HPLC測(cè)定三子降酶膠囊中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1含量

楊榮艷，宋瑩，張聰

(四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000)

中藥工業(yè)

HPLC測(cè)定三子降酶膠囊中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1含量

楊榮艷*，宋瑩，張聰

(四平市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 四平 136000)

目的：建立HPLC測(cè)定三子降酶膠囊中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量。方法：色譜柱Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-水梯度洗脫系統(tǒng)，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，柱溫為25 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果：三七皂苷R1和人參皂苷Rg1分別在7.9～126.4 μg·mL-1，25.6～409.6 μg·mL-1線性關(guān)系良好。三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl平均回收率分別為98.43%，99.01%，RSD分別為1.7%，1.4%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于三子降酶膠囊的質(zhì)量控制。

三子降酶膠囊；三七皂苷R1；人參皂苷Rg1；高效液相色譜；含量測(cè)定

三子降酶膠囊是由三七、五味子、決明子、女貞子4味中藥組成的復(fù)方制劑，具有保肝降酶功效，用于慢性肝炎及早期肝硬化所引起的轉(zhuǎn)氨酶升高。該制劑為吉林省食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的一類醫(yī)院制劑(批準(zhǔn)文號(hào)：Z2006C010)，標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其中的有效成分進(jìn)行含量測(cè)定[1]。三七為處方組成中貴重藥材之一，歸肝、胃經(jīng)，具有散瘀止痛、消腫定痛功能。為了控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用HPLC測(cè)定該制劑中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津2010AHT全自動(dòng)高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；CLASS-VP色譜工作站；島津UV-260可見-紫外分光光度計(jì)。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1對(duì)照品、三七皂苷R1對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110703-200424、110745-200415)；三子降酶膠囊(吉林省公主嶺市國(guó)文醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20110301，20110307，20110312，規(guī)格：0.3 g/粒)；陰性對(duì)照為本室自制；乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱Zorbax SB-C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈(A)-水(B)梯度系統(tǒng)。流速：1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm，進(jìn)樣量：10 μL，柱溫：25 ℃。梯度洗脫程序見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別取三七皂苷R1對(duì)照品和人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含三七皂苷R10.15 mg、人參皂苷Rg10.50 mg的溶液。

2.3 供試品溶液制備[2]

取本品適量，混勻，取約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，放置過夜，置80 ℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備

按處方取不含三七的各味中藥，按2.3供試品溶液制備成陰性對(duì)照品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，分別在上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明三七皂苷R1和人參皂苷Rg1與其相鄰峰之間分離度均大于1.5。陰性樣品不干擾測(cè)定。

1.三七皂苷R1 2.人參皂苷Rg1A.三七皂苷R1對(duì)照品 B.人參皂苷Rg1對(duì)照品 C.供試品 D.陰性對(duì)照品圖1 三子降酶膠囊及對(duì)照品HPLC圖

2.6 線性關(guān)系考察

精密量取三七皂苷R1對(duì)照品溶液0.5，1，3，5，8 mL，分別置10 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。再精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液0.5，1，3，5，8 mL，分別置10 mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液。在上述色譜條件下分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的回歸方程分別為：Y=3 124.6X-131.27，r=0.999 8；Y=4.52×103X-3 296.8，r=0.999 9。結(jié)果表明三七皂苷R1和人參皂苷Rg1分別在7.9～126.4 μg·mL-1，25.6～409.6 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

分別取上述三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl的峰面積，結(jié)果RSD分別為0.5%和0.6%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)樣品(批號(hào)：20110301)6份，按2.3項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl含量的RSD分別為1.2%和1.6%。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10 h進(jìn)樣10 μL，計(jì)算樣品峰面積的RSD分別為2.2%和2.4%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，每份約0.75 g，分別精密加入上述三七皂苷Rl對(duì)照品溶液2 mL和人參皂苷Rgl對(duì)照品溶液1 mL，照供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件依法測(cè)定，計(jì)算三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl回收率，結(jié)果見表2。平均回收率分別為98.43%，99.01%，RSD分別為1.7%，1.4%。結(jié)果見表2。

表2 三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl加樣回收率試驗(yàn)

2.11 樣品含量測(cè)定

取20110301，20110307，20110312 3批樣品，按供試品制備方法，每批樣品制備2份，依法測(cè)定三七皂苷Rl、人參皂苷Rgl總含量，結(jié)果分別為0.69，0.63，0.60 mg/粒。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取三七皂苷R1和人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液，用UV-260可見-紫外分光光度計(jì)在200～400 nm掃描，在203 nm處均有較強(qiáng)吸收峰，故選用203 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 溶劑和提取方法的選擇

采用《中國(guó)藥典》2010年版三七藥材含量測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液制備方法，此方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。

3.3 流動(dòng)相和柱溫的選擇

據(jù)查閱文獻(xiàn)資料[3-5]，三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的含量測(cè)定均采用乙腈-水梯度系統(tǒng)，因此本實(shí)驗(yàn)選用乙腈-水梯度系統(tǒng)，根據(jù)采用的色譜柱調(diào)整流動(dòng)相的比例，不同比例的流動(dòng)相對(duì)三七皂苷R1和人參皂苷Rg1的分離具有顯著影響。孫小玲[6]認(rèn)為柱溫對(duì)樣品的峰形影響較大，經(jīng)考察采用25 ℃條件對(duì)樣品進(jìn)行分析。

3.4 方法評(píng)價(jià)

該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，能有效控制該制劑的質(zhì)量。

[1] 吉林省食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)[S].JLZJ-ZB-0010-2006.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：11.

[3] 閻萍，谷雨龍，倪健，等.HPLC測(cè)定止鼾膠囊中三七皂苷R1與人參皂苷Rg1、Rb1含量[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2007，9(9)：21-23.

[4] 姚曦，何偉，李勇，等.HPLC法測(cè)定復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1、Rb1的含量[J].中國(guó)藥房，2011，22(15)：1398-1400.

[5] 來國(guó)防，楊冬，杜江，等.HPLC法測(cè)定田七痛經(jīng)散中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Rb1的含量[J].中國(guó)藥師，2010，13(1)：28-29.

[6] 孫小玲.HPLC法測(cè)定復(fù)方三七維康膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rbl、Rgl的含量[J].中國(guó)藥師，2013，16(3)：349-350.

DeterminationofNotoginsenosideR1andGinsenosideRg1inSanzijiangmeiCapsulesbyHPLC

YANG Rong-yan*，SONG Ying，ZHANG Cong

(SipingFoodandDrugControlInstitute，Siping136000,China)

Objective：To establish HPLC method for the determining of notoginsenoside R1and ginsenoside Rg1in Sanzi jiangmei Capsules.Methods：The Zorbax SB-C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)was used.The mobile phase was acetonitrile-water.The flow rate was 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was 203 nm and column temperature was 25 ℃.Results：The linear range of notoginsenoside R1and ginsenoside Rg1were 7.9-126.4 μg·mL-1，25.6-409.6 μg·mL-1respectively.The average recovery rate of notoginsenoside R1and ginsenoside Rg1were 98.43%，99.01%(RSD=1.7%，1.4%)respectively.Conclusion：This method is simple，accurate and reproductive，which can be used for the quality control of Sanzi jiangmei Capsules.

Sanzi jiangmei Capsules；NotoginsenosidebR1；Ginsenoside Rg1；HPLC；Determination

2013-03-05)

*

楊榮艷，主管藥師，主要從事藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；E-mail：yry_lg@126.com