高效液相色譜法測定維生素B1片中維生素B1的含量

廣東省韶關市食品藥品檢驗所（512028）劉旺培 嚴曉明 陳華龍

維生素B1片為用于預防和治療維生素B1缺乏癥，如腳氣病、神經(jīng)炎、消化不良等藥品，口服吸收快，安全有效?，F(xiàn)行的國家藥品標準對維生素B1片中維生素B1的含量采用紫外分光光度法[1]，精密度、靈敏度較差，自動化程度較低。之前《中國藥品標準》2004年05期有報道過高效液相色譜法測定維生素B1的含量，本文介紹高效液相色譜法測定維生素B1的含量，具有分析方法簡單、快速，分析結果準確、穩(wěn)定的特點。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A高效液相色譜儀，四元梯度泵，自動進樣器，Lc-solution工作站。維生素B1對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：100390-200502，105℃干燥2h后使用），維生素B1片樣品（2012年韶關市評價抽驗和監(jiān)督抽驗，批號：111101，120301，120601）；甲醇和乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Diamonsil，C18（5μm，150mm×4.6mm）；流動相：甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液（含1%三乙胺，用磷酸調節(jié)pH值至5.5，9∶9∶82）；檢測波長為238nm；流速為1.0ml/min；進樣量：10μl。

2.2線性范圍試驗 精密稱取維生素B1對照品適量，加水稀釋至含維生素B1為0.5026mg/ml的儲備液；分別吸取儲備液溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10.0ml，置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別取上述溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖見附圖，以濃度作橫坐標（X），以峰面積作縱坐標（Y），作線性回歸，得回歸方程。線性試驗結果表明：維生素B1在50.5～505μg/ml濃度范圍內具有良好的線性關系?；貧w方程分別為Y＝18240X＋39282，r＝0.99999。

2.3重復性試驗 取含維生素B1濃度分別為101μg/ml的對照品溶液，精密取10μl，注入液相色譜儀，重復進樣6次，計算峰面積的RSD分別為0.1%。結果顯示，本方法及儀器精密度良好。

2.4溶液的穩(wěn)定性試驗 取同一維生素B1片樣品溶液，置于室溫下，分別于0、2、8、12、24h取樣測定，結果顯示，本品測定溶液在24h內測定，維生素B1的峰面積均無明顯改變，說明本測定溶液比較穩(wěn)定。

附圖 色譜圖

2.5回收率試驗 精密量取已知含量的供試品0.06670g（含維生素B1為9.513mg）置100ml容量瓶中，分別加入維生素B1（0.505mg/ml）對照品各1.6、2.0、2.4ml，加水稀釋至刻度，精密取10μl注入液相色譜儀，測定回收率，結果見附表1。

2.6樣品含量測定 取3批樣品適量，分別加水稀釋至含維生素B1約100μg/ml溶液，進樣10μl，按外標峰面積法計算含量。結果顯示，3批樣品的含量均符合原標準的規(guī)定，見附表2。

附表1 維生素B1加樣回收試驗結果

附表2 樣品含量測定結果（標示量的%）

3 討論

3.1流動相和溶劑的選擇 維生素B1為水溶性物質，在水中溶解性很好，在中性水中相對穩(wěn)定，用水做溶劑既經(jīng)濟又環(huán)保，且便于操作。本文選用甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液（含1%三乙胺，用磷酸調節(jié)pH值至5.5，9∶9∶82）為流動相，維生素B1的峰形好，保留時間適中。

3.2測定波長的選擇 以水為空白，用供試品溶液和對照品溶液在200～400nm波長范圍內掃描，測定結果顯示，維生素B1在238nm波長處有最大吸收，所以選擇238nm為測定波長，且在238nm波長處雜質吸收小。

3.3結論 實驗證明，該研究提出的HPLC法測定維生素B1片的含量，選擇性、準確度及專屬性都比目前采用的紫外分光光度法檢測的高，且方法簡便、精密度高、重現(xiàn)性好，自動化程度高，可作為提高維生素B1片中維生素B1的含量的檢測方法。