腸桿菌科細(xì)菌ESBLs和AmpC酶檢測(cè)及耐藥性分析

張俊峰 許現(xiàn)偉

近幾年在臨床上抗菌藥物得到了廣泛的應(yīng)用，然而隨著應(yīng)用率的增加，使得細(xì)菌耐藥性也逐漸增強(qiáng)，給臨床治療和醫(yī)院感染的控制菌構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。目前在臨床上腸桿菌屬于常見耐藥菌，為抗感染治療中的重點(diǎn)［1］。本次研究中出于對(duì)腸桿菌科細(xì)菌ESBLs和AmpC酶檢測(cè)結(jié)果與耐藥性情況進(jìn)行分析探討的目的，對(duì)我院收集的236株菌株展開了ESBLs和AmpC酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和藥敏實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)匯報(bào)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 資料來源于我院患者標(biāo)本培養(yǎng)的腸桿菌，抽取236株作為研究對(duì)象，包括大腸埃希菌85株，克雷伯菌67株，沙雷菌屬26株，檸檬酸桿屬18株，耶爾森菌屬14株，變形菌屬9株，其他17株。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 對(duì)以上統(tǒng)計(jì)菌株分別采取用雙紙片氯唑西林增效試驗(yàn)和雙紙片確診試驗(yàn)對(duì)AmpC酶與ESBLs表型進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)檢出率，而后展開藥敏試驗(yàn)，對(duì)比分析產(chǎn)酶均與非產(chǎn)酶菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.2.2 檢測(cè)方法 ESBLs檢測(cè):采取雙紙片確診試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，即紙片擴(kuò)散法進(jìn)行表型篩選，經(jīng)確證實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，在篩選時(shí)頭孢他啶抑菌環(huán)直徑≤22 mm，頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑≤27 mm，則表明菌株可能產(chǎn)ESBLs，在確證實(shí)驗(yàn)時(shí)，在上述藥物中加入克拉維酸后同沒有加克拉維酸抑菌環(huán)進(jìn)行比較，增加值在5 mm或以上者證實(shí)為產(chǎn)ESBLs。

AmpC酶檢測(cè):采取雙紙片氯唑西林增效試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，即紙片擴(kuò)散法進(jìn)行表型篩選，而后經(jīng)改良Hodge試驗(yàn)進(jìn)行確證。篩選時(shí)紙片擴(kuò)散法頭孢西丁抑菌圈直徑不超過18 mm者可能產(chǎn)AmpC酶，確證試驗(yàn)時(shí)頭孢西丁抑菌圈變化值在2 mm以上者證實(shí)產(chǎn)AmpC酶［2］。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn)采取紙片擴(kuò)散法，對(duì)臨床常用抗生素的耐藥性進(jìn)行測(cè)定，質(zhì)控菌為大腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 研究中所得到的相關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行處理分析，針對(duì)計(jì)數(shù)資料和組間對(duì)比分別進(jìn)行t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，在P＜0.05時(shí)，視為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ESBLs和AmpC酶檢測(cè)結(jié)果 經(jīng)統(tǒng)計(jì)，本組236株菌株中檢出AmpC酶菌102株，檢出率為43.22%;檢出ESBLs菌120株，檢出率為 50.85%。其中單產(chǎn) AmpC酶菌 92株(38.98%)，單產(chǎn) ESBLs菌110株(46.61%)，產(chǎn) AmpC酶和ESBLs菌 10株(4.24%)，不產(chǎn) AmpC酶、ESBLs均 24株(10.17%)。

2.2 藥敏試驗(yàn) 單產(chǎn)AmpC酶菌、單產(chǎn)ESBLs菌以及產(chǎn)AmpC酶+ESBLs菌對(duì)氨曲南、氨芐西林、阿米卡星以及頭孢噻肟的耐藥率較非產(chǎn)AmpC酶菌高(P＜0.05)，所有腸桿菌對(duì)青霉素均有較強(qiáng)耐藥性(P＞0.05)。詳見表1。

表1 不同菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較(例，%)

3 討論

ESBLs為質(zhì)粒介導(dǎo)的，可以對(duì)青霉素類、頭孢菌素類及單環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生水解作用的一種β-內(nèi)酰胺酶，其能夠在菌株間轉(zhuǎn)移以及傳播。AmpC酶則是由腸桿菌、不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌等一些革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的一種β-內(nèi)酰胺酶，且可以對(duì)第三代頭孢菌素、單環(huán)類以及頭霉素類等β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生顯著的耐藥性，其底物譜較ESBLs更寬，并且對(duì)酶抑制劑不敏感［3］。臨床研究證實(shí)產(chǎn)生酶的菌株一般在病情重、住院時(shí)間長(zhǎng)以及一些惡性腫瘤患者中比較多見，并且在經(jīng)常使用免疫抑制劑或者是免疫缺陷者中的檢出率也較高。目前在臨床上腸桿菌為常見的一種耐藥菌，本次研究中出于對(duì)其耐藥性原因進(jìn)行探討的目的，對(duì)236株菌株展開了AmpC酶與ESBLs表型檢測(cè)，并對(duì)比分析了不同菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果，最終發(fā)現(xiàn)，本組AmpC酶檢出率為43.22%，ESBLs檢出率為50.85%，且單產(chǎn)AmpC酶菌、單產(chǎn)ESBLs菌以及產(chǎn)AmpC酶+ESBLs菌對(duì)氨曲南、氨芐西林、阿米卡星以及頭孢噻肟的耐藥率較非產(chǎn)AmpC酶菌高。由此可知導(dǎo)致腸桿菌產(chǎn)生耐藥性的主要因素為產(chǎn)AmpC酶與ESBLs，因此在今后的臨床用藥治療過程中，應(yīng)對(duì)其給予關(guān)注，合理使用抗生素，以提高治療效果，降低耐藥率。

［1］ 嚴(yán)子禾.雙紙片氯唑西林增效試驗(yàn)檢測(cè)高產(chǎn)AmpC酶的大腸埃希菌和克雷伯菌．臨床檢驗(yàn)雜志，2008，26(06):450．

［2］ 周志慧．兩種檢測(cè)陰溝腸桿菌AmpC酶方法的比較．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，25(05):88-90．

［3］ 羅蘭．腸桿菌科菌持續(xù)產(chǎn)AmpC酶的檢出及耐藥分析．臨床檢驗(yàn)雜志，2010，22(01):41-42．