張 燕 楊春娟 劉飛虎 肖 凡 袁 方
1.西安市精神衛(wèi)生中心,陜西西安 710061;2.西安醫(yī)學(xué)院,陜西西安 710068;3.陜西中醫(yī)學(xué)院,陜西咸陽(yáng) 712000
研究報(bào)道谷氨酸功能障礙可能參與了精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制,許多學(xué)者證明谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(N-me thy-l D-aspartate,NMDA)受體的拮抗劑地卓西平馬來(lái)酸(MK-801)能引起擬精神分裂癥的癥狀和認(rèn)知功能損害[1-2]。因而MK-801已成為許多研究者建立精神分裂癥動(dòng)物模型的工具藥[3-4]。精神分裂癥是臨床最常見(jiàn)的社會(huì)危害性大,治愈率低的精神疾病[5]。雖然非典型抗精神病藥如利培酮可以明顯改變精神分裂癥精神癥狀,但其不良反應(yīng)較多較常見(jiàn),使患者服藥的依從性下降,故降低了療效[6]。隨著研究的深入,中西藥物合并使用治療精神分裂癥已顯示出明顯的優(yōu)勢(shì)及前景[7]。西安市精神衛(wèi)生中心將消幻湯(又名:清幻靈)主要用于肝膽濕熱引起的幻聽(tīng),情緒不穩(wěn),脈玄舌尖紅,苔薄黃的患者,臨床應(yīng)用已四十余年。而且經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)查閱和前期研究表明,消幻湯中主要組成成分的龍膽草、磁石、酸棗仁、柴胡等對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有明顯的調(diào)節(jié)作用[8-10]。所以本實(shí)驗(yàn)研究利培酮和消幻湯合并使用對(duì)于MK-801誘導(dǎo)谷氨酸低下精神分裂癥小鼠模型的作用,為中西藥物合并使用治療精神分裂癥提供更多基礎(chǔ)研究資料。
70只健康昆明種小鼠雌雄各半,體質(zhì)量為(20±2)g,清潔級(jí),購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類飼料飼養(yǎng)且自由飲食,維持室溫(22±1)℃。適應(yīng)3 d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
MK-801(購(gòu)自美國(guó)Sigma公司)溶于生理鹽水。利培酮(購(gòu)自西安市楊森制藥有限公司,批號(hào):H2001 0309)研成粉末以蒸餾水溶解。消幻湯方劑藥材(購(gòu)自陜西省老百姓大藥房),將磁石加入水中煮沸10 min,后加其余藥物煮沸40 min,過(guò)濾取汁,二煎30 min,兩次濾液合并濃縮成每毫升含生藥0.799 g的藥液。
BA-200避暗儀、DT-200跳臺(tái)儀、ZZ-6自主活動(dòng)儀均購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。
昆明種小鼠70只隨機(jī)分為五組,每組14只,適應(yīng)3 d,其中一組作為空白組腹腔注射給予生理鹽水,其余四組連續(xù)腹腔注射 MK-801[(0.072 mg/mL,5 mL/(kg·d)]2 周。
造模后給藥,隨機(jī)編為模型組、利培酮組、消幻湯組、利培酮和消幻湯合并使用組(簡(jiǎn)稱合并組)。其中空白組、模型組灌胃給予蒸餾水,利培酮組、消幻湯組、合并組,分別給與利培酮[0.121 mg/mL,10 mL/(kg·d)]、消幻湯[(0.799 g/mL,10 mL/(kg·d)]、利培酮[(0.242 mg/kg,5 mL/(kg·d)]和消幻湯[(1.598 g/mL,5 mL/(kg·d)]。
1.6.1 自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn) 自主活動(dòng)儀由可分離反應(yīng)箱和微電腦控制器組成,同時(shí)對(duì)6只小鼠進(jìn)行自主測(cè)試實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前,各組小鼠均為健康活潑的小鼠,輕捉拿小鼠,放入活動(dòng)箱內(nèi)先適應(yīng)3 min后開(kāi)始測(cè)定5 min小鼠站立和活動(dòng)次數(shù)。 每次實(shí)驗(yàn)均在 8∶00~10∶00 和 16∶00~18∶00進(jìn)行測(cè)驗(yàn),記錄每組小鼠站立和活動(dòng)次數(shù)。
1.6.2 避暗法實(shí)驗(yàn)[11]被動(dòng)回避條件反射箱大小為36 cm×12 cm×12 cm。分明暗兩間,明間頂蓋上方置有小臺(tái)燈,暗間底部安銅柵,通以33 V、50 Hz伏電流,明暗兩室之間有一直徑為3 cm的洞口,反射連接一記時(shí)器,記錄動(dòng)物從明間通過(guò)洞口進(jìn)入暗間的潛伏期。實(shí)驗(yàn)前將避暗潛伏期大于180 s的小鼠棄去不用。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小白鼠頭部背著洞口放入明間,小鼠一進(jìn)入暗間立即受到電擊,而記時(shí)器則同時(shí)停止記時(shí),取出小鼠,記錄每組小鼠進(jìn)入暗間的平均潛伏期。
1.6.3 跳臺(tái)法實(shí)驗(yàn)[11]實(shí)驗(yàn)裝置為(10 cm×10 cm×60 cm)被動(dòng)回避條件反射箱,用不透明黑色塑料板分隔成6間,箱底有銅柵,通以32 V電流,每間置一橡皮墊(高和直徑均為4.5 cm)作為動(dòng)物回避電擊,動(dòng)物的正常反應(yīng)是跳回橡皮墊上,為此訓(xùn)練10 min并紀(jì)錄2 min的潛伏時(shí)間。
采用軟件SPSS 10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩獨(dú)立樣本的計(jì)量資料采用t檢驗(yàn);多組間的比較采用方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
通過(guò)避暗法訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)之后,空白組、模型組、利培酮組、消幻湯組和合并組篩選后只數(shù)分別為10、11、10、10、11只。造模結(jié)束后,以上各組的平均體重分別為 24.54、24.10、24.01、24.27、24.42 g, 組間小鼠只數(shù)和體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
由表1可知,在造模結(jié)束時(shí),模型組動(dòng)物活動(dòng)次數(shù)明顯增加,第2、6周模型組的小鼠站立次數(shù)約比空白組多10次。而在隨后的4周安慰劑干預(yù)下,模型組隨著時(shí)間推移,高活動(dòng)性有所下降,但平均活動(dòng)次數(shù)仍比空白組多5次。造模2周末,模型組避藥潛伏時(shí)間較空白組延長(zhǎng)約30 s,但模型組的跳臺(tái)潛伏期卻縮短了3 s。
表1 空白組與模型組測(cè)試項(xiàng)目結(jié)果(±s)
表1 空白組與模型組測(cè)試項(xiàng)目結(jié)果(±s)
注:與空白組比較,*P<0.05
第2周末第6周末空白組模型組空白組模型組10 11 10 11 48.8±11.9 54.3±14.0 46.5±11.3 56.3±7.6 11.3±14.5 36.8±16.2*11.6±11.3 17.4±7.6 230.0±34.8 260.2±6.9 241.2±7.8 255.9±23.5 98.5±34.3 95.5±45.6 117.0±9.4 104.3±28.5測(cè)試時(shí)間 組別 只數(shù) 站立次數(shù)(次)活動(dòng)次數(shù)(次)避暗潛伏期(s)跳臺(tái)潛伏期(s)
給藥后,利培酮組、利培酮及消幻湯合并使用組站立次數(shù)分別為38.5、36.6次,均低于模型組約20次。給藥后,利培酮組、合并組活動(dòng)次數(shù)分別為9.0、8.6次,均低于模型組約9次。結(jié)果見(jiàn)表2。
用避暗儀測(cè)小鼠嗜黑暗偏好行為的變化,給藥4周后,模型組潛伏期縮短4.4 s,利培酮組、消幻湯組、合并組分別延長(zhǎng)13.9、15.0、34.1 s;與模型組比較,合并組潛伏期延長(zhǎng)35.5 s(P< 0.05),見(jiàn)表3。
表2 小鼠自主探究活動(dòng)的結(jié)果(次,±s)
表2 小鼠自主探究活動(dòng)的結(jié)果(次,±s)
模型組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 56.3±7.6 38.5±26.4 53.4±6.7 36.6±23.9 17.4±7.6 9.0±26.4 15.3±3.1 8.6±23.9組別 只數(shù) 站立次數(shù) 活動(dòng)次數(shù)
表3 小鼠嗜黑暗偏好行為的觀察結(jié)果(s,±s)
表3 小鼠嗜黑暗偏好行為的觀察結(jié)果(s,±s)
注:與模型組比較,*P<0.05
模型組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 260.2±6.9 257.6±24.5 254.9±40.0 259.6±25.1 255.9±23.5 271.6±4.5 270.0±23.7 293.8±6.4-4.4 13.9 15.0 34.1*組別 只數(shù) 造模潛伏期 給藥潛伏期 潛伏期延長(zhǎng)時(shí)間
用跳臺(tái)儀測(cè)小鼠嗜角落偏好行為的變化,給藥4周后,模型組、利培酮組、消幻湯組、合并組平均潛伏期分別延長(zhǎng) 8.8、16.8、18.1、20.2 s。 其中,模型組延長(zhǎng)時(shí)間要比上述3組短近10 s,見(jiàn)表4。
表4 小鼠嗜角落偏好行為的觀察結(jié)果(s,±s)
表4 小鼠嗜角落偏好行為的觀察結(jié)果(s,±s)
造模組利培酮組消幻湯組合并組11 10 10 11 95.5±45.6 96.6±33.9 98.0±40.2 96.3±36.3 104.3±28.5 113.5±19.3 114.4±14.8 118.4±7.7 8.8 16.8 18.1 20.2組別 只數(shù) 造模潛伏期 給藥潛伏期 潛伏期延長(zhǎng)時(shí)間(s)
精神分裂癥在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中屬“癲病”和“狂病”范疇,病位在神機(jī),與肝膽心脾有關(guān),主要是由于氣滯、痰結(jié)、血瘀等因素導(dǎo)致臟氣不平、陰陽(yáng)失調(diào)、神機(jī)逆亂而出現(xiàn)情志失調(diào)[12-13]。根據(jù)該病特點(diǎn),消幻湯主要針對(duì)肝膽實(shí)熱所引起的神志失常、情志失調(diào)、虛妄見(jiàn)聞等癥狀所設(shè),通過(guò)疏肝瀉熱,清心活血,安神定志之功效,而調(diào)理氣血陰陽(yáng),達(dá)到治療疾病的目的。由于大部分精神分裂癥患者缺乏自知力,治療初期需盡快控制癥狀以減少危險(xiǎn)情況的發(fā)生,臨床上采用中西藥結(jié)合的治療方法,可減輕治療中的不良反應(yīng)[14-16]。
本實(shí)驗(yàn)自主活動(dòng)儀實(shí)驗(yàn)證實(shí),連續(xù)腹腔注射MK-801(0.072 mg/mL)兩周造模誘導(dǎo),空白組,模型組,合并組自主活動(dòng)明顯增加,其探究活動(dòng)較空白組相比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。蘇允愛(ài)等[4]結(jié)果也表明,MK-801誘導(dǎo)谷氨酸功能低下精神分裂癥模型小鼠的自主性活動(dòng)增多。給藥后,消幻湯組探究活動(dòng)減少次數(shù)不明顯,則說(shuō)明消幻湯單獨(dú)使用對(duì)中樞沒(méi)有抑制作用,僅起到調(diào)節(jié)作用,利培酮對(duì)中樞有明顯抑制作用,而消幻湯和利培酮合并使用對(duì)小鼠中樞有一定的溫和抑制作用。李光華等[5]結(jié)果也表明消幻湯成份中的磁石對(duì)小鼠的中樞有調(diào)節(jié)作用。
避暗儀和跳臺(tái)儀實(shí)驗(yàn)證實(shí),消幻湯組避暗潛伏期和跳臺(tái)潛伏期延長(zhǎng)時(shí)間均高于利培酮組,則消幻湯的酸棗仁和柴胡等成份可能對(duì)小鼠的并對(duì)損害學(xué)習(xí)記憶有保護(hù)作用。侯建平等[6]的結(jié)果也表明,消幻湯成份酸棗仁能增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力的作用。季吉等[17]研究適當(dāng)劑量的柴胡注射液在一定時(shí)間內(nèi)具有提高小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的功效,該作用可能與伴隨的腦組織抗氧化能力提高和NO含量改變有關(guān)。合并組小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng)促使小鼠遠(yuǎn)離黑暗和角落的電擊傷害。
本研究提示,利培酮藥效雖強(qiáng),但對(duì)中樞系統(tǒng)明顯抑制作用,而消幻湯藥效溫和,僅對(duì)中樞系統(tǒng)起調(diào)節(jié)作用,消幻湯對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的保護(hù)作用強(qiáng)于利培酮。利培酮和消幻湯兩種藥物合并使用療效優(yōu)于利培酮或消幻湯單獨(dú)使用療效。利培酮和消幻湯合并使用充分驗(yàn)證中西藥結(jié)合治療可以揚(yáng)各自之長(zhǎng),避各自之短,中西藥合用的臨床療效可能優(yōu)于單純中藥或單純西藥治療,這對(duì)于應(yīng)用合適藥物治療精神分裂癥有十分重要的意義。
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