黃紅糖漿的提取工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 盧瀟瀟 鐘強(qiáng)* 鄧中銀

（1.江西省萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院 萍鄉(xiāng) 337000；2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004）

黃紅糖漿（HHS）是由黃精、紅參等4位中藥材制成的中藥復(fù)方制劑，具有益氣養(yǎng)陰，健脾運(yùn)津、生津止渴之功效，臨床常用于陰虛火旺、自汗盜汗、五心煩熱等證的治療，效果顯著。其中多糖類是主要活性成分之一，具有降血脂、延緩衰老、增強(qiáng)免疫以及抗病毒等諸多藥理作用[1]。多糖提取一般有熱水浸提法、堿水提取、超聲提取法等方法[2]。本文根據(jù)方中藥材的理化性質(zhì)，以總多糖含量為指標(biāo)，采用正交試法優(yōu)選黃紅糖漿的提取工藝條件，并建立其方中黃精藥材的薄層鑒別方法。以期為該制劑的研究開發(fā)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV2550型紫外分光光度計(jì)（日本島津）；BS224S型電子分析天平（北京Sartorius）；6202型搖擺式高速中藥粉碎機(jī)（北京環(huán)亞天元機(jī)械技術(shù)有限公司）。KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。DFY-500型搖擺式高速中藥粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

1.2 材料

D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：110833-200904，含量測(cè)定用），黃精對(duì)照藥材（批號(hào)：121341-200602），購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；黃精藥材系百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.的干燥根莖，批號(hào)：100319，購(gòu)于黃慶仁大藥房，經(jīng)檢測(cè)符合《中國(guó)藥典》2010年版一部相關(guān)項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)；試劑：甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法及結(jié)果

2.1 總多糖含量測(cè)定

2.1.1 苯酚溶液的配制 稱取苯酚6g，加入蒸餾水94mL，搖勻，置棕色容量瓶中備用。

2.1.2 葡萄糖對(duì)照品溶液的制備 稱取吸取D-無(wú)水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品9.99mg置于100mL的容量瓶中，加雙蒸水溶解稀釋到刻度，得到濃度為99.9μg/mL溶液，搖勻，備用。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別量取D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0mL分置于10mL具塞試管中，各加雙蒸水到2.0mL，再加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%苯酚溶液1.0mL，用渦旋儀器混勻，迅速加入濃硫酸5.0mL，再渦旋使之均勻，放置5min后，置沸水浴中加熱15min，取出迅速放在冰水中冷卻至室溫；另以雙蒸水2.0mL，加苯酚和濃硫酸，同上操作做為空白對(duì)照，在最大吸收波長(zhǎng)（490nm）處測(cè)定吸光度值，結(jié)果由吸光度值（A）對(duì)溶液濃度（C）線性回歸，得回歸方 程 Y=0.0525X+0.0989，R=0.9993，葡 萄 糖 在2.5-12.49μg/mL范圍內(nèi)呈線性。

2.1.4 供試品溶液的制備及測(cè)定 精密量取提取液1.5mL，加入95%乙醇，使含醇量達(dá)80%，于冰箱中靜置過(guò)夜，沉淀用無(wú)水乙醇洗滌至洗出液無(wú)色，揮干乙醇，用蒸餾水溶解，于250 mL量瓶中定容。精密吸取0.3 mL上述溶液于10 mL具塞試管中，加水至1 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL，再精密加入硫酸溶液5 mL，搖勻，置100℃水浴中加熱15 min，取出室溫下冷卻30 min。同法制得空白對(duì)照液。于490nm處測(cè)定吸光度，算得多糖的質(zhì)量濃度。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝

準(zhǔn)確稱取處方量藥材（過(guò)藥典1號(hào)篩）置500 mL圓底燒瓶中，分別按正交試驗(yàn)表?xiàng)l件，加入提取溶劑，回流提取，趁熱過(guò)濾，合并濾液，待溶液冷卻后用相應(yīng)的溶劑定容，搖勻，即得。因素水平表見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)表及結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 正交試驗(yàn)的因素與水平

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表3 正交試驗(yàn)方差分析表

由表3中極差R可知，以總多糖含量為指標(biāo)，各因素影響因素主次順序?yàn)樘崛〈螖?shù)（C）＞提取時(shí)間（B）＞加水量（A），由方差分析結(jié)果可知，提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)總多糖提取量有顯著性影響，加水倍數(shù)對(duì)其無(wú)顯著性影響。綜合分析，總多糖的最佳提取條件為A3B3C3，即：加水10倍量，提取3次，每次1.5h。

2.3 驗(yàn)證工藝研究

取處方量藥材共500g，加8倍量水，提取3次，每次2h，合并濾液，減壓濃縮至藥液濃度約為0.5g/mL，測(cè)定樣品液中總多糖含量?？偠嗵呛科骄鶠?5.5 mg/g。

2.4 黃紅糖漿中黃精的鑒別試驗(yàn)研究

2.4.1 供試品溶液的制備 取HHS樣品40g，加水10mL稀釋。用水飽和的正丁醇振搖萃取3次，每次50mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)?mL甲醇使溶解。作為供試品。

2.4.2 黃精對(duì)照藥材溶液的制備 取黃精對(duì)照藥材3g，加水50mL，提取2次，每次2h，合并濾液，濾過(guò)。提取液濃縮至50mL，再同2.4.1項(xiàng)下方法，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.4.3 缺黃精陰性對(duì)照溶液的制備 取不含黃精的糖漿樣品，按2.4.1項(xiàng)下方法同法制備陰性對(duì)照溶液。

2.4.4 薄層鑒別 吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮（6：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與黃精對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置上顯一個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性樣品在相同位置上無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)。（見(jiàn)圖1）。

圖1 黃紅糖漿薄層色譜圖

4 討論

4.1 本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)黃紅糖漿的提取工藝和其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，由于方中黃精、紅參等藥材中主要含多糖類成分，且多糖具有調(diào)節(jié)免疫力和抗氧化作用，黃精多糖能保護(hù)APP轉(zhuǎn)基因小鼠海馬CA1區(qū)突觸結(jié)構(gòu)[3]，因此，本研究選擇總多糖含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)處方工藝進(jìn)行了優(yōu)化。

4.2 應(yīng)用薄層色譜法（TLC）鑒別糖漿中黃精的過(guò)程中，比較了不同展開系統(tǒng)及不同的薄層板，結(jié)果以氯仿-丙酮（6：3）最為合適。黃精對(duì)照藥材與樣品色譜圖在對(duì)應(yīng)位置斑點(diǎn)清晰，且陰性樣品在相同位置無(wú)干擾。

4.3 總多糖是中藥補(bǔ)益和調(diào)節(jié)免疫作用的有效成分，應(yīng)作為質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，梁學(xué)政等[4]在優(yōu)化弱視明口服液的提取工藝過(guò)程中也采用苯酚-硫酸法測(cè)定總多糖的含量，并以總多糖作為工藝評(píng)價(jià)的指標(biāo)。但是苯酚-硫酸法測(cè)定總多糖的含量干擾因素較多，樣品的處理必須注意平行操作，且所有樣品應(yīng)在同一條件下測(cè)定，以減少偶然誤差。此外，也有文獻(xiàn)報(bào)道[5]使用比色法測(cè)定總多糖的含量。

[1]張庭廷，夏曉凱，陳傳平，等.黃精多糖的生物活性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12（7）：42.

[2]張偉杰，王鵬，林茜，等.3種中藥多糖的提取工藝[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（16）：19-23.

[3]成威，田偉，李友元，等.黃精多糖對(duì)APP轉(zhuǎn)基因小鼠海馬CA1區(qū)突觸結(jié)構(gòu)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（10）：165-167.

[4]梁學(xué)政，陳惠紅，唐勇琛，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選弱視明口服液的提取工藝[J].中國(guó)藥房，2011，22（31）：2 914-2 916.

[5]喻雄華，張大舜.不同方法炮制的黃精中多糖含量的比較[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（11）：1 306-1 307.