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    利用生物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室 開展實(shí)驗(yàn)教學(xué)

    2013-08-17 13:02:44李海英
    中國現(xiàn)代教育裝備 2013年4期
    關(guān)鍵詞:過火外植體菊花

    李海英

    我校于2009年建立了簡易生物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室。在初中階段開展組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)面臨著技術(shù)和條件上的困難。為了更好地開展組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教學(xué),自組織培養(yǎng)室建立以來,我們一直進(jìn)行植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的探索,通過外出學(xué)習(xí)、拉練觀摩、上網(wǎng)查詢等方式完善組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過程,取得了點(diǎn)滴成績。本文以菊花的組織培養(yǎng)為例,詳細(xì)論述初中階段組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的開展情況。

    一、面臨的困難

    學(xué)校缺乏相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室和儀器設(shè)備,沒有專職的植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教師,負(fù)責(zé)植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)的教師往往擔(dān)任幾個班的生物課教學(xué)工作,針對這種現(xiàn)狀,就要求植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教師根據(jù)現(xiàn)有條件利用好有限的時(shí)間,創(chuàng)造性地開展工作,以最低的成本、最少的時(shí)間順利完成植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)。

    二、實(shí)驗(yàn)室

    兩個房間80 m2左右,一間用于玻璃器皿的清洗和貯存以及培養(yǎng)基的制備,另一間用做培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作,在清洗玻璃器皿和制備培養(yǎng)基時(shí)要分開進(jìn)行,以免影響培養(yǎng)基的成分。

    三、儀器設(shè)備

    天平、冰箱、高壓滅菌鍋(可用家用高壓鍋代替)電爐、超凈工作臺、酒精燈、解剖刀、鑷子、解剖剪、三角瓶、可調(diào)移液器(10 uL,200 uL)、烘干箱、大細(xì)口瓶或塑料瓶、封口膜、pH試紙、培養(yǎng)皿。其中大部分可從生物或化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中找到。

    四、實(shí)驗(yàn)藥品

    干粉,1 mg/mL 6-BA,0.5 mg/mL NAA,10%NaOH溶液,10%的NaClO溶液(可用0.1%升汞溶液或84消毒液代替),70%的酒精,pH試紙,蛭石,珍珠巖,無菌水。

    五、實(shí)驗(yàn)的開展

    可將學(xué)生分成若干組,每組成員3~5名,不宜太多,否則效果不好。

    六、選材

    這個步驟十分關(guān)鍵,需要選擇一些容易成活、容易操作的草本植物,比如菊花、煙草等。一方面可以提高幼苗的成活率,另一方面可以適當(dāng)省略其中的一些步驟,減少教師的工作量,減輕負(fù)擔(dān),節(jié)省時(shí)間,否則可能會出現(xiàn)將來移栽煉苗時(shí)成活率不高,打擊學(xué)生的積極性,達(dá)不到預(yù)期目的。

    七、實(shí)驗(yàn)過程

    實(shí)驗(yàn)過程以菊花為例。

    1.選材及處理

    外植體如果是無菌苗最好,可直接接種。如果不是,需進(jìn)行以下處理:選取菊花的莖頂端、嫩莖段或葉片,其中莖頂端可直接生根,其余生芽,現(xiàn)以莖段為例,取帶1~2個芽的菊花嫩莖段若干,先用洗衣粉清洗,然后用自來水沖洗20 min(用紗布包住材料系在水龍頭上打開即可),然后置于超凈工作臺上,用70%的酒精浸泡30 s,用無菌水沖洗2~3次,用10%的NaClO溶液消毒20 min(可用0.1%升汞溶液或84消毒液來代替)無菌水沖洗2~3次,這樣就可以接種了(消毒的時(shí)間可靈活掌握,一般幼嫩的組織時(shí)間要少一些,老組織需要時(shí)間長一些)。

    2.培養(yǎng)基的配制

    建議直接購買干粉,這樣可節(jié)省很多時(shí)間和精力,把干粉加熱融化后加入6-BA,NAA。以配制1 L培養(yǎng)基為例,外植體為葉時(shí)需加入1 mg/mL 6-BA 2mL,0.5 mg/mL NAA 1mL;外植體為芽時(shí)加入1 mg/mL 6-BA 3mL,0.5 mg/mL NAA 0.2mL。誘導(dǎo)生根時(shí)加入0.5 mg/mL NAA 0.2mL,然后用pH試紙檢測pH值是否為5.8,如果過小就加入NaOH溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)(pH值過小培養(yǎng)基不易凝固,過大則培養(yǎng)基太硬影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收)。調(diào)好后就可以分裝入三角瓶中,每個三角瓶中20mL左右,蓋上瓶蓋或封口膜,放入滅菌鍋或高壓鍋中消毒20 min后取出即可使用,如果缺少三角瓶可用廣口瓶、罐頭瓶或燒杯來代替。缺少封口膜可將剪成正方形的塑料紙對折兩次,用燒熱的鐵釘在中央燙幾個小洞,然后用牛皮紙或?yàn)V紙塞入塑料紙中,將洞全部遮住即可使用,這樣可根據(jù)自己的需要做出任意大小的封口膜。

    3.接種

    超凈工作臺在接種前30 min開紫外燈,前10 min送風(fēng),接種器械和器皿可先放在滅菌鍋或高壓鍋中滅菌20 min,取出后放入烘干箱中烘干備用。接種時(shí)接種人先洗凈雙手,換好專用實(shí)驗(yàn)服,上超凈工作臺后,點(diǎn)燃酒精燈,用酒精棉球擦拭雙手,特別是指甲處,然后擦拭工作臺面;再將鑷子、剪刀、解剖刀從頭至尾過火一遍,然后反復(fù)過火尖端處(如果鑷子、剪刀、解剖刀和培養(yǎng)皿沒有經(jīng)過高壓蒸氣滅菌,可先用酒精棉球擦拭再將鑷子、剪刀和解剖刀從頭至尾過火一遍,然后反復(fù)過火尖端處,對培養(yǎng)皿要過火烤干),接種時(shí),接種員雙手不能離開工作臺,不能說話、走動和咳嗽等。每次用過的器械都要重新進(jìn)行消毒后再使用。

    4.培養(yǎng)

    接種后放在光照培養(yǎng)箱或光照培養(yǎng)架上培養(yǎng),溫度控制在23~25 ℃。如果所用的菊花的莖帶有頂芽,10天左右就可以生根,如果是其他部分則要經(jīng)過脫分化形成愈傷組織,再分化出芽,然后接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)生根培養(yǎng)(如圖1所示)。

    圖1

    5.浸染問題

    若接種后1~2天發(fā)現(xiàn)被污染為細(xì)菌污染,若3~10天才發(fā)現(xiàn)被污染則主要是霉菌污染。發(fā)現(xiàn)有污染后需立即移走處理掉否則可能污染其他試管苗。如果一瓶中只在培養(yǎng)基中出現(xiàn)了污染,沒有接觸到外植體,可將外植體轉(zhuǎn)移到其他的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng),外植體有可能成功保留。

    6.煉苗

    先在室溫條件下閉瓶鍛煉3天,再開瓶鍛煉3天。

    7.移栽

    當(dāng)菊花的根長到3 cm左右比較發(fā)達(dá)時(shí),就可進(jìn)行移栽,具體過程是:去凈瓊脂,可先在滅過菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)再轉(zhuǎn)移到土壤中。對于菊花來說,直接移栽到土壤中即可成活。

    八、結(jié)束語

    近年來生物組織培養(yǎng)技術(shù)在農(nóng)業(yè)育種方面得到廣泛的應(yīng)用,大大提高了農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。在園藝學(xué)上應(yīng)用也非常廣泛,特別是對于初中學(xué)生,如果能掌握這門技術(shù),對自身發(fā)展十分有利,所以每位參與植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的教師需共同努力、認(rèn)真研究、科學(xué)探索、靈活運(yùn)用,只有這樣才能探索出更多的植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)成果,讓盡可能多的學(xué)生接觸到并掌握這項(xiàng)技術(shù),對促進(jìn)初中植物組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的發(fā)展意義重大。

    [1]高亞紅.植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的探索[J].教學(xué)儀器與實(shí)驗(yàn),2010(12):34.

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