莪術(shù)油凝膠劑制備工藝研究*

★ 鐘小群 袁海銘 李艷

（江西省藥物研究所 南昌 330029）

莪術(shù)油是由姜科植物蓬莪術(shù)Cumuma phaeocaulis Va1.、廣西莪術(shù) Curcunlakwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang 或 溫 郁 金 Cumuma．Wenyujin.Y.H.chen et C.Ling的干燥根莖（后者習(xí)稱“溫莪術(shù)”）經(jīng)水蒸汽蒸餾提取的揮發(fā)油，中國藥典2010年版一部（植物油脂和提取物）有收載[1]。具有活血化瘀、行氣破滯、消積止痛之功效，用于抗腫瘤、抗病毒、抗血栓、抗菌、消炎。臨床使用越來越廣，莪術(shù)油以注射、栓塞、保留灌腸、外敷等形式治療腫瘤、病毒引起的感冒上呼吸道感染、小兒病毒性肺炎、消化道潰瘍、甲型病毒性肝炎、小兒病毒性腸炎及病毒性心肌炎腦炎、陰道炎、宮頸糜爛、慢性宮頸炎、盆腔炎、放射性皮炎及多種皮膚潰瘍等[2-3]。由于莪術(shù)油有較強(qiáng)的抗病毒作用，有報(bào)道莪術(shù)油在治療由腸道病毒（以柯薩奇A組16型（CoxA16）、腸道病毒71型（EV71）多見）引起的急性傳染病手足口病有明顯的效果[4-7]。莪術(shù)油上市制劑種類比較少，主要有：注射液（1%）、復(fù)方莪術(shù)油栓劑（2%）、復(fù)方莪術(shù)油軟膏（4%）等幾種，因此莪術(shù)油的新劑型及新技術(shù)的研發(fā)方興未艾，如將莪術(shù)油制成自微乳、亞微乳、納米粒、微球、微囊、β-環(huán)糊精包合物、羥丙基-β-環(huán)糊精包合物、噴霧劑等形式[8]等，以提高生物利用度，但尚未有上市品種?；谑肿憧诓《喟l(fā)生于學(xué)齡前兒童，根據(jù)《手足口病診療指南》（2010年版），臨床上常采用中西醫(yī)結(jié)合治療急、重性手足口病患者，然而對在家康復(fù)的患者缺少安全有效的針對性藥物制劑；另外，手足口病主要癥狀表現(xiàn)為手、足、口腔等部位的斑丘疹、皰疹等皮膚潰爛，因此我們擬將莪術(shù)油開發(fā)成外敷型凝膠劑，用于治療手足口病所致的各種皮膚潰瘍。莪術(shù)油凝膠劑是由莪術(shù)油與水溶性凝膠基質(zhì)制備的半固體藥物，是一種新型外用劑型，不會污染衣物，運(yùn)輸、儲存及使用為方便，患者依從性更高。作者采用先進(jìn)的凝膠輔料，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選工藝，并進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。本文為首次發(fā)表。

1 儀器與試藥

儀器：TGL-16G型臺式高速離心機(jī)（湖南星科科學(xué)儀器有限公司）。

對照品：莪術(shù)醇（購于中檢所。批號：100185-200 506）、莪術(shù)二酮（購于中檢所。批號：111800-201001）、呋喃二烯（購于中檢所。批號：111824-201102）。

原料藥：莪術(shù)油（購買于中國江西吉水縣同仁天然藥用油廠符合規(guī)定）。

試劑：溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法

通過藥物于輔料相容性試驗(yàn)及預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，課題組采用卡波姆934為凝膠基質(zhì)，吐溫80為乳化劑，甘油-丙二醇（2：1）為增稠劑、尼泊金乙酯為防腐劑。采用4因素3水正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以所制備凝膠劑的外觀（涂展性）、穩(wěn)定性（耐熱、耐寒、離心）、體外釋放時間等為指標(biāo)進(jìn)行綜合評價，優(yōu)選最優(yōu)的載藥量、基質(zhì)量、乳化劑量、增稠劑量及工藝，因素水平表見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

供試品制備：按照正交表頭中的處方比例，制備100 g的量，稱取卡波姆934、增稠劑甘油-丙二醇（2：1）、水適量，攪拌使溶解，逐漸再加入10%氫氧化鈉溶液約適量（每1g卡波姆約用4 mL），加入處方量的乳化劑吐溫-80，及足量的水，加熱至約70℃；另取表頭比例的莪術(shù)油原料、相同量的防腐劑尼泊金乙酯，混合均勻，加熱至約60℃，攪拌下逐漸加入至上述水相中，65℃保溫下攪拌0.5h后再攪拌冷卻至室溫，灌入軟膏管中（10g/管），即得。將所得凝膠樣品進(jìn)行比較：外觀、耐熱試驗(yàn)、耐寒試驗(yàn)、離心試驗(yàn)、體外釋放，分別進(jìn)行打分，計(jì)算總得分。將結(jié)果填入上表中，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

外觀（涂展性）：觀察上述9種供試品，為乳液型凝膠劑，均是光滑、細(xì)膩的，但其稠度或涂展性不一樣，因此測定涂展性[9]：取上述9種供試品各3份，每份10 g，置清潔的5×20cm玻璃板一端1cm處，均勻涂布在5cm×1cm內(nèi)的面積內(nèi)（必要時在冰箱內(nèi)進(jìn)行，便于固定），然后將玻璃板置于40℃恒溫箱中并傾斜至30°角，使凝膠能順著玻璃板自由流動涂展下來。計(jì)算10min內(nèi)供試品流下距離及面積，距離小于4cm者得1分、5-8cm者得3分，大于8cm者得2分，將平均值填入正交表頭。

耐熱實(shí)驗(yàn)：取上述9種供試品各3份，每份10 g，置試管中，于80℃恒溫箱內(nèi)保存24 h，取出，放至室溫，記錄產(chǎn)生分層的時間：未冷卻至室溫即分層得分為0，24h內(nèi)分層得1分，24h外得分2分，將平均值填入正交表頭。

耐寒實(shí)驗(yàn)：取上述9種供試品各3份，每份10 g，置試管中，于-10℃條件下冷藏24 h，取出，放至室溫，記錄產(chǎn)生分層的時間：未至室溫即分層得分為0，24h內(nèi)分層得1分，24h外得分2分，將平均值填入正交表頭。

離心實(shí)驗(yàn)：取上述9種供試品各3份，每份10 g，裝于離心管中，在6 000 r/min條件下，30min內(nèi)分層得0分，60min內(nèi)分層得1分，60min外分層得2分，將平均值填入正交表頭。

體外釋放時間測定[11]：取上述9種供試品各3份，每份10 g至玻璃管中（一端開口，一端固定一張相同大小0.45μm的有機(jī)膜），將有機(jī)膜端浸于裝有1mL無水乙醇稱量皿中，分別于1、2、3h末各吸取無水乙醇25μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，以莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、呋喃二烯對照品的石油醚（30-60℃）溶液（制成每1mL各含0.5mg的溶液）為對照品溶液。以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（60：5：0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供該品色譜色譜中，能在1h內(nèi)出現(xiàn)與對照品相同斑點(diǎn)供試品得3分，2小時出現(xiàn)著得2分，3h后尚未出現(xiàn)斑點(diǎn)得1分。將平均值填入正交表頭。

2.2 結(jié)果

2.2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析 結(jié)果見表2、3。

表2 L9（34）正交設(shè)計(jì)表

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析

結(jié)果顯示：因素A、B、C對凝膠劑的質(zhì)量有顯著的影響。

2.2.2 正交試驗(yàn)直觀分析 按照所選用的評定指標(biāo)綜合得分來看，所選4個因素中A、B、C因素影響比較大，最優(yōu)工藝為A2B2C3D2，即載藥量為10%，卡波姆凝膠基質(zhì)為3%，乳化劑為2.4%，增稠劑為10%。根據(jù)因素C2及C3結(jié)果差異不大及考慮到真實(shí)皮膚的需求（不能有大多的滑膩感），乳化劑的比例選擇為C2，即用1.6%的吐溫-80。最優(yōu)處方為A2B2C22D2。

2.2.3 正交驗(yàn)證試驗(yàn) 將上述最優(yōu)工藝A2B2C3D2進(jìn)行驗(yàn)證，制備1 000g的量，并進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，結(jié)果重復(fù)性好，可操作性強(qiáng)。

3 討論

3.1 凝膠基質(zhì)的選擇

本品主藥為莪術(shù)油，在基質(zhì)選擇中考察過油溶性基質(zhì)及水溶性基質(zhì)，由于油溶性基質(zhì)（如液體石蠟與聚氧乙烯或脂肪油與膠體硅或鋁皂、鋅皂等）所制備凝膠劑油性較強(qiáng)，不易清洗，因此選擇水溶性基質(zhì)，水溶性基質(zhì)主要有纖維素衍生物類（甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及羥丙甲纖維素等）、卡波姆（型號有934、940、941）、殼聚糖基質(zhì)、泊洛沙姆（型號常有407、188）、海藻酸鈉、西黃耆膠、明膠、淀粉、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、天然樹膠等。根據(jù)不同基質(zhì)與藥物的相容性試驗(yàn)（是否能成型）結(jié)果，發(fā)現(xiàn)卡波姆934能與藥物相容，形成比較光滑、均勻的凝膠，因此選此基質(zhì)。

3.2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)檢測指標(biāo)的選擇

凝膠劑的判斷指標(biāo)常有外觀（是否光滑、透明、均勻，粘度、涂展性是否適宜）、穩(wěn)定性（耐寒、耐熱、耐離心）、體外釋放速率測定等，多為定性指標(biāo)（主觀指標(biāo)），體外釋放度實(shí)驗(yàn)確定工藝雖然比較準(zhǔn)確，但操作實(shí)為不便，特別是針對中藥類的外用制劑，成分復(fù)雜，可被檢測的成分含量甚微，雖然可用GC或HPLC法測定某一些含量大的成分，如文獻(xiàn)[10-13]等所述，但是單一成分的體外釋放并不能代表整個中藥的釋放情況，因此本課題組選用的薄層鑒別法測定凝膠劑的體外釋放速率，可操作性強(qiáng)，可被檢測的指標(biāo)多，更能代表中藥的體外釋放情況，在工藝研究中可以起到更好的控制作用，有很強(qiáng)的推廣價值。

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