高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定小兒酚氨咖敏顆粒中3種組分的含量*

陳 娟，蒲恒然

(貴州省畢節(jié)市食品藥品檢驗(yàn)所，畢節(jié) 551700)

小兒酚氨咖敏顆粒常用于兒童傷風(fēng)感冒引起的發(fā)熱、頭疼、關(guān)節(jié)痛等癥狀，為《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》第十二冊(cè)收載品種，標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)其中主要成分氨基比林、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏的含量及限度有所規(guī)定，均采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定。而另一主要成分對(duì)乙酰氨基酚的含量、限度及其測(cè)定方法均未予規(guī)定，筆者認(rèn)為該標(biāo)準(zhǔn)存在一定缺陷。本文以高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定小兒酚氨咖敏顆粒中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的含量，方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，精密度高，提高了制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津LC－10ATvp高效液相色譜儀，SPD－10Avp紫外檢測(cè)器(日本島津公司)，威瑪龍色譜工作站(南寧威瑪龍色譜科技有限公司)。Waters1525高效液相色譜儀，Waters 484紫外檢測(cè)器，Breeze色譜處理軟件(美國(guó)Waters公司)。UV－2100型可見(jiàn)－紫外分光光度儀(日本島津公司)。AG135電子天平(瑞士梅特勒);AY120電子天平(日本島津公司)。對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為 100018－200107、171215－200406、100503－200301)，小兒酚氨咖敏顆粒為市售品(為不同的三家藥廠生產(chǎn)，批號(hào)分別為20110109、20110121、20110201)。甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:1%醋酸溶液(用二乙胺調(diào)節(jié)pH值為3.7)－ 甲醇(60∶40);檢測(cè)波長(zhǎng) 272 nm;流速 1.0 ml/min;進(jìn)樣量20 μl，按對(duì)乙酰氨基酚峰計(jì)理論塔板數(shù)不小于4000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)乙酰氨基酚約40 mg(41.61 mg)(括號(hào)內(nèi)為實(shí)際稱量，下同)、咖啡因?qū)φ掌芳s10 mg(9.28 mg)，氨基比林對(duì)照品約32 mg(35.82 mg)，置同一100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10袋的內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚10 mg)，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相25 ml，充分振搖使溶解，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 依處方，分別稱取白糖30 g、糊精 18 g、淀粉 0.8 g，研勻，精密稱取 0.8023 g，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相25 ml，充分振搖使溶解，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按峰面積計(jì)算，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的RSD分別為0.26%、0.25%和0.17%。各峰分離度均大于5，理論塔板數(shù)(按對(duì)乙酰氨基酚峰計(jì)算)平均為5256，符合《中國(guó)藥典》要求［1］。結(jié)果見(jiàn)圖1。更換儀器(Waters1525)同法測(cè)定，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的 RSD分別為 0.25%、0.22%和0.19%。各峰分離度均大于5，理論塔板數(shù)(按對(duì)乙酰氨基酚)平均為5302。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC色譜圖

另外取陰性對(duì)照溶液，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明其他成分不干擾對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的測(cè)定。

2.4 線性關(guān)系 精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液6.0、8.0、10.0、12.0 和 14.0 m l，分別置 100 m l量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得系列對(duì)照品溶液。分別吸取20 μl注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，記錄色譜圖，以濃度X(μg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:對(duì)乙酰氨基酚Y=27 591.0 X － 0.400 01(r=1.0000);咖啡因 Y=69 638.7 X+0.222 09(r=1.0000)，氨基比林 Y=44 079.6 X+0.081 734(r=1.0000)。結(jié)果表明:對(duì)乙酰氨基酚在 20.80 ～ 62.41 μg/m l、咖啡因在 4.64 ～13.92 μg/ml、氨基比林在17.91 ～53.72 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 按照樣品測(cè)定方法，取同一份供試品溶液(批號(hào)20110109)，按照含量測(cè)定的方法重復(fù)進(jìn)樣5次。按峰面積計(jì)算，對(duì)乙酰氨基酚RSD為0.5%;咖啡因RSD為1.0%，氨基比林RSD為0.8%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品(批號(hào)為20110109)5份，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，照含量測(cè)定的方法依法測(cè)定，按峰面積分別計(jì)算出每份供試品的含量，根據(jù)含量結(jié)果依法計(jì)算RSD。對(duì)乙酰氨基酚RSD為0.6%，咖啡因RSD為1.1%，氨基比林RSD為0.9%(n=5)。結(jié)果表明，含量測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液(批號(hào)為20110109)，在12 h內(nèi)按照含量測(cè)定的方法，在不同時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定，按峰面積計(jì)算，對(duì)乙酰氨基酚 RSD為0.6%，咖啡因 RSD為1.0%，氨基比林RSD為0.7%(n=6)。結(jié)果表明，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取樣品(約相當(dāng)于氨基比林2、4和6 mg)各3份，置具塞錐形瓶中，精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液各10 ml、乙醇15 ml，超聲5 min使溶解，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 m l量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按樣品測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算平均回收率(n=9)，對(duì)乙酰氨基酚回收率為99.9%，RSD為0.5%，咖啡因回收率為99.9%，RSD 為1.2%;氨基比林回收率為100.7%，RSD為1.0%。結(jié)果見(jiàn)表1、表2和表3。

表1 對(duì)乙酰氨基酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 咖啡因加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 氨基比林加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定 精密稱取小兒酚氨咖敏顆粒(約相當(dāng)于氨基比林8 mg)，置具塞錐形瓶中，精密加乙醇25 ml，超聲5 min使溶解，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 m l量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分別吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液20 μl注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并將咖啡因計(jì)算結(jié)果與1.0927相乘，即得。分別對(duì)3個(gè)廠家的三批產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均在標(biāo)示量的95.0% ～105.0%的范圍內(nèi)，批內(nèi) RSD 均小于1.0%。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 小兒酚氨咖敏顆粒含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 按《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》第十二冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)酚氨咖敏顆粒的另一主要成分對(duì)乙酰氨基酚含量測(cè)定未予規(guī)定，存在一定缺陷。本文采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定小兒酚氨咖敏顆粒中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的含量，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，不但完善了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，提高了制劑標(biāo)準(zhǔn)的可行性及可靠性，而且可以更好地控制該制劑的質(zhì)量。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，分別取對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因及氨基比林混合對(duì)照品溶液及樣品溶液進(jìn)行光譜掃描，根據(jù)掃描結(jié)果，選用272 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果比較理想。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)乙酰氨基酚在20.80～62.41 μg/ml、咖啡因在 4.64 ～ 13.92 μg/ml、氨基比林在17.91 ～53.72 μg/m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，而且精密度、重復(fù)性和回收率等試驗(yàn)結(jié)果均較為理想，樣品含量測(cè)定結(jié)果也比較可信。

1 中國(guó)藥典［S］.二部.2005:附錄28