氣相色譜法測定廣藿香油中百秋李醇含量

陳桂琴，羅香，李桂生，黃優(yōu)生，陳瑛

（江西省分析測試研究所，南昌 330029）

廣霍香油是從廣霍香嫩葉中通過分子蒸餾法而得［1］，是一種應(yīng)用廣泛的天然香料。在工業(yè)生產(chǎn)中，廣霍香油定香性能優(yōu)越，是一種常用的定香劑；在醫(yī)藥方面，廣藿香油有明顯的止咳、化痰、抗炎、鎮(zhèn)痛作用［2–3］；在食品加工行業(yè)廣霍香油為允許使用的食用香料［4］，主要用于可樂型飲料等。百秋李醇作為廣藿香揮發(fā)油的主要成分，是歷版《中華人民共和國藥典》規(guī)定的用于評價廣藿香油質(zhì)量的指標成分［5］。目前對廣藿香油中百秋李醇的測定主要采用氣相色譜法，定量方法有內(nèi)標法［6］與外標法［7］，但哪種定量方法更準確、更精密未見報道。筆者對兩種定量方法在廣霍香油中百秋李醇含量的測定中的差異進行比較。而以往的檢測中，檢測時間較長，筆者通過對色譜柱的選擇以及柱溫程序升溫過程的優(yōu)化，有效縮短檢測時間，為廣藿香油中百秋李醇的測定提供了一種簡單、快速、準確的測定方法。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC–2010型，日本島津公司；

電子分析天平：Mettler Toledo Al204型，瑞士梅特勒–托利多公司；

廣霍香油：江西吉水縣金海天然香料科技有限公司；

百秋李醇對照品：30 mg/支，中國藥品生物制品檢定所；

正十八烷內(nèi)標物：色譜純；

內(nèi)標溶液的配制：準確稱取正十八烷2.500 0 g，用正己烷溶解并定容至100 mL，得25.0 mg/mL正十八烷內(nèi)標溶液；

對照品溶液的配制：準確稱取百秋李醇對照品250 mg置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，搖勻，配制成25.0 mg/mL百秋李醇標準工作液。取此使用液1 mL置于25 mL容量瓶中，再加入1 mL正十八烷內(nèi)標溶液，用正己烷定容，搖勻，配制成百秋李醇標準溶液。該標準溶液中百秋李醇含量為 1.0 mg/mL，內(nèi)標為 1.0 mg/mL，取 1 μL 進樣；

供試品溶液的配制：精密稱取廣霍香油0.1 g，正己烷溶解，再加入1 mL正十八烷內(nèi)標溶液，定容至25 mL，搖勻，待測；

實驗所用其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色 譜 柱：DB–5MS（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國安捷倫公司）；進樣口溫度：250℃；程序升溫：柱溫起始溫度150℃，并保持8 min，然后以5℃/min的速率升溫至180℃，保持2 min；氫火焰離子化檢測器（FID）溫度：250℃；分流比：30∶1；空氣流量：400 mL/min；載氣壓力：100 kPa；線速度：44.6 cm/s；氫氣流量：40 mL/min；進樣量：1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

取同一供試品溶液，分別使用DB–5MS（30 m×0.32 mm，0.25μm）、DB–1（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB–1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB–WAX（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色譜柱進行測定，結(jié)果顯示，采用DB–5MS測得的峰形對稱度以及樣品分離度優(yōu)于其它色譜柱，故本方法選擇DB–5MS色譜柱。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

為了保證樣品氣化完全，分析時間短，分離度高，且與內(nèi)標正十八烷的分離度大于2.0，經(jīng)過多次實驗，最終確定進樣口溫度為250℃；程序升溫，起始溫度150℃，保持8 min，然后以5℃/min的速率升溫至180℃后，保持2 min；氫火焰離子化檢測器（FID）溫度250℃；分流比30∶1。在選定的該實驗最優(yōu)條件下，樣品色譜圖如圖1所示。

圖1 樣品的色譜圖

2.3 內(nèi)標法與外標法定量結(jié)果比較

取不同批次的廣藿香油共3個批次，在1.2色譜條件下，分別用內(nèi)標法與外標法檢測，結(jié)果見表1。

表1 內(nèi)標法與外標法測定結(jié)果的比較 %

由表1可見，內(nèi)標法和外標法測得的3個含量的相對標準偏差均小于5%，雖然兩種定量方法均可滿足檢測工作的需要，但從測定精度來考慮，內(nèi)標法測定結(jié)果的相對標準偏差明顯小于外標法的相對標準偏差，表明內(nèi)標法在精密度方面優(yōu)于外標法，故本實驗選擇內(nèi)標法。

2.4 工作曲線與檢出限

精密移取25.0 mg/mL百秋李醇標準工作液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 mL 置 于 25 mL 容 量瓶中，分別加入1.0 mL正十八烷內(nèi)標液，用正己烷稀釋定容，搖勻，在1.2色譜條件下進樣分析。以百秋李醇與內(nèi)標物的峰面積比（x）對百秋李醇濃度（y）回歸，得到回歸方程y=0.014 576+0.865 76x，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，線性范圍為0.2～2.0 mg/mL。以3倍基線噪音計算檢出限，計算得方法的檢出限為 1 μg/mL。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液，每隔1 h進樣1次，在10 h內(nèi)記錄峰面積，峰面積測定結(jié)果的相對標準偏差為2.01%（n=6），表明在10 h內(nèi)被測溶液是基本穩(wěn)定的。

2.6 精密度試驗

取同一批號的廣藿香油6份，按供試品溶液的配制方法制得6份溶液，按1.2色譜條件測定，結(jié)果見表2。由表2可知，相對標準偏差為1.22%（n=6），表明該方法精密度良好。

表2 精密度試驗結(jié)果 %

2.7 加標回收試驗

精密稱取同一批號廣藿香油0.1 g共6份，用正己烷溶解，分別加百秋李醇 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5 mg，再加入1 mL正十八烷內(nèi)標溶液，搖勻，并定容至25 mL，按1.2色譜條件進樣測定，結(jié)果見表3。由表3可知，該方法測定結(jié)果準確可靠，可用于測定廣藿香油中百秋李醇含量。

表3 加標回收率試驗結(jié)果

3 結(jié)論

采用毛細管色譜柱氣相色譜法測定廣藿香油中百秋李醇，實驗結(jié)果表明，內(nèi)標法定量比外標法具有更好的精密度和準確度。該法簡便快速，測定結(jié)果準確，重現(xiàn)性高，為廣藿香油質(zhì)檢工作提供了更為準確、快速的方法。

［1］陳慧，張金巍，朱合偉，等.分子蒸餾法純化廣藿香揮發(fā)油中廣藿香醇［J］.中草藥 .2009，40(1): 60–63.

［2］趙書策，賈強，廖富林，等.廣藿香提取物的止咳、化痰、平喘藥理研究［J］.中成藥，2008，30(3): 449–450.

［3］趙書策，賈強，廖富林.廣藿香提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛藥理研究［J］.中成藥，2007，29(2): 285–487.

［4］GB 2760–2011 食品安全國家標準 食品添加劑使用標準［S］.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京: 化學(xué)工業(yè)出版社，2005: 272.

［6］劉青，江波，于宗淵.氣相色譜法測定廣藿香揮發(fā)油中廣藿香醇的含量［J］.山東醫(yī)藥，2007，47 (2): 3.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典: 一部［M］.北京: 化學(xué)工業(yè)出版社，2010: 373.