夏蠣金消顆粒水提工藝的優(yōu)化及制粒研究*

河北中醫(yī)學院研究生學院

胡家玉 李國川△ 馬 盼 閆嬌嬌 范煥芳△△(石家莊 050091)

提要 目的：確定夏蠣金消顆粒劑的制備工藝。方法：采用L9(34)正交試驗法，以出干膏率和橙皮苷含量為指標并取其權重后綜合評分，考察提取次數(shù)、提取時間、加水倍量3個因素對提取工藝的影響，用高效液相色譜法(HPLC)測定橙皮苷含量; 采用醇沉法純化夏蠣金消顆粒，以橙皮苷轉(zhuǎn)移率和純度為指標，單因素試驗考察其醇沉條件。以成型率、顆粒性狀為指標篩選成型工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為：煎煮2次，2 h/次，加8倍水。其醇沉條件為藥液含乙醇體積分數(shù)60%，相對密度1.12( 80℃)。干膏粉和糊精按 1∶2 混合均勻后以60%乙醇濕潤劑制成顆粒。結(jié)論：優(yōu)選的提取和制備工藝簡單且合理可行，可為夏蠣金消顆粒的生產(chǎn)以及進一步研究提供技術支持。

夏蠣金消方是在《太平惠民和劑局方》二陳湯的基礎上化裁而成，由清半夏、川貝母、陳皮等13味藥組成，具有化痰解毒、益氣養(yǎng)陰功效，臨床上用于治療痰毒互結(jié)、氣陰兩虛型肺癌。本研究對夏蠣金消顆粒水提工藝進行優(yōu)化，并明確制粒方法，使其質(zhì)量可控、服用方便、更能融入于現(xiàn)代生活方式。[1]

1 實驗材料

1.1 實驗用藥 夏蠣金消方由清半夏、川貝母、陳皮、牡蠣、茯苓、石見穿、黃芪、沙參、當歸、蜜紫苑、款冬花、貓爪草、甘草13味中藥飲片組成，為河北中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥劑科提供。

1.2 試劑 水為純凈水；乙腈、甲醇、磷酸為色譜純；其他試劑為分析純；橙皮苷對照樣品(中國科學院成都生物研究所，批號：MUST-18032502)；甜菊糖甙(曲阜香州甜菊制品有限責任公司)。

1.3 儀器 98-1-B型電子調(diào)溫電熱(天津市泰斯特儀器有限公司)，SHZ-D(III)循環(huán)水式真空泵，KQ2200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，YP2001N電子天平(SHANGPING)，離心機，粉碎機，干燥儀，高效液相色譜儀，色譜柱(5 μm，4.6×200 mm)，噴霧干燥器(山東天力干燥設備有限公司)，分析天平(MSE125P-100-DU德國 Sartorius)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝

2.1.1 藥材吸水量的考察：按處方比例稱取清半夏、川貝母、陳皮、牡蠣、茯苓、石見穿、蜜紫菀、蜜款冬花、黃芪、沙參、當歸、貓爪草、生甘草，總計175 g，加水1 750 mL(10倍水量)浸泡，觀察藥材滲透情況，每隔0.5 h稱重濕藥材1次，2 h后所稱藥材重量不變，以公式藥材吸水率=(藥材濕重-藥材干重)/藥材干重[2]計算出方中藥材的吸水率為86%。

2.1.2 L9(34)正交試驗因素水平：通過參閱文獻，選擇提取次數(shù)(A)、提取時間(B)、加水倍數(shù)(C)3個因素, 另設D(空白列)為因素4，用來觀察隨機誤差的大小。每個因素設定3個水平。詳見表1。

2.2 提取工藝考察指標及評價方法 夏蠣金消方以半夏、石見穿為君藥，陳皮、牡蠣、茯苓等為臣藥，《日華子本草》記載陳皮“可破癥瘕痃癖”，《藥典》述其功效為理氣健脾，燥濕化痰?，F(xiàn)代藥理研究表示陳皮中主要的化學成分為橙皮苷(hesperidin)等黃酮類化合物。[3]陸紅玲等[4]通過實驗證明橙皮苷可以誘導或促進非小細胞肺癌A549/DDP 細胞凋亡，樊佳新等[5]也證實橙皮苷可通過干擾 PI3K-Akt 信號通路，來影響肺癌細胞蛋白合成，從而體現(xiàn)其明顯的抗腫瘤活性。故將橙皮苷含量作為主要考察指標，占權重70%；出干膏率做為次要考察指標，占權重30%。

按處方比例稱取18份復方藥材，每份175 g，分9組，每組平行工藝2份，按照表1進行實驗，在藥材吸水基礎上加水煎煮提取，水蒸氣蒸餾法收集揮發(fā)油備用。將所提取濾液按分組合在一起濃縮，在濃縮的同時加入2 g甜菊糖甙以達到調(diào)味目的，[6]濃縮后噴霧干燥，使之成干浸膏后粉碎，最后將干膏粉進行稱重，計算出干膏率。

3個因素對出干膏率及橙皮苷含量影響程度的順序為A>B>C，提取次數(shù) A影響最大，提取時間B次之，加水倍數(shù)C影響不顯著，最佳組合是 A3B2C2,根據(jù)正交實驗結(jié)果，提取時間選擇最長，但煎煮2次的評分值與煎煮3次的評分值差異不顯著，加8倍水與加10倍水的評分值差異不大，因此可煎煮2次，用8倍水。綜合考慮，最終選擇A2B3C2，最優(yōu)提取工藝為：煎煮2次、每次2 h、8倍水。既考慮了生產(chǎn)效益、出干膏率，又兼顧了提取物中有效成分的含量。詳見表2～表4。

表2 水提取工藝L9(34)正交實驗

表3 出干膏率的正交試驗結(jié)果方差分析

表4 橙皮苷含量的正交試驗結(jié)果方差分析

2.3 提取工藝驗證實驗 為驗證提取工藝的穩(wěn)定性，按上述正交試驗所優(yōu)化的提取工藝重復提取3次，測定提取液中的橙皮苷含量及出干膏率。結(jié)果提示，按優(yōu)化的水提工藝所得藥液有效成分及出干膏率接近，比較穩(wěn)定，具有可操作性，詳見表5。

表5 提取工藝驗證

2.4 醇沉濃度及相對密度 按處方10倍比例稱取藥材共1 750 g，按正交試驗所選最佳工藝方法進行提取，濃縮至相對密度1.11～1.15(60℃)，分3份，分別加入乙醇(邊加邊攪拌)至乙醇體積含量為55%、60%、65%，靜置24 h，取上清液減壓回收乙醇，依據(jù)上述色譜條件進行含量測定，測得橙皮苷含量分別為16.7、18.4 、17.6 mg/g，噴霧干燥后，將所得干膏粉稱重，計算出干膏率分別為 17.2% 、16.5%、15.7%。綜合考慮，用60%濃度的乙醇沉淀，橙皮苷含量最大、效果最佳。經(jīng)醇沉后，出干膏率與水提取后的平均值25%比較，平均轉(zhuǎn)移率 > 60%。

按處方10倍比列稱取藥材共1 750 g，按正交試驗所選最佳工藝方法進行提取，分3份，每份濃縮至相對密度：1.06～1.10、1.11～1.15、1.16～1.20。醇沉至乙醇濃度為60%。靜置24 h，取上清液減壓回收乙醇，然后進行橙皮苷含量測定，測得橙皮苷含量分別為18.1、18.5、17.6 mg/g，噴霧干燥后，出干膏率分別為16.8%、16.1%、15.5%。綜合考慮，醇沉相對密度應控制在1.11～1.15(60℃)。

2.5 制劑工藝

2.5.1 輔料的選擇：根據(jù)經(jīng)驗和文獻報道，顆粒劑的輔料多選擇蔗糖、淀粉、糊精，本實驗選用糊精作為輔料，是因為蔗糖的吸濕性不利于有糖尿病等基礎疾病患者的健康[7]，而且糊精較淀粉黏性小，可提高顆粒成型性。取干膏粉稱重后分3份，按表5加入不同重量的糊精，混合均勻后制粒來確定輔料用量。以制粒過程中黏度、顆粒形狀及成型率以及顆粒溶解度為指標，確定輔料用量為干膏粉∶糊精= 1∶2。詳見表6。

表6 干膏粉與糊精的比例考察

2.5.2 乙醇潤濕劑濃度：進行預試驗，以干膏粉∶糊精= 1∶2比例取3份，干膏粉每份為1付處方量，分別混合均勻后滴入3個濃度乙醇制軟材，以制粒過程中的現(xiàn)象為指標，對乙醇濃度進行考察，得出乙醇潤濕劑濃度80%時所制顆粒性狀最佳，但從臨床用藥安全性出發(fā)，應盡量降低乙醇濃度，綜合考慮選用乙醇潤濕劑濃度為60%。詳見表7。

表7 乙醇濃度的考察

2.5.3 濕法制粒：按配方比例取飲片藥材，按上述工藝提取，制備干膏。根據(jù)預實驗，取干膏粉與糊精適量，以1∶2比例混合均勻，用濃度60%乙醇為潤濕劑制備軟材，制成“握之成團、觸之即散”[8]的軟材，然后用16目篩進行制粒，制好的濕顆粒干燥后整型，噴入水蒸汽蒸餾法提取所得揮發(fā)油分裝、密封即得整齊顆粒。

3 討論

現(xiàn)代研究證實二陳湯可作為治療肺癌的基礎方[9]，其治療痰濕證的咳嗽、喘證療效顯著[10]，《丹溪心法附余》方論著此方“燥濕滲濕則不生痰，利氣降氣則痰消解?！狈稛ǚ冀淌谡J為肺癌的發(fā)生與痰、毒、虛密切相關，其主要病機為痰毒互結(jié)，氣陰兩虛，結(jié)合臨床在二陳湯的基礎上，加用解毒、益氣養(yǎng)陰之品，創(chuàng)立夏蠣金消方，方中以清半夏、石見穿為君藥化痰散結(jié)、清熱解毒。陳皮、茯苓助清半夏利濕化痰，兼理氣健脾；川貝母、蜜紫菀、蜜款冬花潤肺化痰止咳；牡蠣滋陰潛陽，軟堅散結(jié)；黃芪補氣養(yǎng)血；沙參養(yǎng)陰清肺，益胃生津；貓爪草清熱解毒散結(jié)共為臣藥，既助君藥化痰散結(jié)解毒，又兼具益氣養(yǎng)陰之效。當歸佐助黃芪補益氣血為佐藥。甘草為使藥調(diào)和藥性。諸藥合用以達化痰解毒、益氣養(yǎng)陰之功效。

本方在水提取的過程中，飲片中多糖及脂溶性物質(zhì)等隨有效成分一起溶出，使浸膏黏性過大，而中藥原粉黏性相對較小，為了降低顆粒黏性，嘗試選擇將粉性較大的川貝母及清半夏粉碎代替輔料來提高載藥量，但實際操作證明，此法并不能有效降低顆粒的黏性。本試驗采用的處理方法為水提醇沉法，藥液經(jīng)濃縮后醇沉，然后將藥液噴霧干燥后再濕法制粒。經(jīng)試驗驗證醇沉時乙醇濃度為60%為最佳濃度，此時橙皮苷測得量為最大，有效成分保留效果最佳。醇沉一方面純化制劑、保證其質(zhì)量和穩(wěn)定性[11]，另一方面適當降低了干膏得率，可在維持活性成分水平的同時減小服藥劑量；將浸膏噴霧干燥后用乙醇潤濕劑快速制粒也降低了顆粒的黏性。

本實驗對夏蠣金消顆粒劑的制備工藝進行了研究，通過正交試驗設計，綜合考慮各種因素及實際條件，確定煎煮2次、每次2 h、8倍水為最佳提取工藝。并對醇沉濃度及相對密度進行優(yōu)選，確定60%乙醇及1.11～1.15( 80℃)的相對密度沉淀效果最佳。濕法制粒所得顆粒耐磨、美觀且成型率高[12]，因此夏蠣金消顆粒劑的制備采用傳統(tǒng)濕法制粒。從輔料的無糖添加角度出發(fā)，用糊精做為輔料，并進行不同比例的比較，當干膏粉∶糊精= 1∶2時，所得顆粒成型度高。也應重視乙醇潤濕劑濃度的選擇，濃度過低時，顆粒黏性大，不易過篩，濃度過高時，顆粒太松散，而且會增加顆粒的醇含量，因此本實驗選用60%的乙醇作為潤濕劑，制得整齊顆粒。綜合以上研究，本實驗工藝穩(wěn)定且簡便可行，可為夏蠣金消顆粒的進一步研究提供實驗依據(jù)。