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    注射用鹽酸胺碘酮細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究

    2013-09-07 09:05:56許姿敏
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2013年8期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)毒素注射用藥典

    陳 琪 許姿敏

    廣東省食品藥品檢驗(yàn)所藥理室,廣東廣州 510180

    注射用鹽酸胺碘酮屬為抗心絞痛藥,能選擇性擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血流量,同時(shí)減少心肌耗氧量,減慢心率,降低房室傳導(dǎo)速度,與β-受體阻滯劑的效應(yīng)相似。用于室上性和室性心動(dòng)過速、陣發(fā)性心房撲動(dòng)和顫動(dòng)、預(yù)激綜合征,也可用于頑固性陣發(fā)性心動(dòng)過速、慢性冠狀動(dòng)脈功能不全及心絞痛等[1-2]。當(dāng)不宜口服給藥時(shí)應(yīng)用本品治療嚴(yán)重的心律失常,尤其適用于下列情況:房性心律失常伴快速室性心律、W-P-W綜合征的心動(dòng)過速和嚴(yán)重的室性心律失常[3]。本文根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》(簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)2010年版二部附錄ⅪE“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”中所述的藥品細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查方法及其干擾試驗(yàn)的基本原理,對(duì)注射用鹽酸胺碘酮的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查進(jìn)行了研究[4]。本文列出了相同廠家3個(gè)不同批次的樣品在不同廠家鱟試劑(TAL)下的干擾試驗(yàn)數(shù)據(jù),闡明了對(duì)注射用鹽酸胺碘酮進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的可行性,進(jìn)一步建立了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。現(xiàn)報(bào)道如下:

    1 儀器與試劑

    1.1 儀器

    旋渦振蕩器 (IKA-MS-1);恒溫水浴箱 (德國(guó)Julabo 19A)。

    1.2 試劑

    細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用鱟試劑 (靈敏度:0.125 EU/mL;規(guī)格:0.1 mL/支;批號(hào):1011181)、BET 水(批號(hào):1101040;規(guī)格:5.0 mL/支),購(gòu)于廣東湛江安度斯生物有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用鱟試劑(靈敏度:0.125 EU/mL;規(guī)格:0.1 mL/支;批號(hào):1102130)購(gòu)于廣東湛江博康海洋生物有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):150601-201174;效價(jià):160 EU/支)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

    2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

    2.1 鱟試劑靈敏度(λ)的復(fù)核

    上述兩個(gè)批號(hào)鱟試劑(1011181、1102130)經(jīng)由細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品(150601-201174)標(biāo)定,結(jié)果均在 0.5~2.0 λb(標(biāo)準(zhǔn)靈敏度)之間,符合《中國(guó)藥典》的相關(guān)規(guī)定,可用于試驗(yàn)。

    2.2 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)的確定

    細(xì)菌內(nèi)毒素限值L=K/M[3],式中K為成人每千克體重每小時(shí)最大可接受的細(xì)菌內(nèi)毒素劑量,《中國(guó)藥典》規(guī)定注射劑 K=5 EU/(kg·h);M 為人用每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量,人均體重按60 kg計(jì)算,按照注射用鹽酸胺碘酮說明書的用法與用量,本品成人一日總量1 200 mg,4 h 內(nèi)滴注完畢,L=K/M=5 EU/(kg·h)/1 200 mg×60 kg×4 h=1.0 EU/mg[5]。

    2.3 最小有效稀釋濃度(MVC)的確定

    限值L為1.000 EU/mg時(shí),根據(jù)公式MVC=λ/L,當(dāng)選用鱟試劑靈敏度為λ=0.125 EU/mL時(shí),供試品溶液中鹽酸胺碘酮的最大有效稀釋倍數(shù)為MVC=λ/L=0.125 mg/mL。

    2.4 樣品干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)

    采用靈敏度為0.125 EU/mL的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查鱟試劑,對(duì)批號(hào)為100601的供試品進(jìn)行稀釋檢驗(yàn),分別稀釋為濃度 0.500、0.250、0.125、0.060 mg/mL。具體過程如下:取本品1瓶(0.15g/瓶)加BET水稀釋至30.0mL(稀釋濃度為5.000mg/mL),取濃度為5.000 mg/mL的稀釋液1.0 mL加BET水至10.0 mL(濃度為0.500 mg/mL),取濃度為0.500 mg/mL的稀釋液5.0 mL加 BET水至 10.0 mL(濃度為 0.250 mg/mL),取濃度為0.250 mg/mL的稀釋液5.0 mL加BET水至10.0 mL(濃度為0.125 mg/mL),取濃度為0.125 mg/mL的稀釋液5.0 mL 加BET 水至 10.0 mL(濃度為 0.060 mg/mL)[6]。試驗(yàn)中另設(shè)陽(yáng)性對(duì)照(PC)和陰性對(duì)照(NC),每個(gè)濃度設(shè)2管平行管,結(jié)果詳見表1。

    表1 供試品(批號(hào)100601)干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

    由表1可以判斷當(dāng)鹽酸胺碘酮濃度為0.500 mg/mL時(shí),供試品有增強(qiáng)TAL與細(xì)菌內(nèi)毒素之間凝集反應(yīng)的作用,稀釋至濃度0.250 mg/mL時(shí),干擾現(xiàn)象消除??梢赃x擇靈敏度λ為0.125 EU/mL的TAL,稀釋樣品至0.125 mg/mL進(jìn)行干擾確證試驗(yàn)。

    2.5 供試品干擾試驗(yàn)

    取1個(gè)廠家的3批注射用鹽酸胺碘酮,用BET水進(jìn)行稀釋,稀釋濃度為0.125 mg/mL,選用兩個(gè)廠家靈敏度為0.125 EU/mL的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn),結(jié)果顯示,Et值均落在0.5~2.0 Es范圍內(nèi),且相應(yīng)的Et/Es比值均在0.5~2.0之間,表明注射用鹽酸胺碘酮稀釋至0.125 mg/mL或者以下濃度時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用。見表2。

    2.6 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

    本品共3批,按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XI E“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”[3],分別進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,結(jié)果顯示,供試品注射用鹽酸胺碘酮在稀釋至0.125 mg/mL及以下濃度時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用。本研究中將注射用鹽酸胺碘酮的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值定為:每1 mg鹽酸胺碘酮中含細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)小于1.0 EU。對(duì)3批樣品分別按擬訂標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn),其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均符合規(guī)定。見表3。

    表2 干擾試驗(yàn)結(jié)果

    表3 注射用鹽酸胺碘酮細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

    3 討論

    供試品預(yù)干擾試驗(yàn)的目的是評(píng)價(jià)供試品濃度對(duì)鱟試劑與內(nèi)毒素凝集反應(yīng)的干擾程度及干擾性質(zhì),由試驗(yàn)結(jié)果可得出對(duì)檢查無干擾的樣品濃度范圍及相應(yīng)TAL的靈敏度,減少后續(xù)實(shí)驗(yàn)的盲目性。目前市售的鱟試劑靈敏度(λ)一般在0.50~0.03 EU/mL,因此注射用鹽酸胺碘酮進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)時(shí)不同的鱟試劑所對(duì)應(yīng)的最小有效稀釋濃度 分 別 為 0.500 mg/mL、0.250 mg/mL、0.125 mg/mL、0.060 mg/mL、0.030 mg/mL。由表2可見,當(dāng)鹽酸胺碘酮濃度為0.500 mg/mL時(shí),供試品有增強(qiáng)TAL與細(xì)菌內(nèi)毒素之間凝集反應(yīng)的作用,稀釋至濃度0.250 mg/mL及以下濃度時(shí),增強(qiáng)作用消失,干擾現(xiàn)象消除。可確定不出現(xiàn)干擾的第1個(gè)樣品稀釋濃度為注射用鹽酸胺碘酮的0.250 mg/mL稀釋液。因此正式干擾實(shí)驗(yàn)時(shí),可選擇鱟試劑靈敏度為0.25~0.03EU/mL[7]。

    不同廠家的鱟試劑在生產(chǎn)工藝、抗干擾能力等方面存在差異。因此,本研究采用兩個(gè)不同廠家的、靈敏度0.125EU/mL的鱟試劑,對(duì)3個(gè)批號(hào)樣品進(jìn)行正式干擾實(shí)驗(yàn),其Et/Es均在0.5~2.0范圍內(nèi),說明樣品在該濃度下對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(凝膠法)無干擾。因此,可將注射用鹽酸胺碘酮的細(xì)菌內(nèi)毒素限值L定為1.0 EU/mg,選擇靈敏度λ為0.25~0.03 EU/mLTAL,并將樣品稀釋到相應(yīng)濃度檢查細(xì)菌內(nèi)毒素限度[8]。

    試驗(yàn)表明,本品可按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅪE第一法(凝膠法)檢查細(xì)菌內(nèi)毒素,限值設(shè)為:每1毫克鹽酸胺碘酮中含細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)小于1.0 EU。經(jīng)檢驗(yàn),3批樣品內(nèi)毒素檢查均符合規(guī)定。

    國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) (WS1-(X-211)-2004Z)中僅規(guī)定了注射用鹽酸胺碘酮熱原檢查的劑量為:加滅菌注射用水配制成每1毫升約含鹽酸胺碘酮30 mg的溶液,按家兔體重每千克注射1 mL,應(yīng)符合規(guī)定?!吨袊?guó)藥典》2010年版、美國(guó)藥典、日本藥典、歐洲藥典7.0版、英國(guó)藥典2010年版均未對(duì)注射用鹽酸胺碘酮細(xì)菌內(nèi)毒素限值作出規(guī)定[9]。但由于本次試驗(yàn)只收集到1個(gè)廠家樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的方法學(xué)研究實(shí)驗(yàn),樣品批次較少,建議進(jìn)一步收集多廠家多批次樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的方法學(xué)研究實(shí)驗(yàn),如按上述實(shí)驗(yàn)進(jìn)行,結(jié)果符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)的要求,可按本研究中擬定注射用鹽酸胺碘酮細(xì)菌內(nèi)毒素檢查標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制。

    [1]孫振永,慕玉瑩,陳日棉.胺碘酮治療頻發(fā)室性早搏的臨床療效觀察[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2012,9(17):49-50.

    [2]陳陣,劉亞鳳,胡念丹,等.文獻(xiàn)對(duì)胺碘酮、利多卡因治療陣發(fā)性室性心動(dòng)過速預(yù)后差異的Meta分析[J].臨床誤診誤治,2012,25(4):35-38.

    [3]羅梅芳.胺碘酮的臨床應(yīng)用和不良反應(yīng)分析[J].中外醫(yī)療,2012,31(21):99.

    [4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄99-102.

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