鴉膽子油亞納米乳注射液安全性試驗

★ 崔明超 盧歡 歐陽強 潘金火

（1.浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 寧波 315100；2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004；3.南京蘇中藥物研究有限公司 南京 210016；4.南京中醫(yī)藥大學(xué) 南京 210046）

鴉膽子油亞納米乳注射液作為注射劑應(yīng)用于臨床，為了保證注射劑的質(zhì)量、確保用藥安全，除進行必要的理化研究之外，還需要從藥理學(xué)研究的角度對制劑進行質(zhì)量檢查，保證某些有害的物質(zhì)和某些不良反應(yīng)的強度不超過規(guī)定的限度。這些試驗統(tǒng)稱為制劑的安全性限度試驗。通常包括熱原檢查、刺激性試驗、過敏性試驗、溶血性試驗和安全性檢查限度等項目。本文主要對制劑溶血性試驗、過敏試驗、熱原試驗、局部血管刺激性試驗進行考察。

1 儀器與試藥

1.1 動物

日本大耳白兔，南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，證號：12102；NIH小鼠，19-22g，雌雄各半，南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：12102；7月齡Beagle狗4只，體重6.8-7.8kg，♂♀各半。購于上海市新岡實驗動物場，合格證號：滬動合證字11219號（上海市實驗動物管理委員會，2012年7月6日頒發(fā)），常規(guī)飼料喂養(yǎng)，動物室室溫22℃-25℃，相對濕度75%。

1.2 試藥

鴉膽子油亞納米乳注射液由江蘇蘇中藥業(yè)提供，批號120418，包裝規(guī)格100mL/瓶，含量90mg/mL。對照物為脂肪乳注射液（商品名：英脫利匹特，華瑞制藥有限公司生產(chǎn)）批號：1204150-2B。生理鹽水，蒸餾水，消毒酒精。

1.3 儀器

兔夾，紅外燈，剪毛刀，刀片，脫脂棉，離心管，竹簽，80-2離心機（上海手術(shù)器械廠）；KQ-5OB型超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶血性試驗

2.1.1 試驗方法 取兔血用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，用生理鹽水洗3次，配成2%紅細胞生理鹽水溶液。取試管9支，在試管中放入2%紅細胞生理鹽水5mL，然后每3管各加蒸餾水、生理鹽水、鴉膽子油亞納米乳注射液1mL，混勻，37℃水浴孵育30min，離心，去上清。每管沉淀的紅細胞用1mL生理鹽水稀釋，吸取該液20μL加紅細胞稀釋液2mL，計數(shù)紅細胞[1]。

2.1.2 結(jié)果 鴉膽子油亞納米乳注射液組紅細胞數(shù)與生理鹽水組相比較無差異，說明鴉膽子油亞納米乳注射液對兔紅細胞無溶血現(xiàn)象。蒸餾水組紅細胞數(shù)比生理鹽水組低，表明有溶血現(xiàn)象（詳見表1）。

2.1.3 結(jié)論 鴉膽子油亞納米乳注射液對家兔紅細胞無溶血反應(yīng)。

表1 鴉膽子油亞納米乳注射液溶血試驗

2.2 過敏試驗

2.2.1 機制 速發(fā)型過敏反應(yīng)的機制是在抗原型物質(zhì)刺激下機體產(chǎn)生以免疫球蛋白（IgE）為主的相應(yīng)抗體，當(dāng)IgE與肥大細胞及嗜堿性細胞表面受體結(jié)合而使機體處于過敏狀態(tài)。當(dāng)再次接觸相應(yīng)的抗原性物質(zhì)時，細胞表面的IgE受體被激活，使肥大細胞和嗜堿性細胞脫顆粒，釋放出組胺、慢反應(yīng)物質(zhì)、前列腺素等，導(dǎo)致平滑肌痙攣，毛細血管擴張，通透性增加，動物出現(xiàn)呼吸困難，發(fā)紺，抽搐等癥狀，甚至死亡。

2.2.2 試驗方法 豚鼠體重270±30g，鴉膽子油亞納米乳注射液組每只間日腹腔注射鴉膽子油亞納米乳注射液0.5mL；卵白蛋白（OA）組每只每日腹腔注射5%卵白蛋白生理鹽水溶液0.5mL，連續(xù)3次。于第1次注射后第14d及第21d各取豚鼠3只，戊巴比妥鈉麻醉，鴉膽子油亞納米乳注射液組靜脈注射鴉膽子油亞納米乳注射液1mL，卵白蛋白組靜脈注射0.05%卵白蛋白1ml攻擊，觀察是否出現(xiàn)過敏反應(yīng)或死亡[2]。

2.2.3 結(jié)果 卵白蛋白致敏的豚鼠在致敏第14d及第21d進行攻擊，在抗原攻擊后0.5-2min出現(xiàn)呼吸困難、發(fā)紺、抽搐，在15min內(nèi)6只豚鼠3只死亡。鴉膽子油亞納米乳注射液致敏的豚鼠在致敏第14d及第21d進行攻擊，均未發(fā)生速發(fā)型過敏反應(yīng)。

2.2.4 結(jié)論 鴉膽子油亞納米乳注射液重復(fù)注射不會引起豚鼠致敏，不會發(fā)生速發(fā)型過敏反應(yīng)（詳見表2）。

表2 鴉膽子油亞納米乳注射液的豚鼠速發(fā)型過敏反應(yīng)情況

2.3 熱原試驗

2.3.1 試驗方法 健康兔2.15-2.35kg 3只（2♂1♀），預(yù)檢合格。室溫25-28℃。試驗前1h停止供食，測定其正常體溫后，自耳靜脈緩緩注入鴉膽子油亞納米乳注射液10mL，然后每隔1h測體溫1次，共3次[3]。

2.3.2 結(jié)果 見表3。

表3 鴉膽子油亞納米乳注射液熱原試驗

2.3.3 結(jié)論 熱原試驗結(jié)果表明鴉膽子油亞納米乳注射液熱原限度符合中華人民共和國藥典規(guī)定。

2.4 局部血管刺激性試驗

2.4.1 方法 將4只狗分成2組，1組為鴉膽子油亞納米乳注射液，另一組為英脫利匹特。每組2只狗，♂♀各一只。用75%乙醇消毒狗右耳緣，用消毒針筒抽取藥液，用一次性硅膠管針插入耳緣靜脈，靜脈注射鴉膽子油亞納米乳注射液或英脫利匹特10mL/kg/d，每次注射10min，連續(xù)7d左耳靜脈不注射，作對照觀察。停藥后3d處死動物，取二側(cè)耳緣作病理切片檢查[4]。

2.4.2 結(jié)果 肉眼觀察：第1次注射24h后，4只狗被注射的耳緣靜脈局部未見明顯紅腫，第3次注射24h后，2組中各有1只狗稍有紅腫，第7次注射24h后，2組中各有1只狗明顯紅腫、用手觸摸血管有明顯的硬化感，另各有1只稍有紅腫，48h后紅腫均有明顯消退，72h后紅腫基本消退，但血管硬化感仍存在。

2.4.3 病理切片觀察 鴉膽子油亞納米乳組2只狗和英脫利匹特對照組2只狗的左耳靜脈鏡檢均未見病理變化。鴉膽子油亞納米乳組和英脫利匹特對照組各有1只。狗的右耳緣靜脈鏡檢有明顯血管壁損傷和急性炎癥反應(yīng)，而2組的另1只狗又耳緣靜脈管壁內(nèi)的病理變化兼于急性和慢性之間，除了又急性炎癥現(xiàn)象，還有管內(nèi)血栓形成，機化等病理變化，比較2組狗的病理變化，完全相同。圖1顯示鴉膽子油亞納米乳注射液1號狗的急性炎癥變化；圖2顯示鴉膽子油亞納米乳注射液3號狗慢性炎癥的病理變化。

2.4.4 結(jié)論 鴉膽子油亞納米乳注射液和對照藥英脫利匹特給狗耳緣靜脈注射的局部血管均有輕度刺激反應(yīng)，但對照左耳靜脈無明顯血管刺激反應(yīng)，表明該刺激反應(yīng)屬于油乳劑共有的刺激反應(yīng)，并非鴉膽子油亞納米乳注射液特有，此外也不能排除注射針頭局部性的損傷引起的炎癥反應(yīng)。

圖1 鴉膽子油亞納米乳注射液組1號狗病理變化

圖2 鴉膽子油亞納米乳注射液組3號狗病理變化

3 小結(jié)與討論

通過對家兔的刺激性試驗、溶血性試驗，豚鼠速發(fā)型過敏反應(yīng)未見有異常反應(yīng)出現(xiàn)，說明本品不會引起溶血、刺激反應(yīng)，不引起速發(fā)型過敏反應(yīng)。鴉膽子油亞納米乳注射液熱原試驗，血管刺激反應(yīng)性均符合規(guī)定。表明該制劑靜注給藥是比較安全可靠的。給狗耳緣靜脈注射的局部血管均有輕度刺激反應(yīng)，但對照左耳靜脈無明顯血管刺激反應(yīng)，表明該刺激反應(yīng)屬于油乳劑共有的刺激反應(yīng)，并非鴉膽子油亞納米乳注射液特有，此外也不能排除注射針頭局部性的損傷引起的炎癥反應(yīng)，在臨床使用中應(yīng)注意。

[1]袁伯俊，王治喬.新藥臨床前安全性評價與實踐[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997：29-30．

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則（中藥、天然藥物免疫毒性過敏性、光變態(tài)反應(yīng)研究技術(shù)指導(dǎo)原則）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：3．

[3]陳奇.中藥藥理試驗方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：163，168．

[4]何曉靜，劉玉蘭.注射用頭孢替坦鈉的安全性再評價[J].中國抗生素雜志，2007，1：59-62．