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    嬰兒配方羊奶粉對(duì)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其蛋白質(zhì)體內(nèi)消化研究

    2013-09-04 10:22:22顧浩峰張富新晏慧莉賈潤(rùn)芳
    食品工業(yè)科技 2013年19期
    關(guān)鍵詞:羊奶粉幼齡酪蛋白

    顧浩峰,張富新 ,張 怡,晏慧莉,賈潤(rùn)芳

    (1.陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院,陜西西安710062;2.安康學(xué)院農(nóng)學(xué)與生命科學(xué)院,陜西安康725000)

    嬰兒時(shí)期是人生中最重要的生理階段,在此期間嬰兒自身代謝系統(tǒng)尚未發(fā)育完善,而生長(zhǎng)發(fā)育非常旺盛,因此需要攝入營(yíng)養(yǎng)全面、易于消化吸收的食物[1-2]。長(zhǎng)期以來,母乳被視為嬰兒的最佳食品,但由于女性工作、健康等原因,嬰兒的母乳喂養(yǎng)率較低,所以研究開發(fā)母乳替代品已經(jīng)成為營(yíng)養(yǎng)學(xué)家和乳品工作者研究的熱點(diǎn)問題[3-5]??紤]到嬰兒生理代謝能力差和生長(zhǎng)發(fā)育迅速這一特殊生理狀態(tài),母乳替代品對(duì)幼齡動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)效果和生長(zhǎng)發(fā)育的影響成為評(píng)價(jià)該類食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值時(shí)必須參考的重要指標(biāo)[6]。同時(shí)由于蛋白質(zhì)是母乳替代品中一類重要的營(yíng)養(yǎng)素,它是嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育必要的物質(zhì)基礎(chǔ),所以質(zhì)優(yōu)量足、易于消化吸收的蛋白質(zhì)對(duì)嬰兒時(shí)期生長(zhǎng)發(fā)育及各項(xiàng)生理功能具有重要意義[7-8]。目前,我國(guó)主流的母乳替代品是嬰兒配方牛奶粉,其他種類的嬰兒配方食品較少。但近年來,隨著嬰兒配方牛奶粉過敏案例的不斷增加和人們營(yíng)養(yǎng)意識(shí)的提升,具有較低致敏率和豐富營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的羊奶和以羊奶為主要原料的嬰兒配方奶粉受到人們普遍重視[9-10],但有關(guān)嬰兒配方羊奶粉,特別是其消化吸收和對(duì)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育影響方面的研究目前報(bào)道較少。因此本文通過昆明小鼠體內(nèi)消化實(shí)驗(yàn)和SD大鼠28d生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),研究嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化率和該奶粉對(duì)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的促進(jìn)作用,評(píng)價(jià)嬰兒配方羊奶粉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,為進(jìn)一步研究和開發(fā)嬰兒配方羊奶粉提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    全脂羊奶粉 由陜西圣唐乳業(yè)有限公司生產(chǎn),其中蛋白質(zhì) 24.84%,脂肪 31.85%,碳水化合物34.34%,氨基酸評(píng)分為67,飽和脂肪酸/不飽和脂肪酸比為2.14,礦物質(zhì)6.5%,Ca/P比為1.1;嬰兒配方牛奶粉 購(gòu)于超市某品牌嬰兒配方牛奶粉,其中蛋白質(zhì)12.5%,脂肪26%,碳水化合物56,氨基酸評(píng)分為80,飽和脂肪酸/不飽和脂肪酸比為1.6,礦物質(zhì)3.6%,Ca/P比為3;嬰兒配方羊奶粉 由本實(shí)驗(yàn)室研究的嬰兒配方羊奶粉,其成分均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。其中蛋白質(zhì)13.51%,脂肪27%,碳水化合物56.27%,氨基酸評(píng)分為88,飽和脂肪酸/不飽和脂肪酸為1.22,礦物質(zhì)3.5%,Ca/P比為2.1;昆明小鼠60只,平均體重為(20±0.05)g,雌雄各半,購(gòu)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心;清潔級(jí)斷乳雄性SD大白鼠30只,4周齡,體重40~50g,購(gòu)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心;硫酸銅、硫酸鉀、三氯乙酸、98%濃硫酸、鹽酸 、硼酸、甲基紅、溴甲酚綠、95%乙醇、氫氧化鈉 均為分析純。

    KDY-9810凱氏定氮儀 北京市通潤(rùn)源機(jī)電技術(shù)有限責(zé)任公司;消化爐 瑞典FOSS公司;低溫高速離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司;LGJ-18C真空冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科學(xué)儀器廠。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化實(shí)驗(yàn) 體內(nèi)消化參照吳慶賀的方法[2],并加以改進(jìn)。將60只平均體重為(20±0.05)g昆明小鼠分成3組,每組20只,雌雄各半。其中第1組為羊奶全脂奶粉組,第2組為市售牛奶嬰兒配方粉組,第3組為羊奶嬰兒配方粉組。正式實(shí)驗(yàn)前小鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下適應(yīng)3天,適應(yīng)期間飼喂常備飼料,自由進(jìn)水。第4天早晨開始禁食不禁水12h,隨后向每只小鼠定量灌入0.5mL濃度為40%的奶粉溶液,在灌食后第0.5、1、2、3、4h分別屠宰每組中的4只,迅速剖開腹腔,取出胃、十二指腸,置于冰盒中保存。

    1.2.2 動(dòng)物生長(zhǎng)效果實(shí)驗(yàn)

    1.2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組參照陸翔的方法并對(duì)其加以改進(jìn)[11]。將30只清潔級(jí)4周齡斷乳雄性SD大白鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境(室溫(21±2)℃,室內(nèi)相對(duì)濕度RH=(32% ±2%),自然光照)下適應(yīng)3d。適應(yīng)期間飼喂常備飼料,自由進(jìn)水。第4d早晨停食,3h稱體重。按體重分成3組,每組10只,單籠飼養(yǎng),各組間的大鼠平均體重?zé)o顯著差異(p>0.05),第一組為全脂羊奶粉組,第二組為嬰兒配方牛奶粉組,第三組為嬰兒配方羊奶粉組。

    1.2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料配制 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料的配制參照仇秀珍的方法[6]。以實(shí)驗(yàn)組嬰兒配方羊奶粉的熱量為標(biāo)準(zhǔn),其余兩組以白糖調(diào)配成與實(shí)驗(yàn)組等熱量的奶粉后分別作為各組大鼠飼料。各組飼料奶粉的營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

    表1 各組飼料奶粉的營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 Nutritional components of different milk powders

    1.2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)參照陸翔的方法[11]。每日投放給大鼠的飼料量為大鼠體重的15%,其間大鼠自由攝取規(guī)定的飼料,自由飲水,實(shí)驗(yàn)周期為28d。記錄實(shí)驗(yàn)開始第 0、7、14、21、28d 的身長(zhǎng)和體重,并記錄每只幼鼠食物攝入量,計(jì)算食物利用率及熱能效價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,斷頸椎處死老鼠,取出大鼠的心臟、肝臟、腎臟、脾臟和性腺,并稱重測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)臟器發(fā)育情況。

    1.3 測(cè)定方法

    1.3.1 蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化率測(cè)定 奶樣中蛋白質(zhì)體內(nèi)消化率的測(cè)定參照吳慶賀和洪濱的方法[2,12],并對(duì)其加以改進(jìn)。用生理鹽水沖洗1.2.1步驟取出的胃和腸消化道,將胃液和腸液收集于25mL燒杯中,在-50℃下進(jìn)行真空冷凍干燥48h。用10mL蒸餾水溶解凍干樣品,12000r/min低溫高速離心10min。收集上清液,按體積比1∶1加入0.6mol/L三氯乙酸沉淀蛋白,5000r/min低溫離心15min,收集蛋白質(zhì)沉淀,用凱氏定氮法測(cè)定其中蛋白質(zhì)的含量[13],然后用下面公式計(jì)算消化率。

    蛋白質(zhì)消化率(%)=灌入奶樣中蛋白質(zhì)的含量-胃腸中剩余蛋白的含量/灌入奶樣中蛋白質(zhì)的含量×100

    1.3.2 奶粉的利用率、蛋白質(zhì)功效比和熱能價(jià)效的計(jì)算 奶粉的食物利用率、蛋白質(zhì)功效比及熱能效率依照下列進(jìn)行公式計(jì)算[6,11]。

    食物利用率(%)=(體重增量/同期內(nèi)的進(jìn)食量)×100

    蛋白質(zhì)功效比 =體重增量/同期內(nèi)攝入的蛋白量

    熱能效價(jià)=(體重增量/同期內(nèi)攝入的熱量)×418.4

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0 One way ANOVA軟件分析處理,并進(jìn)行顯著性差異分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化率

    消化率是機(jī)體消化吸收的食物量占食物總攝入量的百分比,是評(píng)價(jià)食物營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)以全脂羊奶粉和嬰兒配方牛奶粉為對(duì)照,對(duì)嬰兒配方羊奶粉進(jìn)行體內(nèi)消化,評(píng)價(jià)嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化率。不同奶粉樣品中蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化率如圖1所示。

    表2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠的身長(zhǎng)和體重Table 2 Value of length and weight of rats in different group

    表3 各組實(shí)驗(yàn)大鼠的重要臟器重量及臟器與體重比值Table 3 Value of viscera weight and ratio of viscera weight to body weight for rats in different group

    圖1 不同樣品奶粉中蛋白質(zhì)的體內(nèi)消化率Fig.1 In vivo digestibility of proteins in different milk powders

    由圖1可知,隨著消化時(shí)間的延長(zhǎng),3組奶粉中蛋白質(zhì)的消化率均呈逐漸上升趨勢(shì),并且在灌食后一定時(shí)間段內(nèi),不同組別奶粉中蛋白質(zhì)的消化率存在一定差別。在灌食后2h內(nèi),3組奶粉中蛋白質(zhì)的消化率差別較大(p<0.05),均為全脂羊奶粉組消化率最低,嬰兒配方奶粉中蛋白質(zhì)的消化率較高,其中嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)的消化率最高,在灌食后2h時(shí)達(dá)到75.79%,顯著高于嬰兒配方牛奶粉組(p<0.05)。表明嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)能夠較快地被機(jī)體消化吸收,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高。這與Jasinska[14]的研究結(jié)果以及前期的體外消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。在灌食3h后,各組奶粉中蛋白質(zhì)的消化率上升趨勢(shì)逐漸平緩,且各組奶粉中蛋白質(zhì)消化率無(wú)顯著差別(p>0.05)。但在灌食4h時(shí),嬰兒配方羊奶粉組蛋白質(zhì)的消化率明顯高于其他兩個(gè)對(duì)照組(p<0.05),消化率達(dá)到95.26%。由此表明,嬰兒配方羊奶粉中大部分的蛋白質(zhì)可以被機(jī)體吸收利用,其蛋白質(zhì)的消化效果更好。

    2.2 嬰兒配方羊奶粉對(duì)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的影響

    2.2.1 嬰兒配方羊奶粉幼齡動(dòng)物身長(zhǎng)和體重的影響

    以四周齡的SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,進(jìn)行上述奶粉的喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,測(cè)定不同奶粉樣品對(duì)幼齡動(dòng)物身長(zhǎng)和體重的影響,結(jié)果見表2。

    由表2可以看出,在實(shí)驗(yàn)開始階段,各組大鼠的體重和身長(zhǎng)均無(wú)顯著差異(p>0.05)。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)期飼養(yǎng)后,3組大鼠的體重和身長(zhǎng)均有不同程度的增長(zhǎng),其中全脂羊奶粉組大鼠體重已明顯落后于嬰兒配方奶粉組(p<0.05),并且在兩組嬰兒配方奶粉中嬰兒配方羊奶粉組大鼠體重最高(p<0.05),為216.47g。同樣在大鼠身長(zhǎng)方面,全脂羊奶粉組大鼠身長(zhǎng)增長(zhǎng)最緩慢,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)該組大鼠身長(zhǎng)最短(p<0.05),而嬰兒配方羊奶粉組大鼠身長(zhǎng)達(dá)到23.56cm,顯著高于其他兩個(gè)對(duì)照組(p<0.05)。由此表明,嬰兒配方羊奶粉在促進(jìn)幼年機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育方面明顯優(yōu)于等熱量的全脂羊奶粉和嬰兒配方牛奶粉。

    2.2.2 嬰兒配方羊奶粉對(duì)幼齡動(dòng)物體內(nèi)臟器發(fā)育的影響 各組SD大鼠體內(nèi)臟器發(fā)育情況見表3。

    由表3可以看出,各組大鼠內(nèi)臟發(fā)育狀況有一定差別。在臟器重量方面,除脾臟外,嬰兒配方奶組大鼠臟器重量均高于全脂羊奶粉組,并且在兩組嬰兒配方奶粉組中,羊嬰兒配方奶粉組大鼠的臟器重量最高。在臟器/體重比值方面,各組大鼠的心、肝、腎、脾和性腺的臟器/體重比值接近,無(wú)顯著差別(p>0.05)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的臟器重量及臟器/體重比值是動(dòng)物正常生理狀態(tài)和生物醫(yī)學(xué)研究的重要基礎(chǔ)指標(biāo),對(duì)特殊食品的開發(fā)具有重要指導(dǎo)意義[16-17]。本實(shí)驗(yàn)中嬰兒配方奶粉組大鼠臟器重量和臟器/體重比值與李武祎[18]的研究結(jié)果基本一致。由此說明,嬰兒配方牛奶粉和嬰兒配方羊奶粉均能有效促進(jìn)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育,其中嬰兒配方羊奶粉在促進(jìn)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育方面的作用較為明顯。

    表4 各組奶粉的熱能效價(jià)、蛋白質(zhì)功效比值和食物利用率Table 4 Energy efficiency,protein efficiency ratio,food utilization rate for different milk powders

    2.3 嬰兒配方羊奶粉的熱能價(jià)效、蛋白質(zhì)功效比和食物利用率

    熱能價(jià)效、蛋白質(zhì)功效比和食物利用率通常作為評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo),各組奶粉樣品的熱能價(jià)效、蛋白質(zhì)功效比和食物利用率見表4。

    由表4可以看出,各組奶粉的熱能價(jià)效、蛋白質(zhì)功效比和食物利用率均有一定差別,并且差異顯著(p<0.05)。全脂羊奶粉的熱能價(jià)效、蛋白質(zhì)功效比和食物利用率都較低,顯著低于嬰兒配方奶粉組(p<0.05),并且嬰兒配方羊奶粉組的3個(gè)指標(biāo)均最高,分別達(dá)到3.27g/418.4kJ、1.26以及17.03%。由此表明,在等熱量的條件下,嬰兒配方羊奶粉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高于嬰兒配方牛奶粉和全脂羊奶粉。

    3 討論

    本實(shí)驗(yàn)對(duì)嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)進(jìn)行體內(nèi)消化分析,研究結(jié)果表明,嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)最終體內(nèi)消化率明顯高于其他兩個(gè)對(duì)照組(p<0.05),嬰兒配方牛奶粉其次,全脂羊奶粉最低,這可能是由于各組樣品奶粉中蛋白質(zhì)組分不同所致。嬰兒配方羊奶粉和嬰兒配方牛奶粉經(jīng)科學(xué)調(diào)配,其中乳清蛋白:酪蛋白不低于60∶40,而全脂羊奶粉中蛋白質(zhì)以酪蛋白為主。酪蛋白在酸性條件下容易凝聚,其消化吸收性低于乳清蛋白,所以全脂羊奶粉組蛋白質(zhì)的消化率較低[11,19]。另一方面,雖然嬰兒配方羊奶粉和嬰兒配方牛奶粉中乳清蛋白與酪蛋白含量相當(dāng),但兩類嬰兒配方奶粉中乳清蛋白和酪蛋白的組成以及各蛋白組分的消化吸收性能不同,這可能是嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)消化率高于嬰兒配方牛奶粉的重要原因。從酪蛋白方面看,嬰兒配方羊奶粉中酪蛋白主要是β-酪蛋白,αs1-酪蛋白含量較低,而嬰兒配方牛奶粉中主要的酪蛋白是β-乳球蛋白[20]。有研究表明,羊奶酪蛋白的消化率高于牛奶酪蛋白,且其主要原因正是羊奶中含有較多β-酪蛋白[14]。同時(shí),羊奶酪蛋白凝乳更細(xì)、更軟,酪蛋白的膠束更大等特性也促使了羊奶酪蛋白能夠更好的被機(jī)體消化吸收[21-22]。從乳清蛋白方面看,兩類嬰兒配方奶粉的組成差別不大,都主要由α-乳白蛋白和β-乳球蛋白構(gòu)成[20]。但 El-Zahar和 Almaas發(fā)現(xiàn)羊奶 β-乳球蛋白的消化率比牛奶β-乳球蛋白高,而乳清蛋白的其他組分(α-乳白蛋白、免疫球蛋白、乳鐵蛋白等)消化率差別不大[23-24]。因?yàn)?β-乳球蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)中幾個(gè)氨基酸組成不同,使得羊奶β-乳球蛋白表面比牛奶β-乳球蛋白具有更強(qiáng)的疏水性,從而更多的疏水C端暴露到分子表面,胃蛋白酶優(yōu)先水解包含疏水氨基酸殘基的肽鍵,所以羊奶中β-乳球蛋白消化性更好[24]。同時(shí),也有報(bào)道顯示αs1-酪蛋白的存在會(huì)增加機(jī)體內(nèi)β-乳球蛋白的抗體,不利于β-乳球蛋白的消化吸收,所以β-乳球蛋白的消化率與奶中αs1-酪蛋白的含量成負(fù)相關(guān)[25]。此外,雖然本研究中各組奶粉中其他營(yíng)養(yǎng)成分(脂肪、礦物質(zhì)、碳水化合物等)含量相差不大,但這些物質(zhì)可能略微影響蛋白酶的活力,從而影響蛋白質(zhì)的消化率。另外實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由于實(shí)驗(yàn)過程中驚嚇、拉稀等生理現(xiàn)象也會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的消化率產(chǎn)生影響。但就總體而言,本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果與前人研究基本一致。

    本研究中動(dòng)物生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,嬰兒配方羊奶粉組幼齡動(dòng)物身長(zhǎng)、體重、內(nèi)臟等生長(zhǎng)發(fā)育狀況都優(yōu)于其他兩個(gè)對(duì)照組,這可能是嬰兒配方羊奶粉中營(yíng)養(yǎng)組成較為合理的原因。在蛋白質(zhì)方面,嬰兒配方奶粉中氨基酸配比與母乳具有高度相關(guān)性,而且體外和體內(nèi)消化分析也顯示了較高的消化率,所以從理論上來說其蛋白質(zhì)功效比應(yīng)當(dāng)較高。在脂肪方面,嬰兒配方羊奶粉的脂肪組成接近母乳,不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸比例約為1.2,符合營(yíng)養(yǎng)推薦要求,并且其中亞油酸和亞麻酸這種必需脂肪酸含量適宜,因此其脂肪的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值消化吸收性能優(yōu)于其他兩個(gè)對(duì)照組。在礦物質(zhì)方面,全脂營(yíng)養(yǎng)奶粉中礦物質(zhì)含量偏高,過高的礦物質(zhì)含量不利于幼齡動(dòng)物的生長(zhǎng),兩組嬰兒配方羊奶粉中礦物質(zhì)含量適宜,但嬰兒配方羊奶粉中Ca和P比值接近2,符合營(yíng)養(yǎng)推薦需求,因此從礦物質(zhì)來看嬰兒配方羊奶粉也具有明顯的營(yíng)養(yǎng)優(yōu)勢(shì)。當(dāng)然,在研究幼齡動(dòng)物內(nèi)臟的發(fā)育狀況時(shí),具有實(shí)施器官剪切摘取過程中也會(huì)造成一定的誤差,但就總體來看,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本與預(yù)期的理論結(jié)果一致。

    4 結(jié)論

    本文通過嬰兒配方羊奶粉對(duì)幼齡動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其蛋白質(zhì)消化率研究,最終得出如下結(jié)論:嬰兒配方羊奶粉中蛋白質(zhì)的消化率較高,能夠較快地被機(jī)體消化吸收;嬰兒配方羊奶粉組幼齡動(dòng)物的身長(zhǎng)、體重,奶粉的熱能效率、蛋白質(zhì)功效比及食物利用率都明顯高于其他兩個(gè)對(duì)照組。由此說明,嬰兒配方羊奶粉具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,能夠有效的促進(jìn)幼齡動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育,是優(yōu)良的母乳替代品。

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