肝寧膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張 海，張 力，李欽青，閻文斌，季新燕，劉亞明

（1.山西仁源堂藥業(yè)有限公司，山西 太原 030043；2.山西中醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030024）

肝寧膠囊由斑蝥、紫草、糯米等3 味中藥組成，具有清熱解毒、利尿、化瘀散結(jié)之功效，用于輕度和中度慢性乙型肝炎屬熱毒血瘀證患者。為了控制該品的質(zhì)量，本文采用薄層色譜法對(duì)紫草進(jìn)行了鑒別研究，采用氣相色譜法對(duì)斑蝥素進(jìn)行了含量測(cè)定研究。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 GC－2010 氣相色譜儀（日本島津公司），KQ-250E 型醫(yī)用超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），AE240 電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試藥 乙腈（美國(guó)TEDIA 公司）為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。肝寧膠囊（山西仁源堂藥業(yè)有限公司），斑蝥素對(duì)照品（111783-200604），紫草對(duì)照藥材（121430-200802），均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 紫草的薄層鑒別

2.1 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物0.6 g，加乙醇10 mL，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL 溶解，作為供試品溶液。

2.2 對(duì)照藥材溶液的制備

取紫草對(duì)照藥材0.5 g，按供試品溶液的制備方法制成對(duì)照藥材溶液。

2.3 薄層色譜鑒別

照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010 年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯－甲酸（5∶1∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾［1］。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 薄層色譜鑒別圖

3 斑蝥素的含量測(cè)定

3.1 色譜條件

以甲基硅橡膠（SE-30）為固定相，涂布濃度為10%，柱長(zhǎng)30 m，柱溫170 ℃；理論板數(shù)按斑蝥素峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。

3.2 對(duì)照品溶液的制備

取斑蝥素對(duì)照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL 含0.04 mg 的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物3 g，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置10 mL 量瓶中，精密加入乙酸乙酯2 mL，稱定重量，超聲處理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，放置1 h，取上清液，即得。

3.4 空白試驗(yàn)

按3.3 項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備空白溶液，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果空白溶液色譜圖中，在與斑蝥素對(duì)照品及供試品溶液色譜圖中相應(yīng)的保留時(shí)間處，無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)斑蝥素的測(cè)定無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2～圖4。

圖2 斑蝥素對(duì)照品GC 圖

圖3 樣品GC 圖

圖4 空白樣品GC 圖

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取斑蝥素對(duì)照品適量，加乙酸乙酯制成每1 mL 含138 μg 的溶液。分別精密移取1 mL、3 mL、5 mL、7 mL、9 mL 于10 mL 量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，各精密吸取1 μL 注入氣相色譜儀中，測(cè)定，以斑蝥素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=420 667x-2 372，r=0.999 9。表明斑蝥素在0.013 8 μg～0.124 2 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取斑蝥素對(duì)照品溶液（41.4 μg/mL）1 μL，連續(xù)進(jìn)樣5 次，測(cè)得5 次峰面積分別是26 745、26 884、26 985、26 712、26 895，平均值為26 844.2，RSD=0.42%，表明精密度良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液1 μL，每隔2 h 進(jìn)樣測(cè)定。斑蝥素峰面積分別為：333 546、334 810、332 045、331 862、338 085，平均值為334 069.6，RSD=0.76%，表明供試樣品在8 h 內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品，按3.3 項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備5 份供試品溶液。精密吸取供試品各溶液1 μL，進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算含量，5 次測(cè)定含量分別是0.103 mg/g、0.104 mg/g、0.103 mg/g、0.101 mg/g、0.102 mg/g，平均含量為0.102 6 mg/g，RSD=1.45%，表明重現(xiàn)性良好。

3.9 加樣回收試驗(yàn)

取上述批號(hào)的供試品5 份（含量為0.102 6 mg/g），每份0.5 g，精密稱定，分別精密加入斑蝥素對(duì)照品乙酸乙酯液（0.050 8 mg/mL）1.0 mL，按供試品制備方法制備，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，斑蝥素的回收率96.06%～100.6%，平均回收率為98.466%，RSD=1.92%。

3.10 含量測(cè)定

取3 個(gè)批號(hào)的樣品分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果3 批樣品中斑蝥素的含量分別為0.032 mg/粒，0.035 mg/粒，0.036 mg/粒（n=2）。

4 討論

中國(guó)藥典2010 年一部規(guī)定斑蝥飲片中斑蝥素的含量為0.25%～0.65%［1］，用量為0.03 g～0.06 g，則斑蝥素每天的用量在75 μg～390 μg 之間安全有效。肝寧膠囊用法與用量為每日3 次，每次1 粒，則規(guī)定每粒肝寧膠囊中斑蝥素的含量在20 μg～80 μg 之間是安全的。通過(guò)對(duì)肝寧膠囊中的紫草的薄層色譜鑒別，斑蝥素的氣相色譜含量測(cè)定，可以控制本品的質(zhì)量，確保用藥的安全有效。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.北京：中國(guó)中醫(yī)藥科技出版社，2010：312.