原發(fā)性高血壓患者子代人群載脂蛋白E基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系

容春莉，于 薇，姚文靜，李如意，曹東平，彭應(yīng)心

(河北省人民醫(yī)院，石家莊 050051)

載脂蛋白E(ApoE)是一種多態(tài)性蛋白，參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝過(guò)程，其基因可以調(diào)節(jié)許多生物學(xué)功能。研究表明，ApoE基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但其與血壓正常的原發(fā)性高血壓患者子代人群的關(guān)系國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)報(bào)道。2009年3月～2010年2月，我們對(duì)原發(fā)性高血壓患者子代人群ApoE基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)系進(jìn)行了分析?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期選擇我院健康體檢者120例，經(jīng)相關(guān)檢查未發(fā)現(xiàn)糖尿病、高血壓、冠心病及其他影響血脂代謝的全身性疾病。根據(jù)有無(wú)高血壓家族史分為2組:原發(fā)性高血壓子代組60例(研究組)，男39 例、女21 例，年齡(48.7 ±10.8)歲;入選標(biāo)準(zhǔn):父母雙方或一方有原發(fā)性高血壓，高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)符合1999年WHO/ISH規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，除外繼發(fā)性高血壓、冠心病、缺血性腦病及肝腎系統(tǒng)疾病者。正常對(duì)照組60例(對(duì)照組)，男36例、女24例，年齡(46.6±9.3)歲，入選標(biāo)準(zhǔn):父母雙方均無(wú)高血壓、冠心病、缺血性腦病及肝腎系統(tǒng)疾病者。兩組性別、年齡具有可比性。研究對(duì)象均為無(wú)血緣關(guān)系的中國(guó)北方漢族人。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 詳細(xì)記錄所有研究對(duì)象的年齡、性別等，并測(cè)量身高、體質(zhì)量，計(jì)算BMI;采用臺(tái)式血壓計(jì)于每日10:00測(cè)量右上肢血壓3次，取其平均值作為收縮壓、舒張壓。采血前12 h禁食煙、酒、茶、咖啡等，于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，置入含有1/10體積0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝液的試管中，分離血清，用于測(cè)定血脂指標(biāo)，血細(xì)胞用于測(cè)定ApoE基因型。

1.2.2 ApoE基因型的檢測(cè) ①DNA提取:采用經(jīng)典法分離提取血細(xì)胞DNA。②目的序列PCR擴(kuò)增:PCR擴(kuò)增DNA，PCR引物參照Tsai等［1］的報(bào)道設(shè)計(jì)(上游引物序列:5'-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3';下游引物序列:5'-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3')。將擴(kuò)增反應(yīng)體系以6000 r/min離心5 min，97℃預(yù)變性180 s，95℃變性45 s，68℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循環(huán)35次，最后72℃延伸120 s。③PCR產(chǎn)物測(cè)序:經(jīng)酶切后在凝膠成像分析系統(tǒng)下觀察ApoE基因型:在48、72 bp處顯現(xiàn)2條區(qū)帶者為E4/4，在81、91 bp處顯現(xiàn)2條區(qū)帶者為E2/2，在48、91 bp 處顯現(xiàn) 2 條區(qū)帶者為 E3/3，在 48、72、91 bp處顯現(xiàn)3條區(qū)帶者為E3/4，在48、81、91 bp處顯現(xiàn)3 條區(qū)帶者為 E2/3，在48、72、81、91 bp 處顯現(xiàn)4條區(qū)帶者為E2/4。

1.2.3 血脂水平檢測(cè) 血標(biāo)本處理后，采用同一臺(tái)Beckman全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)兩組血脂水平。以膽固醇氧化酶法測(cè)定總膽固醇(TC)、甘油激酶法測(cè)定甘油三酯(TG)，直接法測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。以上4項(xiàng)指標(biāo)均由專人操作。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，結(jié)果比較采用t檢驗(yàn)和方差分析;基因頻率用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算，比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料比較 兩組BMI、血壓、血脂指標(biāo)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 兩組ApoE基因型及等位基因比較 所有研究對(duì)象的PCR片段均得到滿意擴(kuò)增，檢測(cè)到6種ApoE基因型，與用Hardy-Weinberg平衡推導(dǎo)出的預(yù)期基因型頻率基本一致，均達(dá)到連鎖平衡(χ2=4.26，P ＞ 0.05)，具有群體代表性。見(jiàn)圖 1。將ApoE基因型分為三組:ε2等位基因攜帶者E2/X(E2/3+E2/2基因型)、ε3等位基因攜帶者(E3/3基因型)、ε4等位基因攜帶者E4/X(E3/4+E4/4基因型)，E2/4因中性作用而排除在外。兩組ApoE基因型及等位基因頻率的分布見(jiàn)表2。兩組均以ApoE3/3基因型為優(yōu)勢(shì)基因型，與對(duì)照組相比，研究組 ApoE4/4基因型高于對(duì)照組(χ2=4.68，P＜0.05)。兩組均以ε3等位基因頻率最高，ε2等位基因頻率最低。研究組ε4等位基因頻率高于對(duì)照組(χ2=12.42，P ＜0.05)。

表1 兩組臨床資料比較()

表1 兩組臨床資料比較()

組別 n BMI(kg/m2)收縮壓(mmHg)舒張壓(mmHg)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)研究組 60 20.08 ±0.17 128 ±10 82 ±7 4.42 ±0.92 1.39 ±0.30 1.41 ±0.44 2.87 ±0.59對(duì)照組 60 24.60 ±0.34 124 ±11 76 ±9 4.28 ±0.67 1.28 ±0.54 1.17 ±0.30 2.98 ±0.87

圖1 ApoE各基因型凝膠電泳圖

表2 兩組ApoE基因型及等位基因頻率的分布

3 討論

ApoE具有轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用，在血脂代謝中具有重要意義。ApoE基因位于人類第19號(hào)染色體p13～q13區(qū)，并與ApoCⅠ、CⅡ共同形成基因簇，在功能上發(fā)揮協(xié)同作用。ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化及高血壓的發(fā)生密切相關(guān)［2，3］。因此，ApoE 基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系越來(lái)越受到人們的關(guān)注［4］。

ApoE的合成是由位于同一基因位點(diǎn)上的3個(gè)等位基因(ε2、ε3、ε4)所控制，分別編碼血漿中 3 種主要異構(gòu)體(E2、E3、E4)，構(gòu)成6種不同的基因型，即3 種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)、3 種雜合子(E3/2、E4/3、E4/2)。不同人群ApoE等位基因最常見(jiàn)的是E3，E2和E4可能是母體形式在人類進(jìn)化過(guò)程中單一核苷酸點(diǎn)突變的結(jié)果。不同國(guó)家、民族ApoE等位基因頻率不同，存在明顯的種族差異［5］。有研究顯示，在中國(guó)人群中 ε2、ε4等位基因頻率為0.084、0.064，而 ε3 為 0.852。本研究發(fā)現(xiàn)，研究組與對(duì)照組均以E3/3表型及ε3等位基因最為常見(jiàn)，ε2和ε4相對(duì)少見(jiàn)，與多數(shù)研究結(jié)果相符，說(shuō)明中國(guó)北方漢族人群，無(wú)論有無(wú)高血壓家族史，ApoE ε3等位基因頻率的分布最高。

有研究表明，ApoE4/4基因型和ε4等位基因頻率在原發(fā)性高血壓患者中是增加的，提示ε4可能是高血壓相關(guān)的遺傳因素之一。Yilmaz等［6］對(duì)88例高血壓患者和63例正常健康者研究發(fā)現(xiàn)，ε4等位基因攜帶者的高血壓患者有很高的靶器官損害危險(xiǎn)，如左室肥厚和左房擴(kuò)大，且與血壓高低相平行。但到目前，關(guān)于原發(fā)性高血壓患者子代人群ApoE基因多態(tài)性的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究測(cè)定了60例血壓正常的原發(fā)性高血壓患者子代的ApoE基因型，并計(jì)算ApoE等位基因頻率。結(jié)果顯示，原發(fā)性高血壓患者子代的ε4等位基因頻率高于對(duì)照組，推測(cè)原發(fā)性高血壓患者子代人群高血壓的易感基因?yàn)锳poE ε4等位基因。但高血壓病是一種多因素、多基因疾病，ApoE基因多態(tài)性與血壓之間的關(guān)系頗為復(fù)雜，可能通過(guò)基因—基因及基因—環(huán)境間的相互作用［7］，以某些直接或間接的方式影響血壓，故原發(fā)性高血壓患者子代人群是否發(fā)生高血壓受遺傳、環(huán)境等多種因素的影響。

總之，進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，研究遺傳易感因素在血壓正常的原發(fā)性高血壓患者子代人群中的作用，盡早發(fā)現(xiàn)高血壓，早期干預(yù)治療，有助于減少高血壓在這些人群中的發(fā)病率，提高生活質(zhì)量。

［1］Tsai MY，Suess P，Schwichterberg K，et al.Determination of apolipoprotein E genotypes by single-strand conformational polymorphism［J］.Clin Chem，1993，39(10):2121-2124.

［2］Viitanen L，Pihlajamaki J，Miettinen R，et al.Apolipoprotein E gene promoter(-219G/T)polymorphism is associated with premature coronary heart disease［J］.J Mol Med(Berl)，2001，79(12):732-737.

［3］Imazu M，Yamamoto H，Toyofuku M，et al.Association of apolipoprotein E phenotype with hypertension in Japanese-American:data from the Hawaii--Los Angeles-Hiroshima Study［J］.Hypertension Res，2001，24(5):523-529.

［4］Li X，Du Y，Du Y，et al..Association of apolipoprotein E gene polymorphism with essential hypertension and its complications［J］.Clin Exp Med，2003，2(4):175-179.

［5］Seet WT，Mary Anne TJ，Yen TS.Apolipoprotein E gene genotyping in the Malay，Chinese and Indian ethnic groups in Malaysia-a study on the distribution of the different apoE alleles and genotypes［J］.Clin Chim Acta，2004，340(1-2):201-205.

［6］Yilmaz H，Isbir T，Agachan B，et al.Is epsilon4 allele of apolipoprotein E associated with more severe end-organ damage in essential hypertension［J］.Cell Biochem Funct，2001，19(3):191-195.

［7］Hagberg JM，F(xiàn)errell RE，Dengel DR，et al.Exercise training-induced blood pressure and plasma lipid improvements in hypertensives may be genotype dependent［J］.Hypertension，1999，34(1):18-23.