久免费| 色哟哟哟哟哟哟| 色尼玛亚洲综合影院| 日本免费a在线| 亚洲 国产 在线| 99热这里只有是精品50|