LOX-1在2型糖尿病大鼠腎小管間質(zhì)中的表達及其意義*

杜月光， 錢俊文， 宋光明, 柴可夫△

(浙江中醫(yī)藥大學(xué) 1病理學(xué)教研室， 2中醫(yī)臨床基礎(chǔ)研究所，浙江 杭州 310053)

LOX-1在2型糖尿病大鼠腎小管間質(zhì)中的表達及其意義*

杜月光1， 錢俊文2， 宋光明2, 柴可夫2△

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)1病理學(xué)教研室，2中醫(yī)臨床基礎(chǔ)研究所，浙江 杭州 310053)

目的探討血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)在糖尿病腎病(DN)中的作用及其機制。方法SD大鼠隨機分為正常對照組和糖尿病模型組。以高脂高糖飲食加低劑量注射鏈脲佐菌素復(fù)制2型糖尿病大鼠模型。動態(tài)觀察：生化指標(biāo)和24 h尿白蛋白排泄率(UAER)；蘇木素伊紅(HE)和過碘酸-雪夫反應(yīng)(PAS)染色觀察腎臟病理，免疫組化檢測LOX-1和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)蛋白表達，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測LOX-1和TGF-β1mRNA表達，ELISA檢測血清單核細胞趨化因子-1(MCP-1)、細胞間黏附分子(ICAM)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)的濃度。結(jié)果隨著造模時間的延長，血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量和UAER逐漸升高，高密度脂蛋白(HDL)在成模時升高，但隨著病變進展含量減少；LOX-1和TGF-β1在腎小管中蛋白表達增加；與正常組比較，模型各組LOX-1和TGF-β1蛋白和mRNA表達逐漸增加；與正常組比較，模型各組血清MCP-1、ICAM和TNF-α水平均增高；LOX-1 mRNA表達與UAER、TNF-α和TGF-β1mRNA表達量之間呈正相關(guān)(r值分別為0.509、0.649和0.800)(P<0.05)。結(jié)論LOX-1在2型糖尿病腎小管中表達增加，使腎小管損傷，其作用可能通過炎癥因子釋放和炎癥細胞浸潤而實現(xiàn)，提示其在DN發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用。

糖尿病腎??； 血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體 1； 腎小管-腎間質(zhì)損傷； 炎癥

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥，研究發(fā)現(xiàn)[1]糖尿病腎損傷早期就出現(xiàn)在腎小管，而且糖尿病患者腎功能的惡化程度與其腎小管間質(zhì)損傷程度密切相關(guān)。但是關(guān)于糖尿病時腎小管間質(zhì)的損傷機制不太明確。臨床和實驗研究表明，脂質(zhì)代謝紊亂作為危險因素在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，其中氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL)是重要的危險因子[2]。血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1，LOX-1)是ox-LDL特異性受體，在動脈粥樣硬化產(chǎn)生和血管的炎性反應(yīng)性中發(fā)揮重要作用[3-4]。大量研究發(fā)現(xiàn)糖尿病兩大主要并發(fā)癥動脈粥樣硬化和糖尿病腎病存在許多驚人的相似之處[5]。為此，本實驗動態(tài)觀察2型糖尿病大鼠腎臟LOX-1表達水平，并分析其與炎癥反應(yīng)的相關(guān)性，以期能揭示LOX-1在糖尿病腎病發(fā)病過程中的作用，為糖尿病腎病的治療提供依據(jù)。

材 料 和 方 法

1材料

1.1動物 健康雄性SD大鼠60只(體重約280～300g)，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(滬)2008-0016，于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗研究中心飼養(yǎng)，實驗許可證號為SYXK(浙)2007-0115(清潔級)。

1.2主要試劑與儀器 鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)為Sigma產(chǎn)品；Trizol為Invitrogen產(chǎn)品；RT-PCR所需試劑購自寶生物工程有限公司；Oligo d(T)18Primers為Promega產(chǎn)品；SYBR? Premix Ex TaqTMII(D2639A)為寶生物工程有限公司產(chǎn)品；腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)和細胞間黏附分子(intercellular adhesion molecule，ICAM) ELISA kit 購自上海森雄生物有限公司；抗LOX-1多克隆抗體為Abcam產(chǎn)品；抗轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)多克隆抗體為Santa Cruz產(chǎn)品，規(guī)格為sc-146。iCycler iQ PCR儀(Bio-Rad)；ZF-90型暗箱式紫外透射儀(上海顧村電光儀器廠)；DYY-6B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京市六一儀器廠)；DNA離心干燥箱(Thermo)；Ultrospec3300pro微量核酸測量儀(Amershan)；冷凍臺式高速離心機(Heraeus)；日立全自動生化分析儀(型號05007905)。

2方法

2.12型糖尿病大鼠模型制備與分組 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機選取24只大鼠為正常對照組，實驗過程中始終給予普通飼料喂養(yǎng)。其余大鼠禁食16～18 h，將鏈脲佐菌素溶于0.1 mmol/L檸檬酸緩沖液(pH 4.5)，配成1%的溶液，按30 mg/kg單次尾靜脈注射，注射當(dāng)天開始喂予高脂飼料。高脂飼料配方：10%蛋黃，0.5%膽固醇，10%～20%豬油，10%蔗糖，其余為基礎(chǔ)飼料。4周后尾靜脈取血測定血糖，取尿液測定尿糖，隨機血糖大于16.7 mmol/L確定為糖尿病模型。選取24只造模成功大鼠，繼續(xù)給予充足高脂飼料和飲水。

2.2檢測指標(biāo)及方法 分別于大鼠成模時即0周、第4周和第8周，以3.5%水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉后，心臟抽血(血用于檢測血糖、血脂)處死大鼠。摘取腎臟，去除包膜，稱重，作長軸方向?qū)η?。取部分腎臟固定于10%甲醛緩沖液中供病理及免疫組化檢測用；另一部分快速液氮冷凍，用于mRNA表達檢測。處死前1 d留取24 h尿液用于檢測尿蛋白。

2.2.1生化指標(biāo)檢測 應(yīng)用全自動生化分析儀測定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)和高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine, SCr)以及24 h尿白蛋白排泄率(24 h urinary albumin excretion rate,UAER)等生化指標(biāo)。

2.2.2腎臟組織病理觀察與分析 腎組織經(jīng)10%中性甲醛固定，脫水，再石蠟包埋與切片，切片行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)和過碘酸-雪夫反應(yīng)(periodic acid-Schiff reaction,PAS)染色，光鏡下觀察腎小管、腎小球結(jié)構(gòu)、基質(zhì)增生和炎細胞浸潤等情況。

2.2.3LOX-1和TGF-β1蛋白表達檢測 使用免疫組織化學(xué)EnVision二步法：腎組織經(jīng)10%中性甲醛固定、常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片；常規(guī)脫蠟、水化、煮沸修復(fù)抗原；3%過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化酶；滴加Ⅰ抗(兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗體，工作濃度為1∶100；兔抗LOX-1多克隆抗體，工作濃度為1∶10)置濕盒中，4 ℃冰箱內(nèi)孵育過夜，PBS液沖洗；滴加Envision工作液，室溫中30 min，PBS液沖洗；以DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。光鏡觀察，胞漿內(nèi)或胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒為陽性。每張切片在高倍視野下隨機選取5個不同視野，以Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件對腎組織免疫組化結(jié)果進行分析，用平均吸光度表示陽性物質(zhì)的相對含量。

2.2.4熒光定量PCR檢測LOX-1和TGF-β1mRNA表達 按照Trizol試劑說明書提取腎組織總RNA，測定并計算RNA的純度和濃度；取RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA；用SYBR Green嵌合熒光法進行實時PCR擴增。β-actin上游引物5’-ATGCCATCCTGCGTCTG-3’，下游引物5’-ACTCCTGCTTGCTGATCCACAT-3’，產(chǎn)物長度566 bp；LOX-1上游引物5’-CCTTTCCAATGCTTCCTC-3’，下游引物5’-TGACAATATGTACCCACCAG-3’，產(chǎn)物長度384 bp；TGF-β1上游引物5’-GCAACAACGCAATCTATGA-3’，下游引物5’-CAAGGTAACGCCAGGAAT-3’，產(chǎn)物長度為200 bp。20 μL反應(yīng)體系中包括2×SYBR? Premix Ex TaqTMII 10 μL，上游引物(10 μmol/L)0.5 μL，下游引物(10 μmol/L)0.5 μL，cDNA 0.5 μL，ddH2O 8.5 μL，反應(yīng)條件94 ℃預(yù)變性5 min，進入循環(huán)：94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，30個循環(huán)。每份標(biāo)本設(shè)3個復(fù)孔，取其循環(huán)閾值(Ct)均值，分別計算各組的ΔCt，表示其相對表達量。

2.2.5血清TNF-α、MCP-1及ICAM含量檢測 采用ELISA法，具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書的要求進行。

3統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS 11.0分析，組間計量資料的比較采用單因素方差分析，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1各組大鼠血糖、血脂的變化

大鼠成模時血糖明顯升高，隨著時間的延長，血糖穩(wěn)定在較高水平。血TC、TG和LDL成模時升高，但與正常對照組比較無顯著差異，隨著時間的延長，升高越來越明顯，與正常組比較，TC于8周時顯著升高(P<0.01)；TG和LDL在4周和8周時明顯升高(均P<0.01)。HDL在成模時升高，與正常對照組比較有顯著差異，但隨著時間的延長又逐漸下降，8周時與成模時比較明顯減少(P<0.01)，見表1。

表1各組大鼠血糖及血脂的變化

Table 1. Changes of biochemical parameters in each group(mean±SD.n=8)

GroupFBGTG(mmol/L)TC(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)Control4.38±0.520.55±0.141.05±0.090.76±0.140.16±0.040week21.23±2.85*0.71±0.122.08±0.611.72±0.43*0.42±0.154weeks22.98±4.01*1.56±0.45**2.41±0.741.32±0.531.33±0.33**8weeks25.91±3.48*1.73±0.54**4.14±1.24**1.06±0.29△△2.55±0.92**

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;△△P<0.01vs0 week.

2各組大鼠腎功能指標(biāo)及尿微量白蛋白的變化

與正常組比較，模型各組大鼠血尿素氮明顯增加(P<0.01)。隨著病情的發(fā)展，尿素氮增加更明顯，與成模時比較，8周時血尿素氮顯著增加(P<0.01)；但肌酐各組無明顯變化。24 h尿白蛋白排泄率成模時與正常對照組比較無顯著差異；隨著時間的延長，升高越來越明顯，8周時與正常組比較及成模時比較均顯著升高(P<0.01)，與4周時比較差異顯著(P<0.05)，見表2。

表2各組大鼠腎功能指標(biāo)及尿蛋白的變化

Table 2. Changes of BUN, SCr and UAER in each group(mean±SD.n=8)

GroupBUN(mmol/L)SCr(μmol/L)UAER(mg/L)Control4.47±0.4250.46±4.230.39±0.150week7.64±086**55.33±6.620.43±0.214weeks8.26±2.24**55.43±5.810.60±0.108weeks9.34±1.99**△△56.14±5.680.97±0.46**△△##

**P<0.01vscontrol;△△P<0.01vs0 week;##P<0.01vs4 weeks.

3對腎臟組織病理形態(tài)的影響

光鏡下HE染色和PAS染色可以見到正常組大鼠腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)正常,腎小球內(nèi)毛細血管張開，系膜區(qū)基質(zhì)均勻。成模時大鼠腎小球內(nèi)系膜基質(zhì)略增多，基底膜稍增厚，使毛細血管腔變小，腎小球體積增大。隨著時間的延長，大鼠腎小球內(nèi)系膜區(qū)基質(zhì)逐漸增多，基底膜增厚，血管腔進一步縮小甚至閉合；腎小球及腎小管間質(zhì)內(nèi)炎細胞浸潤，腎小管上皮細胞空泡變明顯、壞死脫落及萎縮，腎小管間質(zhì)增生，見圖1、2。

4各組大鼠腎臟LOX-1和TGF-β1蛋白表達的變化

免疫組化顯示，正常組可見在腎小球及部分小管胞漿內(nèi)LOX-1有一定量表達，成模時，可見腎小管細胞內(nèi)表達增多，染色加深，隨著時間的延長，表達進一步增多，特別在空泡化的腎小管，包膜表達明顯，呈強陽性。TGF-β1在正常組大鼠腎小管有一定程度的表達，模型組表達增多，隨著時間的延長，表達進一步增多，見圖3、4。與對照組比較，模型各組棕色陽性信號明顯增強,見表3。

Figure 1. The pathological changes of rat renal tissues (HE staining, ×400). Black arrows indicate inflammatory cell infiltration;blue arrows indicate tubular injury. A：control； B： 0 week； C: 4 weeks； D: 8 weeks.

圖1HE染色顯示大鼠腎組織病理變化

Figure 2. The pathological changes of rat renal tissues (PAS staining, ×400).A：control； B： 0 week；C: 4 weeks；D: 8 weeks.

圖2PAS染色顯示大鼠腎組織病理變化

Figure 3. Expression of LOX-1 in rat renal tissues (immunohistochemical staining，×400). A：control； B： 0 week； C: 4 weeks；D: 8 weeks.

圖3免疫組織化學(xué)染色檢測大鼠腎組織LOX-1蛋白的表達

Figure 4. Expression of TGF-β1in rat renal tissues (immunohistochemical staining，×400).A： control； B： 0 week；C: 4 weeks； D: 8 weeks.

圖4免疫組織化學(xué)染色檢測大鼠腎組織TGF-β1蛋白的表達

表3各組大鼠腎臟LOX-1和TGF-β1mRNA和蛋白表達的變化

Table 3. Changes of LOX-1 and TGF-β1mRNA and protein expression in each group(mean±SD.n=8)

GroupmRNA(ΔCt)Protein(IA)LOX-1TGF-β1LOX-1TGF-β1Control22.90±1.5623.04±9.860.022±0.0080.038±0.0150week16.19±3.65*13.12±2.28*0.039±0.015*0.040±0.0174weeks10.61±2.50**9.61±1.02**0.045±0.016**0.056±0.024**8weeks9.55±4.50**6.94±3.56**0.051±0.016**0.065±0.028**△

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;△P<0.05vs0 week.

5各組大鼠腎臟LOX-1和TGF-β1mRNA表達的變化

模型各組隨著時間的延長，LOX-1 mRNA表達量逐漸增加，與正常組比較，成模時其表達明顯升高(P<0.05)，4周和8周進一步增加(均P<0.01)，8周時與成模時比較差異顯著(P<0.05)。TGF-β1mRNA表達量也隨著時間的延長逐漸增加，與正常組比較，成模時明顯增加(P<0.05)，4周和8周時進一步升高(均P<0.01),見表3。

6各組大鼠血清中MCP-1、ICAM和TNF-α的濃度

模型各組與正常組比較，MCP-1含量8周時表達明顯增加(P<0.01)，與成模時比較也明顯增加(P<0.01)；模型各組ICAM含量4周時與正常組比較顯著升高(P<0.05)，8周時與正常組及成模時比較差異顯著(P<0.01，P<0.05)。4周時模型各組TNF-α含量與正常組比較差異顯著(P<0.05)，8周時與正常組比較其表達進一步升高(P<0.01),見表4。

表4各組大鼠血清炎癥因子的含量

Table 4. Content of serum inflammatory factors in each group(mean±SD.n=6)

GroupMCP-1(ng/L)ICAM(μg/L)TNF-α(ng/L)Control9.34±1.5520.61±2.5011.77±1.770week9.91±1.2123.46±4.9716.85±3.134weeks10.92±1.8027.01±5.18*17.62±5.77*8weeks12.30±1.95**△△32.31±3.91**△22.49±8.59**

*P<0.05,**P<0.01vscontrol;△P<0.05,△△P<0.01vs0 week.

7LOX-1與UAER、炎癥因子及TGF-β1的相關(guān)性分析

大鼠腎組織LOX-1 mRNA表達水平與UAER和TNF-α之間呈正相關(guān)(r值分別為0.509和0.649)，均P<0.05，但與MCP-1和ICAM之間無明顯相關(guān)；LOX-1 mRNA表達水平與TGF-β1mRNA表達水平呈正相關(guān)(r值為0.800),P<0.01。

討 論

糖尿病腎病是糖尿病的微血管并發(fā)癥，也是終末期腎病的主要原因，2型糖尿病患者占糖尿病患者的絕大部分。腎小管間質(zhì)病變是糖尿病腎病的主要特征之一，并且腎功能惡化的程度與腎小管間質(zhì)的損傷程度密切相關(guān)[1]。本研究采用高脂高糖飲食加低劑量鏈脲佐菌素尾靜脈注射誘導(dǎo)復(fù)制2型糖尿病大鼠，動態(tài)觀察腎臟功能及其病理變化。結(jié)果顯示：在2型DM大鼠成模時，血糖升高，并一直處于較穩(wěn)定狀態(tài)；24 h尿白蛋白排泄率成模時增加不明顯，但隨著時間的延長，增加越來越明顯，表明此時已出現(xiàn)一定程度的腎功能障礙，這與賀亮等[6]的研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著造模時間的延長,TC、TG和LDL逐漸升高，而HDL成模時升高，然后降低。本人推測這可能是為了降低血中的TC和TG，HDL先代償性升高，隨后的降低可能是由于病變的發(fā)展,自由基產(chǎn)生增加，使脂蛋白酯酶活性降低，但這有待進一步研究。HE和PAS染色顯示，成模時大鼠腎小球局部基質(zhì)輕度增生，基底膜增厚，腎小管上皮輕度空泡化，隨著造模時間的延長，病變趨于嚴(yán)重，出現(xiàn)炎細胞局灶性浸潤、腎小管發(fā)生萎縮和間質(zhì)發(fā)生纖維化等病理變化，因此，本研究證實在早期2型DN中就出現(xiàn)局部腎小管間質(zhì)的損傷。

臨床和實驗研究表明，脂質(zhì)代謝紊亂作為危險因素在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，尤其是ox-LDL[2]，但其引起DN的機制不明確。研究提示糖尿病兩大主要并發(fā)癥動脈粥樣硬化和DN存在共同的病理生理基礎(chǔ)[5]：均有炎癥反應(yīng)、活性氧自由基的產(chǎn)生及促纖維化因子的產(chǎn)生等。LOX-1為ox-LDL的特異受體，大量研究[4]證實高表達的LOX-1可特異性地結(jié)合ox-LDL，引起血管內(nèi)皮細胞的激活、功能紊亂，使黏附分子和炎癥因子大量表達，單核巨噬細胞聚集浸潤于內(nèi)皮下，大量吞噬ox-LDL，在動脈粥樣硬化病理變化過程中起著關(guān)鍵的作用。因此，本實驗觀察LOX-1在糖尿病大鼠腎臟中的表達并分析其與腎功能及病變的相關(guān)性。結(jié)果顯示，LOX-1在腎臟中表達增加，且隨著腎臟病變的加重有升高趨勢，與UAER呈正相關(guān)。其中免疫組化結(jié)果顯示，LOX-1在腎小球與腎小管中可見表達，隨著病變的加重，腎小管中的表達增加，特別是在空泡變的腎小管上皮細胞胞膜表達呈強陽性，與Kelly等[7]的研究結(jié)果一致：研究發(fā)現(xiàn)糖尿病肥胖大鼠LOX-1表達增加，并且與腎功能變化呈正相關(guān)。相反用LOX-1抗體治療可改善腎功能，減輕脂毒性以及由此引起的炎癥細胞浸潤，腎間質(zhì)纖維化[8]，這提示LOX-1在糖尿病腎小管間質(zhì)的損傷中起一定的作用。不過關(guān)于LOX-1的表達有不同的報道，Yamamoto等[9]原位雜交結(jié)果顯示LOX-1 mRNA在腎小球和腎小管中均有表達，在糖尿病腎病患者腎小管表達增加，而腎小球表達無明顯增加，與本實驗結(jié)果一致。但Nagase等[10]研究認為腎小球和腎小管的表達均升高。

目前普遍認為糖脂代謝紊亂引起的免疫炎癥反應(yīng)在DN發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，而巨噬細胞浸潤是腎臟病變中的重要病理特征。致炎因子如TNF-α、MCP-1和ICAM通過介導(dǎo)單核巨噬細胞的黏附、趨化等過程在DN早期病變中起關(guān)鍵作用，并與蛋白尿、腎小管間質(zhì)損傷及病變進展有關(guān)[11]。本實驗觀察糖尿病腎臟病變顯示，在第4周，腎小球、腎小管間質(zhì)內(nèi)有巨噬細胞浸潤，隨著時間的進展，浸潤增多。同時結(jié)果還顯示，隨著病變的加重，大鼠血清炎癥因子ICAM-1、MCP-1和TNF-α的含量增加，因此，我們的研究也證實了炎癥在糖尿病腎病中的作用。

脂毒性被認為是腎小球硬化和腎小管-間質(zhì)損傷的主要原因之一。研究認為ox-LDL與LOX-1結(jié)合，促進脂質(zhì)蓄積、并啟動腎小管上皮細胞向前炎癥表型轉(zhuǎn)化，募集白細胞黏附、加劇炎癥反應(yīng)，引起腎小管間質(zhì)的損傷[6,12]。由于糖尿病狀態(tài)下，機體內(nèi)普遍存在的氧化應(yīng)激導(dǎo)致脂質(zhì)、脂蛋白等過度氧化,并在腎組織過度蓄積，腎小管上皮細胞通過其表面受體吞飲氧化的脂質(zhì)和脂蛋白，進而使細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積、脂質(zhì)過負荷，細胞出現(xiàn)功能障礙，引起腎小管間質(zhì)進一步損傷[13-14]。LOX-1還可作為一個信號分子轉(zhuǎn)導(dǎo)生物信號，調(diào)節(jié)其自身以及炎癥因子和趨化因子的表達[15]。本實驗進一步分析了LOX-1與炎癥因子的相關(guān)性，結(jié)果顯示LOX-1表達與腎小管間質(zhì)炎癥細胞浸潤、腎小管萎縮程度相平行，與TNF-α的含量呈正相關(guān)。

綜上所述，LOX-l在高脂高糖飲食及STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠腎小管間質(zhì)中表達明顯增加，且伴有炎癥因子的釋放和炎癥細胞的浸潤，導(dǎo)致腎小管間質(zhì)損傷，引起腎功能障礙，但LOX-1上述作用還有待進一步實驗證實。

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ExpressionofLOX-1intype2diabeticrattubularinterstitialtissues

DU Yue-guang1, QIAN Jun-wen2, SONG Guang-ming2, CHAI Ke-fu2

(1DepartmentofPathology,2NationalTCMClinicalResearchCenter,ZhejiangChineseMedicalUniversity,Hangzhou310053,China.E-mail:ckf666@163.com)

AIM: To explore the effect of lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor 1 (LOX-1) on type 2 diabetic nephropathy in rats.METHODSThe Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into control group and model group. The animal model was established by intraperitoneal injection of low-dose streptozotocin (STZ, 30 mg/kg) plus feeding with high-fat/high-glucose diets for one month. Biochemical parameters and 24 h urine album excretion rate (UAER) were monitored. The morphological changes of the renal tissue were examined under microscope with hematoxylin-eosin (HE) and periodic acid-Schiff reaction (PAS) staining. The protein levels of LOX-1 and transforming growth factor β1(TGF-β1) in the renal tissues were determined by the method of immunohistochemistry. The mRNA expression of LOX-1 and TGF-β1was detected by real-time polymerase chain reaction. The serum levels of monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), intercellular adhesion molecule (ICAM) and tumor necrosis factor α(TNF-α) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The correlation between LOX-1 and UAER, inflammatory factors and TGF-β1was analyzed.RESULTSCompared with normal group, total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low-density lipoprotein (LDL) and UAER in model groups markedly increased, high-density lipoprotein (HDL) only increased at 0 week, then decreased at 4 and 8 weeks. The expression of LOX-1 and TGF-β1at mRNA and protein levels was increased, as well as the concentration of serum inflammatory factors such as MCP-1, ICAM and TNF-α. The obvious relations between LOX-l mRNA with UAER, TNF-α and TGF-β1were observed (r=0.509, 0.649 and 0.800, respectively,P<0.05).CONCLUSIONLOX-1 is significantly increased in type 2 diabetic rat tubular interstitial tissues and aggravates the dysfunction of renal tubules by releasing inflammatory factors and promoting inflammatory cell infiltration.

Diabetic nephropathies; Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor 1; Tubular-interstitial injury; Inflammation

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2013.01.008

1000- 4718(2013)01- 0050- 06

2012- 07- 16

2012- 10- 30

浙江省教育廳項目(No. 200907543)

△通訊作者Tel: 0571-86613323; E-mail: ckf666@163.com