檢測抗核抗體譜在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診治中的意義

程玉萍，李 麗

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是自身免疫介導(dǎo)的、以免疫性炎癥為突出表現(xiàn)的彌漫性結(jié)締組織病，病情表現(xiàn)復(fù)雜，致殘、致死率高。目前SLE的發(fā)病原因和機(jī)制尚不十分明確，但大量此方面的研究顯示，遺傳、內(nèi)分泌、感染、免疫異常和一些環(huán)境因素與本病的發(fā)生有關(guān)?？衫奂岸鄠€(gè)臟器、血清中過度產(chǎn)生大量自身抗體是其主要臨床特征［1］。近年來隨著免疫學(xué)檢測技術(shù)的飛速發(fā)展，自身抗體檢測正廣泛應(yīng)用于臨床。SLE的突出表現(xiàn)為B淋巴細(xì)胞高度活化而產(chǎn)生多種針對自身組織的自身抗體，ANA是其中很重要的一種。本文重點(diǎn)探討抗核抗體譜(ANAs)檢測在SLE診治中的應(yīng)用價(jià)值。

1 對象與方法

1.1 對象與分組 選擇2008年6月—2010年2月我院門診及住院治療的SLE 102例(SLE組)，男11例，女91例;年齡8～65歲，平均33．6歲;診斷均符合1997年美國風(fēng)濕學(xué)會(huì) SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。選擇同期32例其他風(fēng)濕性疾病為疾病對照組，男4例，女28例;年齡7～62歲，平均37．2歲;其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎18例，干燥綜合征8例，局限性硬化病、混合性結(jié)締組織病及幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎各2例，診斷均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。從本院體檢中心選擇健康體檢者30名作為正常對照組。3組年齡、性別等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集:采集被測者空腹靜脈血3 ml，及時(shí)分離血清置－20℃冰箱保存。

1.2.2 檢測方法:抗核抗體(ANA)檢測:采用間接免疫熒光法，試劑盒由美國Scimedx公司提供，嚴(yán)格按說明書操作。ANAs檢測:采用德國歐蒙公司的免疫印跡法細(xì)胞核和細(xì)胞漿抗體譜3檢測試劑盒。操作步驟:取免疫印跡條帶，加入稀釋血清1．5 ml，置搖床上孵育30 min，沖洗3次后加入1∶10稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體1．5 ml，置搖床上孵育30 min后沖洗3次，加入顯色劑置搖床上孵育10 min后沖洗3次。待膜條干后用掃描儀掃描，再用EUROLINEScan軟件判讀結(jié)果并打印成圖譜，根據(jù)著色強(qiáng)度，結(jié)果從0到(+)(弱陽性)、+、++、+++。

對資料完整的SLE住院患者治療后(出院前)檢測ANA和ANAs，追蹤觀察抗體水平的變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)(手工計(jì)算)，α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 ANA檢測結(jié)果 SLE組、疾病對照組和正常對照組的 ANA陽性率分別是:96．1%(98/102)、37．5%(12/32)、3．3%(1/30)，SLE 組 ANA 陽性率顯著高于疾病對照組和正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0．01)。

2.2 ANAs檢測結(jié)果 在正常對照組中未檢出針對15種抗原的抗體，而在SLE組和疾病對照組抗體出現(xiàn)了不同程度的陽性。SLE組抗nRNP/Sm抗體、抗Sm抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體及抗核糖體P蛋白抗體陽性率與疾病對照組和正常對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0．01)，見表 1。

表1 3組抗核抗體譜15種抗體陽性率比較

2.3 SLE組一次性檢出抗體陽性結(jié)果 SLE組只有3．9%的患者出現(xiàn)單項(xiàng)抗體陽性，有93．1%的SLE患者一次性檢出了2項(xiàng)及以上抗體，見表2。

2.4 動(dòng)態(tài)觀察ANA、抗Sm抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗核小體抗體變化結(jié)果 對資料完整且ANA、抗Sm抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗核小體抗體同時(shí)陽性的20例SLE住院患者進(jìn)行了追蹤觀察，治療后上述抗體均有不同程度的轉(zhuǎn)陰和(或)滴度下降，見表3。

表2 系統(tǒng)性紅斑狼瘡組一次性檢出抗體陽性情況(n=102)

表3 20例系統(tǒng)性紅斑狼瘡住院患者4種抗體治療前、后比較

3 討論

ANA靶抗原含義已由傳統(tǒng)的細(xì)胞核擴(kuò)展到現(xiàn)在的整個(gè)細(xì)胞，即是一組將自身所有抗原成分作為靶抗原的自身抗體的總稱。有學(xué)者認(rèn)為ANA可有助于早期診斷SLE，它在抗雙鏈DNA抗體和抗組蛋白抗體出現(xiàn)之前即可檢測到［4］。本研究中102例SLE ANA陽性率達(dá)96．1%，明顯高于疾病對照組(37．5%)和正常對照組(3．3%)。但由于 ANA也可在多種風(fēng)濕性疾病中出現(xiàn)，故ANA檢測對SLE診斷僅有重要的篩查價(jià)值。

采用德國歐蒙公司高度純化抗原包被膜條印跡法試劑盒，可一次性檢測出針對15種抗原的抗體，組成ANAs。本研究中SLE組檢測ANAs 15種抗體，除抗PM-Scl抗體陰性外，均出現(xiàn)不同程度的陽性。而其中對SLE診斷特異性較高的抗核小體抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗nRNP/Sm抗體、抗核糖體P蛋白抗體及抗Sm抗體陽性率分別為 67．6%、61．8%、50．0%、43．1%、41．2% 及36.3%，與疾病對照組和正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

抗Sm抗體、抗雙鏈DNA抗體和抗核糖體P蛋白抗體是目前公認(rèn)的幾種SLE特異性抗體?？筍m抗體幾乎僅見于SLE，是SLE的標(biāo)記性抗體。本研究中疾病對照組無一例抗Sm抗體陽性，但SLE組其陽性率較低，為36．3%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［5］。由于抗Sm抗體在SLE不活動(dòng)時(shí)亦可陽性，可作為回顧性診斷的依據(jù)［6］?？闺p鏈DNA抗體絕大多數(shù)只出現(xiàn)在SLE患者中，在SLE的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。有研究證實(shí)，抗雙鏈DNA抗體與DNA結(jié)合成為免疫復(fù)合物在腎小球基底膜沉積，或直接作用于腎小球抗原而造成SLE患者的腎損傷?？闺p鏈DNA抗體與狼瘡腎炎、關(guān)節(jié)炎、發(fā)熱密切關(guān)聯(lián)［7］。因此，檢測抗雙鏈DNA抗體不僅有助于診斷SLE，還可以判斷SLE的活動(dòng)性及評價(jià)療效?？购颂求wP蛋白抗體在SLE早期較抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體先呈現(xiàn)陽性，故對SLE早期診斷有重要價(jià)值［8］，且在抗雙鏈DNA抗體或抗Sm抗體陰性者中仍可出現(xiàn)陽性，聯(lián)合檢測可減少SLE的漏診。

RNP抗原可在多種自身免疫性疾病中存在，但與混合性結(jié)締組織病(MCTD)關(guān)系最密切，抗nRNP/Sm抗體被認(rèn)為是MCTD的標(biāo)志性抗體［9］，MCTD患者該抗體幾乎均為陽性，且其滴度很高?？筺RNP/Sm抗體在SLE中也有一定的陽性率。由于RNP與Sm有相同抗原位點(diǎn)，抗RNP抗體陽性有時(shí)伴隨抗Sm抗體陽性，反之亦然。因此抗nRNP/Sm抗體和抗Sm抗體應(yīng)同時(shí)檢測并根據(jù)滴度的高低加以鑒別。

抗核小體抗體是細(xì)胞凋亡過程中在細(xì)胞核內(nèi)裂解釋放的染色質(zhì)成分，由雙鏈DNA分子環(huán)繞組蛋白組成的核心構(gòu)成，因此屬于抗DNA組蛋白復(fù)合物抗體。有研究者報(bào)道，抗核小體抗體診斷SLE特異性高、敏感性強(qiáng)，可作為 SLE診斷的又一標(biāo)記性抗體［10］。本研究結(jié)果顯示，SLE患者中抗核小體抗體陽性率最高，為67．6%?？闺p鏈DNA抗體陽性的SLE患者常伴抗核小體抗體陽性，但又不完全重疊，可能是這兩種抗體出現(xiàn)于疾病的不同階段所致。

抗組蛋白抗體包括 H1、H2A、H2B、H3、H4等亞型，可在多種風(fēng)濕性疾病中出現(xiàn)［11］，特異性較差。本研究中疾病對照組抗組蛋白抗體陽性率僅為6.2%，SLE組為50%，比王嫻默等［12］報(bào)道的40%略高，可能選擇的病例及檢測方法不同有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，93．1%的SLE患者可一次性檢出2項(xiàng)及以上抗體，其中有2例出現(xiàn)了9項(xiàng)抗體同時(shí)陽性，但多集中在2～7項(xiàng)，而疾病對照組3項(xiàng)抗體同時(shí)陽性僅5例，無4項(xiàng)以上同時(shí)陽性者。這可能是由于SLE為一種異質(zhì)性疾病，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，不同患者的病情和受累臟器差異懸殊，在疾病的不同階段，血清中出現(xiàn)了不同的抗體。如在本研究中，有56．9%和20．6%的SLE患者抗SS-A抗體和抗SS-B抗體陽性?？筍S-A抗體和抗SS-B抗體是干燥綜合征的標(biāo)記性抗體，因SLE患者常并發(fā)干燥綜合征，故有些SLE患者血清中抗SS-A抗體和抗SS-B抗體陽性。

此外，本研究對ANA、抗Sm抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗核小體抗體同時(shí)陽性的20例資料完整的SLE住院患者治療前、后進(jìn)行了動(dòng)態(tài)觀察。除了ANA未做滴度測定，20例經(jīng)治療后上述抗體均有不同程度的轉(zhuǎn)陰和(或)滴度下降，抗雙鏈DNA抗體及抗核小體抗體好轉(zhuǎn)率達(dá)到85．0%和65．0%，提示這兩種抗體滴度的變化可能與SLE的活動(dòng)度相關(guān)，但具體機(jī)制有待擴(kuò)大樣本量深入觀察。

總之，由于SLE患者疾病活動(dòng)程度、病情不同，實(shí)驗(yàn)方法、檢測試劑存在差異，因此ANAs檢測的敏感性和特異性存在差異［13-14］，不能以某一次某一項(xiàng)檢測結(jié)果來診斷SLE。聯(lián)合檢測動(dòng)態(tài)觀察ANAs可避免因單項(xiàng)檢測而出現(xiàn)的漏診，有利于提高SLE的檢出率，還可監(jiān)測疾病活動(dòng)程度，對制訂治療方案有重要意義。

［1］ Reimer G．Correlates between autoantibodies to nuclear antigens and clinical features in patients with systemic sclerosis［J］．Arthritis Rheum，1998，41(2):525．

［2］ Hochberg M C．Updating the American college of rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］．Arthritis Rheum，1997，40(9):1725．

［3］ 梅長林．中國內(nèi)科年鑒［M］．北京:人民軍醫(yī)出版社，2004:573-653．

［4］ Amoura Z，Chabre H，Bach J F，et al．The appearance of anti uneleosome anti bodiesprecedes that of anti double stranded DNA and an i histones in muine lus［J］．Rev Med Interne，1993，14(10):980．

［5］ 李錦榮，梁玉全，何秋賢，等．抗核抗體、抗雙鏈-DNA及核抗原抗體聯(lián)合檢測對系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床診斷的價(jià)值［J］．黑龍江醫(yī)學(xué)，2010，34(12):881-883．

［6］ 葉任高．內(nèi)科學(xué)［M］．5版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:911．

［7］ 姚曦，李向培，倪進(jìn)東，等．SLE患者臨床表現(xiàn)、自身抗體的相關(guān)性分析及其性別、年齡特征調(diào)查［J］．安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，43(1):75-78

［8］ 張煜，張小萍，張奉春，等．抗核糖體P抗體的臨床分析［J］．中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2000，4(4):242-243．

［9］ Sato S，Hasegawa M，Ihn H，et al．Clinical significance of autinuclear matrix antibody in serum from patients with anti U1RNP antiboby［J］．Arch Dermatol Res，2000，292(2-3):55-59．

［10］ 沈海麗，于明禮，朱琴，等．抗核小體抗體測定在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的意義［J］．中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2007，11(8):145-148

［11］ 袁偉，崔劉福．系統(tǒng)性紅斑狼瘡自身抗體的研究進(jìn)展［J］．華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，10(3):325-327．

［12］ 王嫻默，肖林，范文，等．系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者ANA譜檢測分析［J］．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32(4):514-516．

［13］ 李崢，畢勝，楊曦，等．抗核抗體譜檢測對系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷價(jià)值［J］．云南醫(yī)藥，2005，26(5):400-402．

［14］ 王霞平，歐陽淑蘭．抗核抗體譜檢測對系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷價(jià)值的探討［J］．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21(5):1299．