阿特拉津?qū)﹄r雞的急性毒性作用和骨髓微核率的影響

靳 生，王冠穎，杜 強(qiáng)，郝雅環(huán)，李 術(shù)

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150030）

阿特拉津，又名莠去津，是選擇性內(nèi)吸傳導(dǎo)型苗前、苗后除草劑，是國際上使用最為廣泛的除草劑之一。在土壤中可被微生物分解，殘效期跟用藥劑量、土壤質(zhì)地等因素有關(guān)，可長達(dá)半年。適用于玉米、高粱、林地、草地、甘蔗等防除一年生和二年生闊葉雜草和單子葉雜草。20世紀(jì)80年代初我國開始使用阿特拉津，每年用量以平均20%的速度遞增［1］，雖然阿特拉津是一種中等偏低毒性的除草劑，但由于其使用量大、殘留期長（半衰期244d）、污染范圍廣（水環(huán)境、土壤大氣），對(duì)人和哺乳動(dòng)物可能有致癌作用，所以被列為環(huán)境荷爾蒙（內(nèi)分泌干擾劑）的可疑物質(zhì)，被聯(lián)合國認(rèn)定為27種持久性有毒化學(xué)污染物（Persistent Toxic Substances，PTS）之一［2－3］。目前有關(guān)阿特拉津?qū)ι锒纠硇?yīng)的研究主要集中在哺乳動(dòng)物的鼠類和兩棲動(dòng)物的蛙類。本試驗(yàn)以雛雞為研究對(duì)象，通過灌服測(cè)定阿特拉津?qū)﹄r雞的半數(shù)致死量，從而來研究阿特拉津?qū)﹄r雞的急性毒性作用。在此基礎(chǔ)上，通過試驗(yàn)阿特拉津?qū)﹄r雞骨髓微核的影響，來研究它的致突變性，為阿特拉津安全評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料 阿特拉津（吉林市世紀(jì)農(nóng)藥責(zé)任有限公司，批號(hào)：HNP33068），50%（M／N）；環(huán)磷酰胺（批號(hào)：20100302，山西省普德藥業(yè)有限公司）；秋水仙素。1日齡雛雞，36～40g（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)孵化場(chǎng)）。

1．2 方法

1．2．1 半數(shù)致死量的測(cè)定

1．2．1．1 預(yù)試驗(yàn) 配制濃度為125g／mL阿特拉津水溶液，將60只體重相近的4日齡雛雞隨機(jī)均分為6組，按藥品劑量（等差數(shù)列）分為6組并灌服給6組雛雞，連續(xù)觀察5d，反復(fù)試驗(yàn)，確定0死亡率和100%死亡率。

1．2．1．2 LD50測(cè)定試驗(yàn) 按照 Well′s法［4］設(shè)計(jì)試驗(yàn)，組間劑量對(duì)數(shù)差值為0．05325，將體重相近、日齡相同的雛雞隨機(jī)分為4組，每組4只，藥品劑量分別為383．3mg／kg體重，433．4mg／kg體重，489．9 mg／kg體重，553．9mg／kg體重，并分別編為1，2，3，4。待4日齡時(shí)進(jìn)行灌藥，連續(xù)觀察7d，并記錄每組雛雞死亡數(shù)。

1．2．2 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 選4日齡健康、體重相近的雞隨機(jī)分為5組，每組5只，即陰性對(duì)照組（生理鹽水20mL／kg體重），阿特拉津低劑量組（1／20 LD50）、中劑量組（1／15LD50）、高劑量組（1／10 LD50）、陽性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺20mg／kg體重）。連續(xù)染毒9d后取其胸骨，擠出骨髓液，滴在載玻片一端預(yù)先滴好的一滴胎牛血清中，混勻后推片，長度為2～3cm，固定（固定液固定）、染色（姬姆薩染色）、蒸餾水沖洗，干燥后進(jìn)行觀察。

1．3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2．1 急性中毒臨床癥狀 灌藥后連續(xù)觀察7d，雛雞表現(xiàn)為食欲減退，精神委靡，雙翅下垂。死亡前雛雞全身痙攣，喙邊充滿黏液，呈昏迷狀態(tài)。第3組和第4組給藥劑量大，較早出現(xiàn)癥狀，12h后雛雞開始死亡。第1組和第2組灌藥后第2天雛雞開始死亡，直到第5天停止死亡。

2．2 半數(shù)致死量的計(jì)算 LD50為451．43978mg／kg體重；LD5095%可信限為390．82670～521．45332 mg／kg體重。

2．3 雛雞骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果 阿特拉津?qū)﹄r雞的骨髓嗜多染紅細(xì)胞的微核率有顯著影響（如表1），可以觀察到明顯的微核，見圖1，隨著阿特拉津濃度的增大骨髓微核率升高，呈劑量－效應(yīng)關(guān)系。

圖1 骨髓微核試驗(yàn)

表1 阿特拉津致雞骨髓細(xì)胞微核率的檢測(cè)

3 討論與分析

3．1 半數(shù)致死量測(cè)定 有關(guān)阿特拉津?qū)ι锒纠硇?yīng)的研究，主要集中在哺乳動(dòng)物的鼠類和兩棲動(dòng)物的蛙類，尚未報(bào)道有關(guān)雞的毒性試驗(yàn)。本試驗(yàn)測(cè)定半數(shù)致死量為451（mg／kg體重）。不同種類動(dòng)物還有不同的染毒方式對(duì)阿特拉津的敏感性不同，試驗(yàn)表明，阿特拉津?qū)?dòng)物的急性毒性，LD50672mg／kg體重（大鼠經(jīng)口）；850mg／kg體重（小鼠經(jīng)口）；750mg／kg體重（兔經(jīng)口）；7 500mg／kg體重（兔經(jīng)皮）。

3．2 阿特拉津?qū)﹄r雞骨髓微核率的影響 骨髓微核試驗(yàn)是檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)致突變性的常用方法，是一種廣泛應(yīng)用于遺傳毒性檢測(cè)的快速、簡便方法。它主要是通過微核率的變化來反映化學(xué)物質(zhì)的遺傳毒性，因此微核率是檢測(cè)細(xì)胞遺傳毒性損傷的一種重要指標(biāo)，許多學(xué)者都進(jìn)行過研究。肖凱、李宏霞研究環(huán)磷酰胺劑量、取樣時(shí)間對(duì)小鼠骨髓微核率的影響，結(jié)果表明40mg／kg體重和80mg／kg體重環(huán)磷酰胺均可致小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞的微核率顯著增加（P＜0．01），具有劑量反應(yīng)關(guān)系［5］。黃海雄等人研究了三氯乙烯染毒對(duì)小鼠微核的影響，結(jié)果顯示三氯乙烯小鼠骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性［6］。

關(guān)于阿特拉津毒性的研究也有很多試驗(yàn)，有研究表明，3ng／mL的阿特拉津可使倉鼠染色體斷裂［7］；張?jiān)降热嗽囼?yàn)報(bào)道稱阿特拉津?qū)π∈笪⒑诵纬蔁o顯著影響［8］。本次試驗(yàn)研究的結(jié)果表明，隨著阿特拉津染毒濃度的增大，雛雞骨髓細(xì)胞微核率也逐漸增大，試驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比有極顯著性差異 （P＜0．01）。

［1］ 萬年升，顧繼東，段舜山．阿特拉津生態(tài)毒性與生物降解的研究［J］．北京環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2006，26（4）：552－560．

［2］ Hayes T，Kelly H，Tsui M，etal．Herbicides：feminization of male frogs in the wild．Nature［J］．2002，419：895－896．

［3］ 秦傳玉，趙勇勝，劉娜，等．阿特拉津在土壤中的吸附行為［J］．環(huán)境污染與防治，2007，29（3）：165－167．

［4］ 張銑，劉毓谷．毒理學(xué)［M］．北京：北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1997．

［5］ 肖凱，李宏霞．環(huán)磷酰胺劑量、取樣時(shí)間對(duì)小鼠骨髓微核率的影響［J］．癌變畸變突變，2005，17（6）：367－369．

［6］ 黃海雄，黃錦周，黃鈺，等．三氯乙烯染毒小鼠骨髓微核試驗(yàn)觀察［J］．職業(yè)與健康，2002，18（4）：35－36．

［7］ 弓愛君，葉常明．除草劑阿特拉津（Atrazine）的環(huán)境行為綜述［J］．環(huán)境科學(xué)進(jìn)展，1997，5（2）：37．

［8］ 金煥榮，張?jiān)?，段志文，等．阿特拉津?qū)π∈笪⒑思熬踊温实挠绊懀跩］．沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，2（2）：72－73．