甲型肝炎滅活疫苗(人二倍體細胞)生產(chǎn)中去氧膽酸鈉殘留量測定方法的建立

韓中山

(河北省唐山怡安生物工程有限公司 河北唐山 063020)

甲型肝炎滅活疫苗(人二倍體細胞)生產(chǎn)流程中提純工藝階段需用去氧膽酸鈉進行細胞裂解，為此須控制生產(chǎn)工藝中殘留去氧膽酸鈉的含量。本文應用紫外分光光度法對殘留去氧膽酸鈉濃度進行比色測定，結果表明在此實驗條件下，標準去氧膽酸鈉濃度在10～80μg/mL范圍內呈現(xiàn)比較好的線性關系(r2在0.96～0.99之間)，提示該方法可用于甲型肝炎滅活疫苗殘留去氧膽酸鈉殘留量[1]的測定。

1 材料與方法

1.1 主要材料及試劑 去氧膽酸鈉對照品溶液(100μg/mL)、60%醋酸溶液、43.5%硫酸溶液。

1.2 主要儀器 SPECTRO UV－VIS AUTO紫外分光光度計Labomed，Inc，U.S.A。

1.3 檢測方法 精密量取供試品1.0mL，置50mL比色管中，加43.5%硫酸溶液14.0mL，搖勻，于70℃加熱20分鐘，冷卻至室溫，在387nm處測定吸光度。標準曲線:精確吸取去氧膽酸鈉對照品溶液(100μg/mL)0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL于50mL比色管中，各加60%醋酸溶液至1.0mL，使去氧膽酸鈉濃度分別為 0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL，加 43.5% 硫酸溶液 14.0mL，搖勻，于 70℃加熱20分鐘，冷卻至室溫，在387nm處測定各管吸光度。以標準去氧膽酸鈉濃度(X)為橫坐標，以相應濃度的吸收度(Y)為縱坐標作圖，將X值、Y值輸入計算機，應用統(tǒng)計學軟件STA1(14)進行數(shù)據(jù)處理，得一標準曲線回歸方程，由回歸方程及樣品的稀釋倍數(shù)計算出樣品的去氧膽酸鈉含量。

2 結果

2.1 標準曲線(99%可信限范圍) 取不同濃度的去氧膽酸鈉標準液，測定吸光值，重復3次，相關系數(shù)在0.9697～0.9864之間。表明去氧膽酸鈉濃度在10～80μg/mL范圍內，去氧膽酸鈉標準溶液與吸收度具有較好的線性關系，見表1。

表1 標準曲線回歸方程及相關系數(shù)

2.2 6批甲型肝炎滅活疫苗原液去氧膽酸鈉殘留量測定結果

應用該方法進行6批疫苗去氧膽酸鈉含量測定，每批疫苗檢測6次，結果去氧膽酸鈉含量均小于10μg/mL，見表2。

表2 6批甲型肝炎滅活疫苗去氧膽酸鈉含量測定結果

3 討論

3.1 標準液濃度的確定 3條標準曲線在10～80μg/mL五個濃度下所測得的O.D值在0.008～0.08范圍內，而根據(jù)理論吸收值在0.3～0.7之間比較穩(wěn)定，標準去氧膽酸鈉濃度應選擇在100～800μg/mL。由于甲型肝炎滅活疫苗原液中去氧膽酸鈉含量極低，所以標準去氧膽酸鈉濃度還應在10～80μg/mL。因此要求操作人員在測量過程中準確、認真，將相關系數(shù)r2控制在0.96以上，以保證結果的可信度。

3.2 通過六批疫苗去氧膽酸鈉含量測定的結果可以看出，去氧膽酸鈉含量均小于10μg/mL，說明甲型肝炎滅活疫苗原液生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可行，建議甲型肝炎滅活疫苗殘留去氧膽酸鈉含量質量標準小于10μg/mL。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.124