卵巢上皮性腫瘤中P27和P53蛋白的表達及其相關(guān)性研究

高會玲 焦悅 孫樹靜

在婦科腫瘤中，卵巢癌是死亡的首要原因，其生存時間明顯低于五年［1］。對于卵巢癌早期診斷而言，沒有一種理想的腫瘤標(biāo)志物可以達到滿意的靈敏度和特異性。國內(nèi)外學(xué)者目前都在致力于研究能夠預(yù)測惡性腫瘤患者預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)，目的是更合理的應(yīng)用綜合治療方法，以提高患者的生存期。細(xì)胞生物學(xué)因子P27及P53都是與細(xì)胞周期Gl期檢查點(Check-Point)相關(guān)的抑癌基因，其蛋白異常表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測100例上皮性卵巢腫瘤組織中P27及P53蛋白的表達情況，研究P27及P53在上皮性卵巢腫瘤組織中的表達，探討它們在上皮性卵巢腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其相互關(guān)系，并為上皮性卵巢腫瘤治療監(jiān)測和預(yù)后評估提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 120例標(biāo)本均來自于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2008年至2009年手術(shù)病例。分為3組：(1)卵巢上皮性良性腫瘤組25例(良性組)，年齡15～45歲;(2)卵巢上皮性交界性腫瘤組18例(交界性組)，年齡25～55歲;(3)卵巢上皮性惡性腫瘤組57例(惡性組)，年齡36～75歲，其中卵巢漿液性囊腺癌39例，黏液性囊腺癌9例，卵巢子宮內(nèi)膜樣癌9例。卵巢癌中Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期43例(根據(jù)國際婦產(chǎn)科學(xué)會制定的卵巢癌FIGO分期);高中分化34例，中低分化23例，盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例。并取正常卵巢組織20例作為對照組，年齡35～55歲。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，粘貼于涂有0.05%多聚賴氨酸的載玻片備用。

1.2 方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法，免疫組化結(jié)果按陽性細(xì)胞百分比及陽性細(xì)胞染色強弱評分(immunohistochemical scores，IHS)：IHS=A×B判定。P27蛋白免疫組化染色陽性定位于細(xì)胞核及胞漿，P53蛋白免疫組化染色陽性定位于細(xì)胞核，二者陽性均呈棕黃色或棕褐色顆粒。光鏡分析按AB值法(A代表顯色深淺，B表示顯色細(xì)胞所占的比例)。AB法判斷：A：無顯色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分;B：1分顯色細(xì)胞少于1/3，2分顯色細(xì)胞占1/3～2/3，3分顯色細(xì)胞多于2/3。每個細(xì)胞陽性表達的積分(A×B)可分為四級：“-”(陰性)積分為0分;“+”(弱陽性)積分為1～3分;“++”(陽性)積分為4～6分;“+++”(強陽性)積分6分以上。染色特征及結(jié)果判定用已知的陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，組間率的比較采用χ2分割法和確切概率法(Fisher’s Exact Test);P27和P53的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P27蛋白在不同卵巢組織中的表達情況 P27染色陽性為胞核及胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，其在正常卵巢、良性腫瘤、交界性腫瘤及卵巢癌中的表達情況見表1～2，陽性表達率分別為90.00%，80.00%，55.56%和36.84%，惡性組P27蛋白表達明顯低于正常組和良性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1～3。

2.2 P27與卵巢癌組織臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 卵巢上皮性癌中，P27陽性表達率在＜50歲和≥50歲患者、在卵巢癌不同病理類型中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);在不同的組織學(xué)分級中(G1～G2，G3)P27陽性表達率分別為69.57%及14.71%，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);在不同的臨床分期中早期癌(Ⅰ～Ⅱ期)與晚期癌(Ⅲ～Ⅳ期)P27陽性表達率分別為71.43%及25.58%，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組P27陽性率低于無轉(zhuǎn)移組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表1 4組卵巢組織p27 IHS分值 例

表2 p27陽性表達χ2檢驗比較

表3 P27蛋白在不同病理類型卵巢組織表達比較

2.3 P53蛋白在不同卵巢組織中的表達情況 P53蛋白免疫組化染色陽性主要定位于細(xì)胞核，其在正常組織中未見表達，在卵巢良性、交界性及惡性腫瘤中陽性表達率逐級增高，分別為12.00%，16.67%和63.16%，惡性組P53蛋白表達明顯高于良性組和交界性組(P＜0.05)。見表4～6。

2.4 P53與卵巢癌組織臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 卵巢上皮性癌中，P53陽性表達率在＜50歲和≥50歲患者、在卵巢癌不同病理類型中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);在不同的組織學(xué)分級中(G1～G2，G3)P53陽性表達率分別為43.48%及76.47%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，低分化的卵巢癌陽性表達率明顯高于高分化組;在不同的臨床分期中早期癌(Ⅰ～Ⅱ期)與晚期癌(Ⅲ～Ⅳ期)P53陽性表達率分別為35.71%及72.09%，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。說明P53蛋白表達陽性率與組織學(xué)分型、臨床分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組P53陽性率低于無轉(zhuǎn)移組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。見表6。

2.5 P27和P53在卵巢癌組織中表達的相關(guān)性 57例卵巢癌組織中P27與P53表達，二者在卵巢癌組織中呈明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系(Rs=-0.397，P ＜0.05)。見表7。

表4 4組卵巢組織p53 IHS分值 例

表5 p53陽性表達χ2檢驗比較

表6 P53蛋白在不同病理類型卵巢組織表達比較

表7 P27和P53在卵巢癌組織中表達的相關(guān)性 例

3 討論

大量研究證明P27蛋白表達的缺失或減少與消化道癌癥、肺癌、腎癌、前列腺癌等惡性腫瘤的浸潤性增加及預(yù)后不良密切相關(guān)［2］。本實驗通過免疫組化S-P方法對100例卵巢上皮性腫瘤以及20例正常卵巢上皮組織中的P27蛋白的表達進行檢測，結(jié)果可見P27蛋白陽性表達定位于胞漿及細(xì)胞核中，在正常組織中P27蛋白陽性表達主要定位于細(xì)胞核中，但在卵巢上皮性癌中陽性表達主要定位于細(xì)胞漿中，本實驗結(jié)果提示P27蛋白在卵巢正常上皮組織、良性腫瘤、交界性腫瘤及惡性腫瘤細(xì)胞核內(nèi)的表達陽性率有顯著差異(P＜0.05)，其在卵巢惡性腫瘤中的表達明顯低于正常卵巢組織，這與姚軍等［3］研究結(jié)果一致。并且本實驗結(jié)果提示P27蛋白表達的陽性率與卵巢癌組織分化程度、臨床分期有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在卵巢惡性腫瘤中，臨床分期越高、組織分化程度越低者P27蛋白的陽性表達率越低。P27蛋白的表達在低分化組明顯低于中高分化組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，P27蛋白的表達在臨床分期Ⅲ～Ⅳ期明顯低于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，這與 Shimizu等［4］研究結(jié)果一致，但其認(rèn)為P27蛋白的表達只與惡性腫瘤臨床分期相關(guān)，臨床分期是惟一影響預(yù)后的獨立預(yù)后因素。這種差異可能與樣本量大小、臨床分期及組織學(xué)分型等多個因素有關(guān)，有待進一步對卵巢惡性腫瘤患者進行大規(guī)模、系統(tǒng)性的研究，進而得出較可靠的一致性的結(jié)論。本實驗中，卵巢癌中的P27蛋白表達明顯低于卵巢正常組織、良性腫瘤及交界性腫瘤，而臨床期別越晚，組織分化程度越低，P27蛋白的表達越低。提示P27蛋白的表達與臨床分期及組織分化相關(guān)(P＜0.05)。說明P27在卵巢腫瘤中的發(fā)生發(fā)展、評估預(yù)后，指導(dǎo)治療及逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥中發(fā)揮重要作用。

現(xiàn)在已逐漸明確，P53基因分為野生型P53基因和突變型P53基因。野生型P53基因在維持細(xì)胞的正常生長、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖中起到了重要作用，而研究已證實突變型P53基因具有癌基因的功能，對細(xì)胞增殖有正性調(diào)控作用，促進瘤細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化［5］。P53蛋白的異常表達被認(rèn)為是P53基因突變的標(biāo)志。本實驗通過免疫組化S-P方法對100例卵巢上皮性腫瘤及20例正常卵巢上皮組織中的P53蛋白的表達進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大部分的腫瘤細(xì)胞核中可見P53蛋白表達。P53蛋白在卵巢正常上皮組織中不表達，而在卵巢良性腫瘤組織，交界性腫瘤組織及卵巢惡性腫瘤組織中表達的陽性率有顯著差異(P ＜0.05)，這與多項研究結(jié)果［6，7］一致。P53 蛋白的表達上調(diào)提示P53基因的表達在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，提示P53基因的突變與卵巢腫瘤惡性轉(zhuǎn)化直接相關(guān)。本實驗結(jié)果還提示P53蛋白表達的陽性率與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)類型無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。但有文獻報道P53蛋白的表達與年齡、淋巴轉(zhuǎn)移及組織學(xué)類型的關(guān)系還存在爭議。可能與收集的樣本數(shù)、實驗方法等因素有關(guān)，也可能與卵巢腫瘤在惡性發(fā)展中還有其他原癌基因激活和抑癌基因失活有關(guān)。而本實驗結(jié)果提示P53蛋白表達的陽性率與卵巢癌組織分化程度、臨床分期有關(guān)。組織分化越低，臨床期別越高，P53蛋白的表達陽性率越高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示P53基因的突變可能是發(fā)生在卵巢癌發(fā)生的早期，是卵巢癌發(fā)生過程中的早期事件，可以推測P53的表達是提示卵巢惡性腫瘤預(yù)后的一個十分有意義的指標(biāo)，

目前國內(nèi)外文獻對二者在卵巢上皮性腫瘤中的表達鮮見報道。本研究采用IHS評分法對每張病理切片進行綜合客觀的評分，對P27及P53在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢交界性腫瘤及上皮性卵巢癌組織中表達的相關(guān)分析，結(jié)果顯示：在卵巢上皮性腫瘤中P27和P53蛋白的IHS分值呈負(fù)性相關(guān)關(guān)系，表明兩者在卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮一定的相互作用。P53蛋白的陽性表達率越高說明細(xì)胞DNA損傷越嚴(yán)重，它與P27蛋白的表達呈負(fù)性相關(guān)，可以解釋為在M期腫瘤細(xì)胞損傷越多(即P53高表達)，其后在從G1向S期的轉(zhuǎn)化過程中受P27的抑制作用越少(即P27低表達);反之，若在M期受到P53的抑制越少(即P53低表達)，那么在從G1向S期的轉(zhuǎn)化過程中受P27的抑制越大(即P27高表達)。證實了P27和P53具有相當(dāng)?shù)念A(yù)后價值，特別是同時兩者檢測意義更大。本實驗研究雖然討論了兩者之間的關(guān)系，但細(xì)胞周期的調(diào)控還有很多因素參與。影響卵巢癌的諸多相關(guān)因子并非彼此獨立的起作用，其相互之間存在著內(nèi)在聯(lián)系，各自的作用及相互之間的作用機制尚待研究，多因素的檢測對卵巢癌的早期診斷、惡性程度的判斷具有一定意義，對于評價預(yù)后，指導(dǎo)卵巢癌的多基因治療，提高治療效果發(fā)揮著重要的作用。

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